大鼠神经干细胞分离（小鼠神经干细胞的分离及培 🌴 养实验）
- 作者: 李晴鸢
- 来源: 投稿
- 2025-06-11
1、大鼠神经干细 🐳 胞分 🕷 离
大鼠 🐞 神经干细胞分 🌿 离
材料：大鼠脑组 🐡 织 💐
培养基（含神经生长因子和表 🦊 皮生长因子）
消化酶 🦆 （胰蛋白酶 🐼 和 🦟 胶原酶）
离心机培养皿和 🐠 培养瓶 🌵
显微镜步骤：
1. 获取 🌼 脑组织 🐘
在无菌条件 🐦 下处 🐝 死大鼠并 🌿 取出大脑。
除去脑 🕸 膜 🌻 和血管。
切取感兴的脑区域，如海马体 🌴 或皮层 🦟 。
2. 制 🐵 备 🦍 单细胞悬 🌾 液
将脑 🌹 组织放入含有消化酶的培养基中 🐧 。
常温孵育 30 分钟至 1 小时 🐎 ，同时摇晃 🐴 。
用移液器吹打悬液以形成单细 🌷 胞悬液。
3. 离 🐕 心和洗涤
将 🌳 悬液以 200 x g 离心 10 分钟。
用培养基 🌺 洗涤细胞沉淀并重新悬浮。
重复 🪴 离心和洗 🦊 涤 🌺 步骤 23 次。
4. 培 🕊 养基培养
将细 🕸 胞悬浮液接 🦟 种到含有神经生长因子和表皮生长因子的培养基中。
将培养 🌷 基置于 37°C、5% CO2 的培养箱中。
每 🌷 隔 🌿 23 天更换培养基 🐦 。
5. 神经干细 🦊 胞 🌻 鉴定
培养 12 周后，神经 🍁 干细胞将形成神经球 🌳 体 🐡 。
用免疫细胞化学染色或流式细胞术鉴定神经干细胞标 🌳 志物，如 Nestin、GFAP 和 Sox2。
6. 传代和 🐛 分 🌻 化 🦈
神经球体可以通过机械剪切或酶消化 🌳 传代。
为了诱导神经干细胞分化，可以将它们转 🪴 移到含有特定的生长因子和激素的培养基中。
注 🍀 意 🌲 事项 🐠 ：
使用无菌技 🦉 术以防止污 🐦 染。
仔 🦍 细监测细胞生长并定期更换培养基。
神经干细胞的培养条件可能因所 🐞 使用的脑区域而异。
分离和培养神经 🕸 干细胞是一个技术要求高的过程，需要经验和专业知识。
2、小鼠神经干细 🐒 胞的分离及培 🐝 养实验
材料 🌾 和 🐱 试 🌹 剂
小鼠脑组织 🐕 ： 刚出生小 🌸 鼠 🐴 脑
培 🦄 养基 🌵 ： 神经元培 🦈 养基（如 DMEM/F12）
胰蛋白酶 💮 胰蛋白 🐡 酶 🐱 ： 0.25% 溶液
分离 🐴 缓冲液： Hank's 平衡盐溶液 🦁 （HBSS）
离心 🌻 机离 🐘 心机 🐎 ： 和离心管
培养皿 💐 和培养瓶： 无菌 🐅 培养皿和培养 🐕 瓶
显 🐬 微镜 🐝 ： 倒置显 🌳 微镜
细胞计数器细胞 🐴 计数 🦅 器： 或血细 🐺 胞计数板
实验步骤1. 获得 🐯 小鼠 🐋 脑组 🌿 织
将刚 🍁 出 🦋 生的小 🍁 鼠处死。
用无菌器械切开 🌼 小鼠颅骨，取出大脑。
去除 🪴 脑膜。
2. 神 🌻 经干细胞分离
将大脑组 🐴 织切成小块，放 🌼 入 🐎 分离缓冲液中。
在胰蛋白 🐋 酶溶液中孵育组织1520分钟，37℃，轻柔振荡。
用移 🪴 液枪吹打组织，将其解离为单 🦈 细 🌵 胞悬液。
将细胞悬液过滤通过 🐝 滤70μm网，去除组织碎片。
3. 离心和收集神 🐦 经干细 🐯 胞
将细胞 🦆 悬液以1200rpm 离心 🌺 5分钟 🐴 。
小 🌻 心吸弃上清液，沉 ☘ 淀即为神经干细 🐱 胞。
