大鼠脂肪 🐎 干细胞的提取（大鼠脂肪干细胞的提取实验报告）
- 作者: 马珂芋
- 来源: 投稿
- 2025-04-25
1、大鼠脂肪干 🌾 细胞的提取
大 🐠 鼠脂肪干细胞的提取 🐶
材料：大鼠
无菌手术器 🌿 械
70% 酒 🐘 精 🌷
无 🐟 菌手术 🕸 巾
10 ml 注射器 🐅 和 27 号针头
磷 🐝 酸盐 🦟 缓冲盐 🌼 水 (PBS)
胶原酶 🐛 消化液
培 🐴 养 🐘 基（含 10% FBS）
离心管细 🐶 胞 🦁 培养瓶 🌻
步骤：1. 准 🌳 备手术区 🦅 域
将大鼠麻醉并在手 🐧 术台 🦉 上固定。
用 70% 酒精给 🐵 手术区域消毒。
铺上无 💐 菌手术巾。
2. 切除脂 🐎 肪组 💮 织
在背 🐯 部或腹部中央进行切口。
小心地分离脂肪组织并用 ☘ 无菌镊子将其切除。
3. 组织 🕷 消化
将脂肪组织转移 🌿 到无菌 🐯 培养皿中。
加入 💮 胶原酶消化液并孵育 1 小时，37°C。
定期搅拌混合物，以促进细胞 🪴 分离。
4. 过滤和 🌵 离 🪴 心 🐒
将消化后的混合物过滤 🦢 过滤 🦟 100 μm 网，以去除 🌷 未消化的组织。
用 PBS 洗涤 🦄 细胞并离心 5 分钟，1200 rpm。
5. 重 🐡 悬 🐦 细胞 🌴
用培养基重悬细胞，并转移到离心管 🌵 中。
离心 5 分钟，1200 rpm，收集细胞团 🐟 。
6. 培 🌼 养细 💐 胞 🌺
将细胞团转移到细胞 🍀 培养瓶中。
加入培养 ☘ 基并孵育于 37°C、5% CO2 的培养 🐧 箱中。
7. 观察和监 🐵 测
在培养过 🌷 程中定期观察细 🍀 胞。
更换培 🐅 养基每 🐳 23 天一 🐒 次。
当细胞达到 8090% 融合时，即可用于实 🪴 验。
提示：使用无菌技术至关重要 🌼 ，以避免 🌵 污染。
胶原酶的浓度和孵育时 🐞 间可能因脂肪组织的类型而异。
仔细过 🐎 滤以确 🐡 保去 🐯 除未消化的组织残留物。
重复离 ☘ 心和重悬步骤以富集脂肪干 🐧 细胞。
2、大鼠脂肪干细胞的提取实 💐 验报告
大鼠脂肪干细胞的提取实验报 🌿 告 🐠
摘要脂肪干细胞 (ADSC) 是一种多能干细胞，具有分化为各种细胞类型的潜力。本文报告了从大鼠脂肪组织中提取的 ADSC 实，验包 🦈 括以下步骤组织：采集、胶、原。酶 ADSC 消，化。离 ADSC 心。和培养实验结果证实了的成功提取并对其表型进行了初步评估这一发现为进一步研究的生物学特性和治疗应用奠定了基础
材 🐛 料和方 🐧 法 🦉
材料：大鼠
含链 🕸 霉素、青霉素 🌺 的 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
胶 🦢 原酶 🌲 II
70% 乙 🐠 醇 🐬
磷酸盐 🕸 缓冲液 (PBS)
细胞培 🍀 养板 🦢
细胞培养 💐 箱 🌼
方法：1. 组织采集：从小鼠腹部分离脂肪组织，并用 ☘ 70% 乙醇消毒。
2. 胶原酶消化：将脂肪组织切成小块 🌿 ，并用含有胶原酶 II 的 DMEM 在 37°C 下孵育。
3. 离心：将消 🪴 化后的溶液通过离心 1000 g 分 10 钟。
4. 培养：将离心后的细胞沉淀 ☘ 重悬于含链霉素、青霉素的 DMEM 中，并接 🌿 种到细胞培养板中。
5. 表 🦅 型评估：使用免疫荧光染色对培养的细胞进行表型评估。
结果培养 7 天后，在细胞培养物中观 🕸 察到附着的细胞 🐡 层。免，疫荧光染色结果表明这些细胞表达了 ADSC 标，志物包括 CD29、CD44 和 CD90，但不表达造血标志物 CD34。
讨论本实验成功地从大鼠脂肪组织中提取了提取 ADSC。的细胞表现出典 🌼 型的表型 ADSC 证 🌴 实了，其。多 🐦 ，能干细胞特性这些细胞具有分化为各种细胞类型的潜力包括脂肪细胞、骨。细胞和软骨细胞
