干细胞成球实验流程（干细胞成球实验 🍁 流程视频）
- 作者: 李司柠
- 来源: 投稿
- 2025-05-18
1、干 🐠 细胞成球实验流程
干细胞成球实验流程 🦆
1. 材料 🐧 准备
人类胚胎干细胞 (hESCs) 或诱 🌻 导多能干细 🪴 胞 (iPSCs)
无血清培养基（如 🐵 mTeSR1 或 Essential 8）
聚 🌼 乙烯 🕸 亚胺 (PEI)
培养 🍁 板或培养皿
2. 培 🦁 养细 🐵 胞 🐴
在无血清 🐺 培养基中培养干细胞，直至达到 7080% 的汇合度。
3. 制备 🌲 PEI涂 🐡 层培养板
将PEI溶液（0.1%）稀 🐳 释 🦅 至100倍。
将PEI溶液加入培 🦢 养板或培养皿中，使其完全覆盖表面 🦋 。
孵育过夜，然后吸出多余的溶液并冲 ☘ 洗培养板。
4. 悬浮细胞 🌿
用无血清培养基悬浮细胞，使细胞密度为 12 x 10^6 个细胞 🦟 /ml。
5. 播种细胞到 🌷 PEI涂层培 💐 养板 🍁
将悬浮 🌵 细胞播种到PEI涂层培养 🦟 板中。
每孔或培养皿加入 15ml 细 🐬 胞悬液。
6. 培 🍁 养 🍀 成球
将培养板置 🐟 于 37°C、5% CO2 的 🪴 培 🌾 养箱中。
每23天更换培养 💮 基 🌸 。
1014 天 🌼 后，干细胞将 🌵 形成球形聚集体 🦁 成球（）。
7. 收 🐺 获成球
用移液 🐅 枪小心地从培养基中吸出成球。
可以将成球转移到新的培养板中进 🐟 行进一步培养或分析。
8. 分 🐘 析 🕸 成球 🌵
可以 🍁 使用 🌼 各种技术来分 🌲 析成球，例如：
显微镜观察成 🌳 球的形态 🦍 和大小
流 🐴 式细胞术分析成球的表面标记
实时定量 🦟 PCR 确定 🌼 成 🌿 球的基因表达谱
2、干细胞成球实验流 🐞 程视频
干 🦢 细胞成球 🐼 实验流 🌹 程视频
材料：培养基
贴 🦄 壁细 🐘 胞 🍁
聚已烯 🐝 亚 🦊 胺涂层的培养皿
悬 🐒 浮液培养基
平 🦉 板 🦋 式离心机
操作步 ☘ 骤：
1. 贴壁 ☘ 培 🌵 养 🌸 ：
将贴壁细胞培养在聚已 🐅 烯 💐 亚胺涂层的培养皿中 🐦 。
培 🪴 养基应含有生长 🐝 因子和血清。
2. 成球 🦅 诱 🐝 导 🐞 ：
当细胞达到 7080% 汇合度时，去除培养 🐟 基。
加入悬浮液培养基，含有成球形 🐋 成因子和生长 🐒 因子。
在 🐡 培养箱中 🐯 培养 12 周 🌾 。
3. 成球 🍀 采 🕸 收 🌼 ：
将培养皿放 🍀 在 37°C 水浴中 10 分钟，以破坏成球与培养皿之间的粘附。
用移液枪轻轻 🦟 吹拂培 🦄 养皿底 🌹 部，收集成球。
将成球转 🌾 移到装 🌷 有新鲜培养基的 🌸 新培养皿中。
视频 🪴 演 🦍 示 🐦 ：
[YouTube 视频链接 🐘 ：干细胞 🦄 成球实 🐒 验流程]()
提示：用于成球 🌹 诱导的培养基应含有适当的生 🐟 长因子和血清 🐦 。
悬浮液 🕸 培养基应 🐵 无血 🐕 清。
成球采 🐳 收时，避，免用力 🐧 过多以免损坏成 🐧 球。
成球可以 🐈 在新 🌹 的培养基中继续培养和分化。
3、干 🕷 细胞成球实 🪴 验流程图
干细胞成球实验流 🦊 程图
1. 干 🦢 细胞 🐦 制备 🦁
分离和培养未 🦄 分 🕷 化干细胞（例如多能干细胞）
2. 悬浮 🦈 培 🐒 养 🌷
将干细胞接 🌹 种至含 🦊 有生长的悬浮培 🐞 养基的培养皿中
搅拌培养皿以防止细 🐯 胞附着
3. 成球 🐴 形成
干细胞在非粘着基质上 🐦 聚集并形成细胞 🐳 团（称为成球）
4. 移 🐱 液分 🦢 选 🐈
使用细口吸管轻轻移液除去残余 🐛 的单细胞和细胞 🌿 碎 🦟 片
5. 沉降 💮 和 🌾 培养
将成球沉 🍁 降并接种至含有分化诱导因 🌾 子的培养基中
6. 定 🐶 期 🌾 监测 🌹
定 🦄 期检查成球大小、形态和细胞活性
7. 分化诱 🐯 导
提供特定生长因子和信 🦢 号分子诱 🐒 导成球向所需细胞类型分化
8. 取 🌸 样 🌼 和分析
取样 ☘ 成球以进行形态学、免疫组化和基 🦢 因表达分析
9. 继续 🕸 培养或进一步分析
将分化的细胞继续培养或进行进一步分析（例如 🌳 移植或功能研究）
4、成体干细胞研究的过 🐛 程 🐬
成体干细 🐺 胞研究的过程
1. 样品采集 🐵
从骨髓、脂肪组织或其他组织中收集成体干细胞样本 🐳 。
2. 细 🐼 胞分离和培 🌿 养 🐎
使用免疫磁 🌸 珠分离或其他方法分离出所需的干细胞类型。
将干细 🐯 胞培养在特殊的培养基 🦄 中，以促进其增殖和分化 🐛 。
3. 干细胞 🌷 鉴定 🌴
使用表面抗原、免疫组化染色或分 🦈 子 🐟 标记 🌸 来鉴定和表征干细胞的类型。
4. 分化 🪴 诱导（如 🌷 有必 🐅 要）
将干细胞置于特定的诱导条件下，使其 🦉 分化为所需的细 🐼 胞类型。
该过程可能 🐼 涉及使用生长因子、转录因子或其他信号分子。
5. 功能 🐅 测试 🐝
对分化后 🌸 的细 🐞 胞进行功能测试，以评估它们的特性 🦁 和功能能力。
这可能涉及形态学分析 🐳 、电生理学记 🐕 录或其他分析方法。
6. 细胞移 🐅 植（如 🕷 有 🦈 必要）
在某些情况下，分化后的细胞将被移植到动物模型或 🐯 患者中。
移 🕊 植前，需进行安全 🐶 性和有效性评 💮 估。
7. 监测和分 🌴 析
定期监测移植后的细胞，以评 🦁 估其存活率、功 🐶 能和任何潜在的副 🌷 作用。
分析数据可用于优化干细胞 🦅 治疗的 🐳 方法并提高疗效。
8. 应 🌵 用 🐝
成体干细胞研究的结果可用于开发治疗各种疾病和 🌼 损伤的干细胞疗法，包括 🌿 ：
心血管 🦁 疾 💐 病 🌼
神 🍁 经 🐵 退行 🌷 性疾病
癌 🐒 症 🐡
烧 🐛 伤 🍁 和创伤
