冷冻干细胞现 🐶 场复苏流程（间充质干细胞 🐦 复苏流程）

1、冷冻干细 🍀 胞 🐴 现场复苏流程

冷 🐯 冻干细胞 🕊 现场 🍀 复苏流程

冷冻干 🐒 细胞样品

解 🌼 冻液（如 DMSO）

无 🐶 菌 🐒 培养 🐳 基

无 🦅 菌 🐯 移液管 🐝 和枪头

无菌培养皿 🦢 或试管

细胞培 🐛 养 🐳 箱

1. 准 🐦 备工作 🐵

将细胞培养 🌿 箱预热至所 🌹 需温度（通常 🐞 为 37°C）。

将无菌培养基预热至 🐵 所需温 🌳 度。

将解 🐞 冻液室温解 🐎 冻。

2. 复 🐋 苏 🌲

使用无菌移液 🐛 管将少量解冻液（通常 🕷 为 12 mL）添加到冷冻干细胞样品 🦄 中。

轻柔地 🦈 振 💐 荡试管或培养皿以 🦍 溶解样品。

将试管或 🌾 培 🌵 养皿置于 🐝 37°C 的细胞培养箱中培养。

每 🦄 510 分钟轻轻地振荡一次容器，以促进复苏。

3. 稀 🐴 释 🐱

复苏时间取决于样 💐 品的类 🐼 型和冷冻方式。通 🍀 常复苏，需要 1530 分。钟

复苏后，将稀释培养基（无血清培养基或含低浓度血清的培养基）缓慢添加到细 🐺 胞悬液中。

稀释因 🐎 子取决于解冻液的浓度和细胞的类型。通常稀 🦢 释因子，为 1:10 至 1:100。

4. 沉 🌺 淀 🌹

将稀释后的细胞悬液转移到无菌培养皿或 🐳 离 🐶 心管中。

以 300500 x g 离心 510 分钟以，去除任 🐟 何残留的解冻 🐒 液或碎 🕊 片。

5. 重 🐳 悬 🦅

除去上清液，用预热的无菌培养基重悬 🐒 细胞。

将重悬液转移到无菌培养皿或 🌾 培养瓶中培养。

6. 培 🦆 养 🌻

将细胞置于合适的培养基中 🌻 ，在合适 🌸 的温 🌸 度和 CO2 浓度条件下培养。

监测细胞 🐧 的生长和状态 🦆 ，并根据需要更换培 🌾 养基。

注 🐈 意 🐛 事项：

在整个过程中使用 🐴 无菌 🌾 技术以避免污染。

复苏培养基和解冻 🕷 液的温度应接 🐞 近预期的培养温度，以减少对细胞的损伤。

稀 🌴 释步骤应缓慢进行，以 🐱 防止渗透压休克。

如果复苏不成功，可，以重复稀释和重悬步骤或尝 🐅 试使用不同的解冻培养基 🌷 。

2、间充质干细胞复苏 🌵 流 🐛 程

间 🌼 充质干 🌺 细胞复苏流程

间充质干细胞冻存 🪴 管

无血清 🌿 培养基

完全培养基（含血清和生 🐕 长因子）

培 🦋 养板或培养 🍀 瓶 🦉

移 🌻 液器和吸 🐒 头 🍀

细胞计数 🐯 器

培养 🪴 箱（37°C，5% CO2）

1. 准备工 🦅 作台：消 🐞 毒工作台准备，好，无菌材 🌵 料如培养板、移液器和吸头。

2. 解冻 🐒 细胞：将冻存管从液氮中取出，快速放入37°C的水 🐺 浴中解冻解冻。至。仅剩少量冰晶即可

3. 稀释细胞：将 🌸 解冻的细胞转移到含有无血清培养基的培养板或培养瓶中，轻轻吹打成单细胞悬液。

4. 离心细胞：以离心 🐟 1200 rpm分5钟，去除细胞 💐 培养液。

5. 洗 🪴 涤细胞：用无血清培养基洗涤细胞两次，每5次离心分钟。

6. 培养细胞：用 🐒 完全培养基重悬细胞 🐞 ，按所需 🍁 浓度接种到培养板或培养瓶中。

7. 培养细胞：将细胞 🦄 培养 🐦 在37°C，5% CO2的培养箱中 ☘ 。

8. 监测细胞生长：定期观察细胞生长情况。当细 🐡 胞达到8090%融合时，可。以传代或用于实验 🐘

注意 🐈 事项 🌼 ：

迅速解冻细 🐯 胞以避免细胞损伤。

无 🐦 血清培养 🐞 基用于洗涤细胞，以去除冻存保护剂。

使用完全培养基培 🐳 养细胞 🐘 ，以提供必要的生长因子和营养。

定期监测细胞生长情况 🌲 ，以确保细胞健康和增殖。