ADSC 在再生医学和 🐼 组织工程领域具有广泛的应用前景。它们可用于修复受损组织再生组织和、治。疗多种疾病本研究为进 🐘 一步探 🌷 索的治疗 ADSC 潜。能提供了基础
结论本实验成功地提取了大鼠 ADSC，并对其表型进行了初步评估提取。的，细。胞具有多能干细胞特性为进 🐟 一步研究其生物学特性和治疗应用奠定了基础
3、大鼠脂肪干细胞的 🌻 提取原理
大鼠脂肪 🐵 干细胞的提取原理
脂肪干细胞 (ASCs) 是从脂肪组织中分离出来的多能 🦋 干细胞。以下是提取大鼠脂肪干细胞的原理：
1. 脂 🦟 肪组 🐟 织收集：
用无 💮 菌 🐎 技术收集大鼠腹 🦆 部或背部脂肪垫。
将 🕷 脂肪组织切 🐯 碎成小块。
2. 消化 🌺 ：
将脂肪块与含有胶原酶的分离液（如 Hanks 平衡盐溶 🌹 液）混合。
胶原酶是 🐟 一种酶，可，以将脂肪组织中的胶原蛋白分解 🌴 释 🐼 放出 ASC。
在有培养箱中 37°C 下孵 🐦 育混合物，缓慢搅拌。
3. 离 🐠 心：
孵 🌷 育结 🦟 束后，将混合物离 🐳 心。
脂肪细胞会浮到表面，而 ASC 则沉 🐝 淀 🦉 到底 🌾 部。
4. 洗涤 🦁 和重悬：
用 🦋 分离液将 🐟 脂肪 🌻 细胞从 ASC 中洗涤出去。
将 ASC 重悬在富含营养的培养基中，如含有血清的 🌷 DMEM。
5. 筛 🐡 选和分离 🐎 ：
将 ASC 培养在培养皿中 🐵 。
ASC 会黏附 🐦 到培养皿底部，而其他细胞类型（如红细胞和白细胞）则会悬浮 🌻 在液 🌲 体中。
将不黏附的细胞 🌸 吸出，留下 ASC。
6. 扩 🐯 增 🐎 ：
将 ASC 转移到新的培养皿中，并在富含营养的培养基中 🌷 培养。
ASC 会 🌷 增殖，形成 🐠 细胞群体。
7. 纯 🌾 化 🐯 ：
可以 🐈 使用表面标志物 🌲 （如 CD34、CD45、CD90）对 ASC 进行纯 🌵 化。
使用免疫 🦅 磁 🌷 珠或流式细胞仪进 🐯 行纯化。
通过 🐋 这些步骤，可以从大鼠脂肪组织中分离和提取纯净的 ASC。
4、大鼠脂肪干细胞的提取 🌻 方法
大鼠脂肪干 🕸 细 🦅 胞的提取方法 🐴
材料：大鼠
灭菌 🌸 手 🐡 术器械
无 🐱 菌生 🐺 理 🌳 盐水
脂肪组织收集 🦊 器
离心机培养基 🐴 （DMEM/F12 + 10% FBS）
步骤：1. 麻醉 🐅 大鼠：使用合 🕸 适剂量 🐴 的麻醉剂（如异氟烷）对大鼠进行麻醉。
2. 准备好手术区域：刮除手术区域的毛发 🐶 ，并用碘伏或酒精消毒。
3. 获取脂肪组织：在无菌条件下，通 🦢 过腹部切口获取腹腔脂肪组织。将脂肪组织。收集到脂肪组织收集器中
4. 消化脂肪组织：将脂肪组织转移到 🦉 无菌培养皿中，用含胶原酶 IV 的消化液消化 3060 分钟。
5. 离心沉淀细胞：消化后，将细胞，悬液转移至离心管中以离心 300 x g 分 10 钟沉淀细胞 🌹 ，。
6. 清洗 🕊 细胞 🌴 ：用无 💐 菌生理盐水小心地清洗细胞，然后重复离心沉淀细胞。
7. 铺板培养：将沉淀 🐯 后的细胞重悬于培养基中，并将其接种到 🐟 培养皿中。
8. 培养细胞：在 🐺 37°C、5% CO2 的条件 🐘 下培养细 🌷 胞。
9. 分离干细胞：培养 23 天后细胞，将 🦢 贴壁。用胰蛋白酶/EDTA 溶，液。消化细胞然后通过 🌳 流式细胞术或免疫标记 💮 分离出干细胞
注 🐺 意事项 🐛 ：
保持无菌条件以防止污染 🐡 。
使用高质量的酶并 🦄 优化消化条件，以最大程 💮 度 🐬 地提高干细胞产量。
在接种前 🦟 将细胞悬液过滤以去除残留的细胞碎片。
通 🐧 过流式细胞术或免疫标记验证分离的干细胞的表面标记。
