TP干细 🌼 胞培养步骤（干细胞培养视频教程）
- 作者: 朱学屹
- 来源: 投稿
- 2025-05-16
1、TP干细胞 🐟 培养步骤
TP 干细胞培养步 🦁 骤
材料：TP 干 🦢 细 🐠 胞 🕸
DMEM/F12 培养基补充 15% FBS、1% 转化生长因子 🦍 (TGF)β
胶 🐈 原酶 🐬 IV
胰 🍁 蛋 🦆 白 ☘ 酶
0.25% 胰 🌷 蛋 🐋 白 🐝 酶EDTA 溶液
10 mM Y27632
10 mM 苏拉 🪴 明 💮
70% 乙醇 🌻
培养皿培养瓶
移液枪
显微镜
步骤：
1. 细 🐯 胞贴 🌷 壁 🌺 ：
将 TP 干细胞重 🌺 新悬浮在 DMEM/F12 培养基中，密度为 50,000 个细 🦆 胞/mL。
将细胞接种到胶原酶 IV 涂层的培养皿或 🕊 培养 🌵 瓶中。
将细胞放入 37°C、5% CO2 培养箱中培养 46 小时 🐺 ，使 🦁 细胞贴壁。
2. 培养基 🐘 更换：
去除无 🐠 贴 🌾 壁细胞 🐶 的培养基。
加入新鲜的 DMEM/F12 培养基，补充 15% FBS、1% TGFβ、10 mM Y27632 和 10 mM 苏拉明 🦟 。
每 💐 隔 23 天更 🦟 换培养基。
3. 传 🐵 代 🦅 ：
当细胞达到 8090% 融合 🐞 时，需要传代。
吸出培养基 🌼 。
用 0.25% 胰 🐞 蛋 🐕 白酶EDTA 溶液处理细胞 510 分钟，以 🕊 解离细胞。
收集 🐡 细胞 🦟 并离心。
将细胞重 🐴 新悬 💐 浮在新鲜的 DMEM/F12 培养基中 🐦 。
根 🦋 据需要分配细胞到新 🐛 的培养皿或培养瓶中 🌳 。
4. 冷冻 🐠 保存：
收集细 🌻 胞并离 🐋 心 🦅 。
用含 🌼 10% DMSO 的冷冻培养基重新悬浮细胞。
将细胞 🐧 分装到 🕊 冷冻管中。
将冷冻管缓 🐳 慢冷冻至 80°C。
将冷冻 🌹 管转移至液氮罐中 🌷 长期保存。
注 🌾 意事项：
保持 🐺 无 🐘 菌条 🐺 件。
使用高品 🐝 质的培养 🦉 基和 🌲 试剂。
避 🐴 免 ☘ 细胞过度生 🐶 长。
定期监测细 🐱 胞 🌻 健康 🐟 状况。
培养条件可能需要根据特定细胞系进行优 🐠 化。
2、干 🦍 细胞培养视频教程
干细胞 🦟 培养视频教程
材料无血 🐛 清 🌺 培养基
血清培养皿或培 🐠 养瓶
离心机吸管
移液器
培 💮 养 🦍 箱 🐶 （37°C，5% CO2）
干细胞步骤
1. 预 🐵 热 💮 培养 🐵 基
在 🦁 培养箱中预热无血清 🐡 培养基和血清至 37°C。
2. 分 🦋 离 🐦 干细胞
按照具体干细胞分离方法 🦢 进行分 🍀 离。
分离后 🌷 的干细 🐦 胞应悬浮在无血 🌿 清培养基中。
3. 计数干 🌸 细 🌷 胞
使用血细胞计数板或流式细 🍁 胞仪计数干 🐕 细胞。
4. 稀释和播 🍁 种 🦍 干细胞
根据 🌴 所需密度（通常为 10,000100,000 个细胞/cm2）将干细胞稀释到培养基中。
将干细胞悬液转移到培养皿 🐝 或培养瓶中。
5. 添加 🐯 血清
加入血清至 🕊 最终 🐵 浓 🐘 度通常为 1020%。
轻柔 🍁 摇晃 🐺 培养皿或培养瓶以混合细 🐯 胞和培养基。