4. 培养 💐 神 🌸 经干细胞
将神经干细胞重 🦉 悬于神 🌷 经 🌵 元培养基中。
将细胞接种到培养皿 🕸 或培养瓶中。
在37℃、5% CO2 培养箱中孵 🦁 育。
5. 观 🌵 察和监测细胞生长 🐕
定期观察细胞生长情 🐟 况。
使用显微镜检查 🐅 细胞 🌴 形态和增殖。
使用细胞计 🦉 数器或血细胞计数板计 🌷 数细胞数量 🍁 。
注意事项在无菌条件 🐋 下进行所有操作。
小心处理神经干细胞，避免损伤 🌸 。
定期更换培 🐶 养基，确保细胞健康 🌺 生 🐡 长。
3、大鼠神经干细胞分离 🦊 方法 🌿
材料：妊娠晚期大 🦁 鼠
无菌手术器械 🦟
无菌培养 🐶 皿
无菌离心 💐 管 🦅
含 2 mM EDTA 的 Hanks 平衡 🐺 盐溶液 (HBSS)
0.25% 胰蛋 🌷 白 🐎 酶 🕊 /EDTA 溶液
DMEM/F12 培 🐴 养液，含 10% 胎牛 🦋 血清 🦍 (FBS)
多 🍀 肽 coated 六孔 🦄 板 🍀
步骤：1. 解 🌺 剖脑组 🌴 织：
将妊娠晚 🌻 期大鼠腹腔麻醉。
在无菌条件下，解剖出 1416 天，大的胚胎的大脑小心 🌴 剥离脑膜。
2. 机械 🦄 分 🐞 离：
将大脑组织切成小块，在含 2 mM EDTA 的 HBSS 中用移液管 🐡 吹打 🐟 。
通 🦁 过 70 μm 细胞筛过滤细 🦋 胞 🐴 悬液。
3. 酶消 🌴 化：
将细胞悬 🍁 液转移 🌹 到含 0.25% 胰蛋白酶/EDTA 溶液的离心管中。
于 37°C 孵育 15 分钟，偶尔摇 🐕 晃。
4. 终 🐒 止消 🐒 化和离 🐎 心：
加入等体积 🐴 的 DMEM/F12 培养液，含 10% FBS，以终止消 🦆 化。
以 400 x g 离 🦍 心 5 分钟 🐞 。
5. 重悬 🐧 和密 🐳 度梯度离 🐴 心：
重悬细胞 🦟 沉淀，用 DMEM/F12 培养液冲洗。
在 Percoll 密度梯度 (15%、30%、45%) 上离心细胞悬液，转速为 1,000 x g，持续 20 分 🦆 ，钟无刹车。
6. 神经 🦍 干细 🐦 胞收集：
收集密 🐼 度梯度界面上的 🐯 细胞。
重悬细胞，并转移到多 🦊 肽 coated 六 🐳 孔板 🐛 中。
培养条 🦊 件：
将神经干 🌾 细胞培养在含 20 ng/ml EGF 和 10 ng/ml bFGF 的培 🦊 养 DMEM/F12 液中。
每 34 天更 🍀 换培养 🦟 液 🐘 。
提示：使用高纯度 🦄 的试剂和无菌技术非常重要。
神 🦍 经干细胞在贴壁培养 710 天后开始形成神经营养球 🦈 。
神经干细 🐒 胞可以使用神经生长因子 (NGF) 或脑源性神经营养因子 🦊 (BDNF) 分化为神经元和胶质细胞。
4、大鼠 🐋 神经元细胞系有哪些
大鼠神经元细胞系 🌳 包括 🐛 ：
B35 神经母 🌲 细胞瘤细胞系
C6 胶 🐵 质瘤细胞 🦢 系
PC12 嗜 🐡 铬细胞 🕸 瘤细胞 🌼 系
HN25 神 🍀 经母细胞瘤 🌿 细胞 🦢 系
SHSY5Y 神经母 🐘 细胞瘤 🦉 细胞 🐡 系
NT2 神经瘤 ☘ 细胞系
NG10815 神经胶质 💮 瘤细胞系 🐟
1321N1 星形胶质 🌼 瘤 🐴 细胞系
BV2 小胶质 🐠 细胞系
RBA2a 星形 🌷 胶质 🐘 瘤细胞系
