大鼠骨髓间充质干细胞（大鼠骨髓间充质干细胞T75细胞长 🦉 满有多少细胞）
- 作者: 胡安柚
- 来源: 投稿
- 2025-06-24
1、大鼠 🐒 骨髓间充质 🐎 干细胞
大鼠骨髓间 🐵 充质 🦈 干 🦊 细胞 (BMSCs)
定义:大鼠骨髓中 💐 分离出的多能干细胞，具有自我更新和 🐅 分 🦉 化成多种细胞类型的能力。
来源:大鼠骨髓抽出 🐱 液
表面 🐠 标 🐘 记:
白细 🦋 胞表 🕷 面抗 🐕 原：CD45
间充质干细 🐈 胞 🕸 标志物：CD29、CD54、CD90、CD105
分化 🐎 潜力:
骨细 🐺 胞、软骨细胞、脂、肪细胞、神经细胞肌细胞
应用:组织工程: 用作种 🦢 子细胞来生成新的组织或器官，例如骨 🦟 骼、软骨和肌肉。
再生医学: 用于修复受损或退化的组织 🐵 ，例如骨折、关节炎 🦍 和心脏病。
药物筛 🐅 选: 作 🌲 为模型系统来研究药物的毒性、疗效和药代动力学 🐱 。
细 🦅 胞疗法: 注射到动物体 🐵 内 🐒 以促进组织再生和修复。
优势:获取容 🐛 易 🦉
分化 💮 潜力广
增 🦉 殖能力 🐞 强
免疫 🕸 原性低 🐘
局限性:体外培养 🌲 条件下的稳定性有 🦉 限
衰 🐶 老和分化能 🍀 力下降，尤其是长时间培养 🐎 后
异种移植中的 🐡 免疫排斥 🦍 风险
2、大鼠骨髓间充质 🕷 干细胞细胞T75长 🌿 满有多少细胞
约 500,000 个 🐕 细胞
3、大鼠骨髓间充质干细胞提取 🌵 和 🕷 培养
大鼠骨髓间充质干细胞提取和培养 🐎
材料雌 🦄 性 SpragueDawley 大 🐠 鼠 (812 周 🦄 )
70% 乙 🐠 醇
生理盐 🐘 水 🐕
HBSS (含 🕸 10% FBS)
胶 🐡 原 🐝 酶 🦁 II
αMEM (含 🕸 10% FBS)
培养皿培养瓶
程序
1. 骨髓 🕷 提取
处死大鼠并取出股骨和胫 🐬 骨。
用 70% 乙 🐵 醇 🦈 消毒 🐱 骨骼。
两端剪开 🕊 骨 🐼 骼，小心不要损 🌵 坏骨髓。
用生理盐 💮 水冲洗骨髓腔，收集骨髓悬液。
用 100 μm 滤网 🌻 过滤 🦈 骨髓悬液。
2. 细胞 🐝 培 🦍 养
将 🌷 骨髓悬液悬浮在 🐘 含 10% FBS 的 HBSS 中。
向悬液 🐒 中加入胶原酶 II (最终浓 🐈 度为 0.1%)，在 37°C 下孵育 1 小 🐳 时。
终 💮 止消化反 🕷 应并 🐬 用含 10% FBS 的 αMEM 冲洗细胞。
将细胞悬 🦉 液接 ☘ 种到含 10% FBS 的 🦈 的 αMEM 培养皿中。
3. 细 🕸 胞 🐱 培 🐋 养
将细胞培养在 37°C、5% CO2 孵箱中 🐛 。
每 🦊 34 天更换一次培养基。
当细胞达到 8090% 的汇 🐡 合度时，使用 🐛 胰蛋 🐳 白酶消化细胞并将其传代到较大的培养皿或培养瓶中。
4. 间充 💮 质干细胞 🌲 的鉴定
使用流式细胞仪对细胞进行 🌲 CD29、CD44 和 CD90 抗原表达 🦁 进行鉴 🐱 定。
进行骨分化、软骨分化和脂 🐛 肪分化实验来验证间充质干细胞的 🦢 多分化潜能 🦢 。
注意事项在无 🕷 菌 🐞 条件下进行 ☘ 所有操作。
使用高品质试剂和培养基 🐳 。
监控 🐈 细 🐈 胞生 🐅 长并定期传代。
定期污染 🐋 检查。
当达到所需数量的细胞时 🦉 ，将细胞冻存以备将 🌵 来使用 🍁 。
4、大鼠骨髓间充质干细胞流式 🐝 鉴 🐯 定
大鼠骨 🕊 髓间充质干细胞流式 🐦 鉴定
材料：大鼠骨髓 🦁
流式 🐒 细胞 🦟 仪
抗体：FITC标 🐼 记 🐬 的抗大鼠抗 🐠 CD44 体
PE标记的抗 🐳 大鼠抗 CD90 体
APC标 🐎 记的 🐟 抗大 🌼 鼠抗 CD105 体
APC/Cy7标记 🐅 的抗大鼠 🐝 抗 🌾 CD34 体
APC/Cy7标记的抗 🐬 大鼠抗 CD45 体
缓 🌾 冲 🐎 液 🌴 ：PBS/BSA
步骤：1. 骨髓提 ☘ 取 🐘 ：
处死 🕊 大鼠，取出股骨和胫骨。
用 PBS 冲洗 🌾 骨头，去除骨髓细胞。
将骨髓细胞悬液通 🐼 过 70 μm 滤网，去除碎片。
2. 红细 🐛 胞裂 🐈 解：
加入红细胞裂解缓冲液，室温裂 🐘 解 5 分钟。
用 PBS 洗涤细 🦋 胞两次。
3. 抗 🦍 体孵育 🌼 ：
将细 🌹 胞悬液分装到试管 🐞 中，每个试管中约 100 万个细胞。
加入抗体复合物，并孵 🐞 育 30 分，钟室温避光。
用 🦋 PBS/BSA 洗涤细 🐎 胞 🦢 两次。
4. 流 🐕 式 🐅 细胞 🕊 分析：
将细胞悬液转 🌹 移 🐘 到流式 🦁 管中。
使用流 🐡 式 🐋 细胞仪分析细胞 🐦 表面标志物的表达。
根据 🐎 以下标准鉴定间充质干 🐦 细胞：
CD44+
CD90+
CD105+
CD34
CD45
5. 数 🐕 据分析 🐎 ：
使用流式细胞分析软件 🌿 分析 🍁 数据。
计 🦆 算间 🐈 充质干细胞的百分比。
注 🐎 意 🐘 事项 🐘 ：
确 🦍 保抗体与目标抗原有特 🌹 异性。
操 🐺 作过程中 🐛 保持无菌条 ☘ 件。
使用新鲜的骨髓细胞，避免培养后的细胞 🐺 发生分化。
根据具体实验目的调整 🐞 抗体复合物的浓度。
