如何分离成体 💐 干细胞(举例说明怎样分离 🐴 鉴定成体干细胞)
- 作者: 王砚舟
- 来源: 投稿
- 2025-08-05
1、如何分离 🌺 成体干细胞 🌼
分离 🦟 成体干细 🌹 胞的步 🐵 骤:
1. 组 🌵 织获取:
从捐献者或 🕸 患者组织中提取含 🐠 有成体干细胞的组织样品。常见来源包括骨髓、脂、肪。脐带血和牙齿髓
2. 组 ☘ 织处理 🐠 :
将组织研磨成单细胞 💐 悬液 🐎 ,移除细胞外基 🦊 质和杂质。
3. 标 🐧 记与未标记细胞分离 🌼 :
使用生物标志物标 🦆 记特定类型的成体干细胞。常见生物标志物包括 CD34(造血干 🦢 细胞 🕊 )、CD45(白细胞)和 CD105(间充质干细胞)。
使用免疫磁珠进行磁性激活 🦄 细胞分选 (MACS),将标记的细胞与未标记的细胞分离。
4. 密度 🐝 梯度 🦉 离心法(可选):
加速离心单细胞悬液通过密度梯度,形成不同 🐋 的细胞层。干细胞通。常在特定密 🐵 度层中富集
5. 荧光激活细 🦅 胞分选 🌲 (FACS):
使用流式 🐡 细胞仪根据生物标志物标记来进一步分离特定 🕸 亚 🐞 群的成体干细胞。
6. 克 🌳 隆形 🕸 成:
将分离的成体干细胞培养在含有特定生长因子和培养物 🌸 的培养基中干细胞将。形成克隆,表。明有 🐵 自我更新和分化的能 🐦 力
7. 特 🌼 征鉴定:
使用免疫表型、分化试验和功能分析来确认分离的细胞 🐶 是否为确定的成体 🐡 干细 🐳 胞类型。
其他考 🌺 虑 🪴 因素:
不同的组织类型和成体干细胞类型需要 🐘 不同的分离方法。
分离效率受多种因素影响,包括组织质量、标记抗体的特异性以及设备的技术能 🍁 力。
分离过程 🌼 必须在无菌条件 🐡 下进行,以防止污染。
2、举例说明 🐠 怎样分离鉴定成体干细胞
分离成体干细胞鉴 🐳 定 🐯 方 🐺 法举例:
1. 细胞表 🦉 面 🕷 标记
成纤维细胞生长因子受体 1 (FGFR1):间充质干细胞 (MSCs) 和内皮 🪴 祖 🪴 细胞的标记物
Stro1 (STRO1):MSC 和神 🦈 经 ☘ 干细 🦄 胞的标记物
CD34+:造血干 🐺 细胞和内皮祖细胞的标记物
CD133+:神经干 💮 细胞和肿瘤干 🐬 细胞的标记物
2. 功能 🌻 性检测
克隆 💐 形成单 🕊 位检测 (CFU):衡量干细胞自 🐒 我更新和增殖潜能的能力。
多向 🦉 分化潜能检测:验证干细胞分化为特定细胞谱系的能力(例如,骨、软骨、脂肪等)。
血管生成检 🌷 测:评估内皮祖细胞形成血管网络的能力。
3. 排 🦊 除 🦅 细 🐞 胞标记
CD45:排除血液 🕸 细 💐 胞
CD31:排 🦄 除内皮 🕊 细胞 🐎
CD14:排除单核细 🦆 胞 🐕
鉴 🦄 定方法的步 🐶 骤:
步 🦅 骤 🐵 1:组织采 🌴 集
从脂肪组织、骨 💐 髓或其他组织中采集样品。
步骤 2:免 🍁 疫磁 🦢 珠分 🦈 离
使用靶向特定细胞表面标记的磁珠从样品中捕 🦉 获干细 🌴 胞。
步骤 🐕 3:功能 🐈 性检 🪴 测
对分离的细胞进行克隆形成单位、多向分化潜能或血 🦁 管生成等功能性检测。
步 🦄 骤 4:排除 🐳 细胞标记
利用流式细胞术或免疫组织化学技术排除不需要的 🐠 细胞类型。
步骤 🐝 5:确认鉴 🦁 定 🌹
通过逆转录聚合酶链反应 (RTPCR)、基因芯片分析或蛋白质组学等方法确认特定干细 🌲 胞标记物的表达。
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3、成体干细胞分化有哪 🌺 两 🌼 种方式
对称分裂:干细胞分裂成两个相同的 🦉 子细胞,都保持干 🌸 细胞状态。
不对称分裂:干细胞分裂成一个干细胞子细胞和一个分化子细胞分化子细胞。进一。步分化成特定的细 🐬 胞类型
4、如何分离成体干细胞 🌸 的方法
分离成 🦁 体 🐘 干细胞的方法 🐧
1. 离 🐡 心 🐴 法:
将组织样品悬 🦅 浮在培养 🌳 基 🌺 中并离心。
成 🐒 体干细胞通常比其他细胞更重,因此会沉淀在离 🕊 心管底部。
上清液中含有 🌷 非 🦊 干细胞成分,可将其移除。
2. 免疫 🌸 磁 🕊 珠 🌾 分离法:
使用与 🦆 成体干细胞表面标志物结合 🦁 的磁珠。
将磁珠与组织样 🐝 品混合 🪴 并 🐈 孵育。
磁珠会 🦟 与目标 🌸 干细胞结合。
通过 🌷 磁力将结合 🌼 的 🍁 干细胞提取到培养基中。
3. 荧光激活细胞分 🕊 选 (FACS):
使用与成体干细胞表面标志 🌻 物结合 🦆 的抗体。
抗体 🦢 与干细胞结合后标记为荧光 🦈 团。
使用 FACS 机对 🦄 细 🐶 胞进行排 🦁 序,收集荧光阳性细胞(干细胞)。
4. 贴壁 🦁 法:
将组织样 🌸 品以单细胞形式培养在培养 🐦 皿中。
成体干细胞具有贴 🌸 壁特性,而其他细胞类型则会悬浮在培养基中。
通过去 💮 除 🐈 非贴壁细胞,可以富集成体干细胞。
5. 微 🌲 流控 🐺 技术 🕊 :
根据细胞大小、密度或其他特性 🐟 ,使用微流控设备分离细胞。
这是一种高通 🌷 量 ☘ 且自 🐝 动化的分离方法。
6. 激光捕获微 🐯 切割法:
使用激光器从组织切片中精确 🐎 切割 🌸 出特定细胞。
该方法可用于从异质 🐶 性组织样 🌵 品中分离单个成体干细胞。
考 🐶 虑因 🐠 素:
选择分离方法取决于目标成体干细胞的类 🦊 型和来源组织。
分离过 🐒 程 🌹 应保持细胞 🌺 的存活率和多能性。
必须严格控制实验条件以确 🍁 保分 🌷 离的纯度和特异性。