悬浮干细胞怎么计数（悬浮细 🦢 胞怎么 🦍 做cck8）
- 作者: 李芸汐
- 来源: 投稿
- 2025-07-18
1、悬浮干细胞 🌼 怎么计数
悬浮干细 ☘ 胞计数方法
1. 细 🌸 胞计 🌷 数板
将悬浮细胞悬液稀释至适 🦋 当浓度（通常为 10^510^6 个细胞/mL）。
使用已知体积的细胞悬液装满细胞 💐 计 🕊 数板。
在显微镜下计数特 🌴 定 🐴 区域内的细胞数。
乘以稀释 🕸 因子和样品体积计算总细胞 🦊 数。
2. 自 🐘 动细胞计数器
将悬浮细胞悬 🍀 液稀 🦟 释至仪器推荐浓度。
使用自 🦁 动细胞计数 🦍 器测量细 🐈 胞数。
仪器自动计数 🐯 细胞 🌿 并在屏幕上显示结果。
3. 流式细胞仪 🐋
使用流式细胞仪 🌻 标记目标细胞。
将细胞悬液流过激 🐞 光束光，散射和荧光信 🌸 号被探测器 🐒 检测。
流式细胞仪计数目标细胞 🌷 数并输出数据 🐋 。
4. ViCell? 细 🦊 胞计数器 🦍
这是 🍀 一种专为悬浮细胞计数 🦈 设计的半 🦁 自动化仪器。
使用摄像机和图像分析 🐝 软件来计数细胞。
提供 🐛 快速准确的 🦍 计数结果。
步骤：1. 准备细胞悬液 🌺 ：将悬浮细胞悬液用无菌缓冲液稀释至适当浓度。
2. 选择计数方法选 🌳 择：合适的计数方法 🌾 （见上文）。
3. 计数细胞：按照仪器或方法的说明进行计数 🐟 。
4. 计算浓度：将计 🕷 数结果与稀释因子和样品体积相乘计算，出细胞 🌸 浓度 🌼 。
注 🐵 意 🐒 事 🐦 项：
确保细胞悬液 🐛 均匀混合 🐞 。
使用与 🍀 缓冲液对照进行 🌺 背景校正。
重 💮 复计数以获得准确的平 🐟 均值。
选 🌹 择 🌴 合适的计数方法 🌳 符合实验目的。
2、悬浮细胞怎么 🌵 做 🌳 cck8
悬浮细胞 🐺 CCK8 检测步骤 💮 ：
材料：悬浮细 🐡 胞
CCK8 溶 🕊 液 🌵 （10 mg/mL）
96 孔 🌼 板 🐦
孵育器吸 🐧 光 🌸 度测量仪
步骤：1. 稀释细胞：将悬浮细胞稀释到合适的浓度（通 🦢 常为 15 x 10^4 个 🦅 细胞/孔）。
2. 加入细胞：向每孔 🌴 中加入 🌻 100 μL 的稀释细胞悬液。
3. 加入 CCK8 溶液：在每孔 🍀 中加入 10 μL 的 CCK8 溶液。
4. 孵育：将板放入 37°C、5% CO2 的孵育器中孵育 14 小时，具体 🐒 孵育时间取决于细胞类型和生长 🦋 状态。
5. 测量吸光度：使用吸光度测量仪在 450 nm 波长下测量每 🌷 孔的吸光度。
6. 计算细胞增殖：将 🐳 测得的吸光度值 🐈 减 🐧 去空白对照孔的吸光度值，即得到细胞增殖的指标。
注意：在测量吸光度之前，应，轻轻 🌹 摇晃板以确保细 🕷 胞 🐈 均匀分布。
优化 🐟 孵育时间 🦢 以获得最佳信号强度。
空白对 🕷 照孔应包含所有培养基 🐞 和试 🐎 剂，但不包含细胞。
3、悬浮干细胞怎么 🐋 计 🌾 数出来
悬浮 🍀 干细 🐟 胞计 🌷 数方法