6. 培养干 🦟 细 🌷 胞
将培养皿 🌷 或 🍀 培养瓶放入 🦍 培养箱中（37°C，5% CO2）。
每 🌸 天监测干细胞并根据需要更 🐵 换培养基。
7. 传 🦉 代干细胞 🐱
当 🐧 细胞达到 8090% 的融合时，需要传代 🪴 。
去除 🐋 培养基，用 PBS 洗涤细胞。
加 🐴 入胰蛋白酶 💮 EDTA 溶液消化细胞。
中和 🐈 胰蛋白酶并计数细胞。
按照第 46 步 🐋 重复播种 🌿 和培养步骤。
提示使用无菌 🌴 技术。
定期监测细胞形态 💐 和 🕷 增 🐬 殖率。
如果细胞污染或 🐡 分化，请丢弃并使 🐼 用新的细胞。
优化培养条件以获得最佳结 🐺 果 🦊 。
注意培养干细胞时 🐛 ，必须遵守实验室的安全准则。
3、干细胞培 🦋 养是做什么
干细胞培养是一 🐘 种 🐞 在体外环境中增殖和分化干细胞的过程。其目的是：
研究干细胞生物学研 🌲 究干细胞：的自我更新、分化和发育机制。
治疗疾病：培养干细胞用于治疗各种疾病，例如神经退 🌿 行性疾病 🦉 、心脏病和 💮 癌症。
组织工程：使用干细胞 💮 培养组织或器官用，于移植或修复受损组织 🌷 。
药物筛选：使用干细胞筛选新药和治疗方法 🍀 。
个体化医学 🕸 ：从患者自身培养 🐵 干细胞，用，于个体化治疗提高治疗 🌳 效果。
4、ipsc干细胞培 🌵 养
IPSC干 🕊 细胞培养 🐝
诱导性多能干细胞 (iPSC) 是通过将体细胞重新编程 🌷 为具有胚胎干细胞 (ESC) 样特性的人工多能干细胞。它。们用于广泛的生物医学研究和应用中
IPSC培 🐠 养 💐 条件 💮
培养基 🐟 ：使用富含生长因子的培养基，如mTeSR?1 或培养基 STEMdiff? APEL。
培养基补充剂补充：抗 🌾 生素抗、真菌 🌸 剂和β巯基 🦁 乙醇。
培养基更换频率：每天或 🌾 隔日更换培养基。
培养 🐕 温度：37°C
CO2浓度 🐕 ：5%
培 🌴 养皿基材：使用 💮 涂有玛特里凝胶或Vitronectin? NTF 的培养皿。
IPSC培 🐴 养方 🌸 法 🦉
1. 解冻 🐯 ：将冻存的iPSC从液氮中 🌼 取出，快速解冻。
2. 传播：将iPSC接种到涂 🐦 有 🐘 培养基材的新 🐞 培养皿中。
3. 培养培养：直iPSC，至达到 🕊 8090%的汇 🐠 合度。
4. 传代：使用0.5%胰 🐴 蛋白酶EDTA或Accutase?将传代iPSC到新培养皿中。
5. 分 🐡 化：根 🐈 据需要，可在分化培养基中诱导分化iPSC为特定细胞类型。
培养监控形态学：iPSC应呈圆形或多 🦈 边形，并形成 🐕 致密的单 🐟 层。
生长率：培养时间内应观察到细胞生长 🦁 和增 🦢 殖。
免疫表型：使用特异性 🐯 抗体对iPSC进行标记，以检 🌳 测多能干细胞标记物（如OCT4、SOX2和NANOG）的 🌵 表达。
分化：诱导分化后，使用特异性标记验证分化的细胞 🐵 类型。
提示避免 🐒 过度传 🦄 代iPSC，因为这可能会导 🐬 致分化能力丧失。
定期监测培养物以检测污染和异 🦟 常细胞 🐞 生长。
使用分化诱导培养基 ☘ 时，严格按照制造商 🐡 的说 🐕 明操作。