1. 血细胞计数 🦈 仪
将悬浮液稀释至适 🐈 当浓度 🌼 。
使用血细胞计数仪计数活细 🐛 胞。
可能会使用荧 🌳 光或染 🦄 料标记干细胞，以区分它们与其 🐼 他细胞。
2. 流式细 🐱 胞仪
使用标记特定干细胞标志 🐺 物的抗体。
将 🐞 悬浮液通过流式细胞仪，并使用荧光激活细胞 🐶 分选 (FACS) 计数标记的 🌷 干细胞。
3. 克隆形成单元 🐺 (CFU) 测定 🌲
将悬浮液播 🦍 种到培养基 🐞 中 🌲 。
孵育一段 🦅 时间，使干细胞形成菌 🐱 落。
计数菌落以 🐈 估 🌷 计干 🐠 细胞数量。
4. 细 🐈 胞计 🐠 数板
将悬浮 🐝 液稀释并滴 🦢 在细胞计数板的网格上。
使用显微镜 🌼 计数网 🕷 格内的细胞。
乘以稀释倍数 🍁 以获得总细胞数。
5. 活力测 🐴 定
使用如 MTT 或茜素红等染料 🐺 ，测定 🐕 悬浮液中 🐺 的活细胞数量。
染料被活细胞代谢为有色产 🌿 物，然后可以比 🕊 色测定。
注意事 🦊 项：
确保悬浮 🌹 液均匀且无团 🐧 块。
选 🕷 择适 🐳 当的稀释倍数以获得准确计数。
如果使用荧 🐵 光或染料标记，请确 🌼 保光学系统和仪器校准正 🐋 确。
不同类型 🐵 的悬浮干细胞可能需要不同的计数方法。
考虑细胞活力 🐝 和完 🐝 整 🦟 性等因素，以获得准确的结果。
4、干细 🌿 胞悬浮成球实验
干细 🐡 胞悬浮成球实验
目的：评估干细胞在悬浮培养条件下的成 🐞 球能力
验证干细 🐼 胞的自我更新 🦍 和分化潜能
材料：干 🦋 细胞（如胚胎干细胞 🦁 或诱导多能干细胞）
无 🌾 血 🌺 清培养基（如mTeSR1）
低粘附 🐈 培养皿或超低粘附培养皿
细胞计 🐱 数 🐵 器
显微镜步骤：
1. 准备培养基：将 🐬 无血清培养基补充适量的生长因子和补充剂。
2. 传代干细胞：将干细胞从单层培养物中 🐒 传代到低粘附培养皿中。接种密度约为 12 x 10^5 个细胞/ml。
3. 悬 🌵 浮培养：将细胞悬浮在培养基中，并在孵育器中 37°C、5% CO2 的条 🐅 件下培养。
4. 监 🐱 测成球形成：每天观察细胞形态 🦄 和成球形成成 🐈 球。定义为直径大于 100 微。米的细胞聚集体
5. 计数成球：在 🌼 培养的特定时间点（如 47 天），使用细胞计数器或显微镜图像分析软件计数成球。
数据分 🍀 析 ☘ ：
成球效率：计算 🐺 成球数与接种细胞数 🌻 的 🦁 比率。
成 🐼 球大小：测量成球的平均 🌻 直径。
形态 🌼 观察观 🍁 察：成球的形态，是否有紧密性、边 🕷 界清晰性等特征。
预期 🌷 结果 🐝 ：
干细胞在悬浮培养 🐒 条 🍁 件下能够 🌵 形成成球。
成球效率 🐴 和大 🍁 小因干细 🍁 胞类型和培养条件而异。
成球形态 🐞 与干细胞的分 🐟 化潜力相关。
意义：干细胞悬浮成球实验提供了干细胞自我更新和分化能力的关键信息。它广 🐋 泛用于 🦁 研究干细胞分化的 🦄 机制、筛。选新药物和其他生物医学应用
