老 🐱 鼠成骨干细胞提取（如何检测小鼠骨髓干细胞的活 🐱 性）
- 作者: 张北芸
- 来源: 投稿
- 2025-04-08
1、老鼠成骨 🪴 干 🐅 细胞提取
为何老鼠可以 🦅 作为骨干细胞提取的理想来 🐟 源
老 🦢 鼠已成为 🦟 骨 🐡 干细胞研究的理想模型生物，原因如下：
遗 🐒 传相似性：老鼠与人类在基因结构上具有很高的相似性，约 🐈 为 90%。这。使得老鼠研 🌿 究在人类疾病和治疗方面的应用具有相关性
较短的生命周期：老鼠的寿命 🕷 相对较短，通 🌳 常为 23 年。这。加快了实验的进度并允许在相对较短的时间内进行多代繁殖
繁殖力强：老鼠具有很强的繁殖能力，一只 🐎 雌性老鼠每年可产下多窝幼崽。这。提供了充 🦅 足的实验材料
操作方便：老鼠体型小，易，于处理使其成为研究和提取骨 🐠 干细胞的方便模型。
转基因技术成熟：小鼠转基因技术已得到很好的发展，这，允许研究人员创建带有特定基因突变或插入的转基因小鼠从而深入 💐 研究骨干细胞的生物学。
骨 🌲 干细 🌸 胞 🐒 的提取方法
从老鼠中提取骨干细胞有几种 🌾 方法，包括 🌿 ：
胚胎干细胞（ESC）：从胚胎中的内部细胞团分离出 ESC。ESC 具。有无限自我更新和分化为 🐱 所 🦢 有身体组织的能力
诱导多能干细 🐋 胞（iPSC）：iPSC 是（通）过将体细胞例如皮肤细 🕊 胞重新编程为具有 ESC 特性的细胞而产生的。iPSC 可。以从老鼠 🦢 或人类中产生
间充质干 🌴 细胞（MSC）：MSC 是存在于骨髓、脂肪组织和其他组织中 🍁 的多能干细胞。它、们、具。有分化为骨软骨脂肪和其他组织的能力
应用从老鼠中提 🦢 取的骨干细胞已广泛用于研究和治疗应用，包括：
疾病建模：转基因小鼠模型可用于研究人类疾病，例如 🦄 癌症、神经退行性疾病和心血 🐅 管疾 🍁 病。
药物测试：骨干细胞可用于 🌲 测试药物的有效性和毒性，从而减少临床试验所需的时间和成本。
再生医学：骨干细胞有潜力修复受损或退化的组 💮 织，用，于治疗各种疾病和损伤例如心脏病、帕金森病和脊髓损伤。
2、如何检测小鼠 🦟 骨髓干细胞的活性
检 🌼 测小鼠骨髓 🦁 干 🐘 细胞 (BMSC) 活性的方法
1. 集落形成单元 (CFU) 检测 🌺
CFUF：测量 BMSC 在培养基中形 🐴 成纤维 🐼 连接细胞 🦅 集落的数量。
CFUGM：测 🐒 量 BMSC 形成粒 🦋 细胞 🕊 巨噬细胞集落的数量。
CFUMeg：测量 BMSC 形成巨核细胞集 🌲 落的数量。
2. 黏 🕸 附检 🌷 测 🦄
测量 BMSC 在基质 🦊 蛋白（如纤连蛋白）上黏附的能力。
高黏 🐯 附能力表明 BMSC 活性增强。
3. 迁 🦆 移检测
测量 BMSC 对化学 🌼 因子（如 CXCL12）的 🐯 迁移能力。
高迁移 🐘 能力表明 BMSC 具有归巢 🐘 能 🕷 力。
4. 增 💮 殖检测 🕊
测量 BMSC 在培养基中增 🌹 殖的能力。
使用 🌲 MTT 或 BrdU 分析来定量增 🍀 殖。
5. 分化 🦍 检 🐎 测 🦍
诱导 BMSC 分化为 🌿 骨细胞、软骨细胞或脂 🐼 肪细胞。
通过组织 🐳 学染色或免疫组化来评估分化。
6. 流式细胞 🦟 术
使用 🍀 表面标记 🌾 （如 CD34、CD117、Sca1）来鉴 🐺 定 BMSC。
还可以使用细胞因子表达 🪴 （如 🌳 CXCL12）来 🦆 评估活性和归巢能力。
7. 功 🐶 能检测 🐎
测量 BMSC 在组织修复 🦈 或 ☘ 再生中的功能 🐡 。
将 BMSC 移植到疾病 🦟 模型中，评估其疗效。
注意事项选择适当的检测方 🍀 法取决于研究目标。
结果 🍀 应根据实验条件进行解读，并应使用不同的方法进行验证。
BMSC 活性受多 🦅 种因素影响，包括供体年龄 🕸 、培养条件和 💐 培养时间。
3、提取大鼠骨 💮 髓 ☘ 间充质干细胞
材料：大鼠
无菌操作室 🦅
手术器械 🌾 （镊子、剪、刀手术刀）
注射器 🦢 （10ml）和针头（21G）
培 🐅 养 🦈 基 🐞 （αMEM）
抗生素（青霉素/链 🌷 霉 🌷 素 🌾 ）
胶 🐘 原酶（II 型）
缓冲 🐈 盐溶液（PBS）
离心机细胞 🐬 培 🐡 养 🐵 皿
方法：1. 麻醉大鼠：腹 ☘ 腔注射戊巴 🌺 比妥钠（60 mg/kg）。
2. 准备手术部位：剃除大鼠腹 🐴 部的毛发，用碘伏消毒皮肤。
3. 提取 🐒 骨髓：用手术刀沿中线切开腹壁，小心 🌻 地暴露腹腔。使用。镊，子。将股骨和小 🐴 腿骨从腹腔中取出用剪刀剪开股骨和胫骨的一端暴露骨髓腔
4. 冲洗骨髓：使用 10 ml 注射器连接 21G 针头从骨髓腔中抽出 💮 骨髓用 🐺 。缓冲 αMEM 液冲洗 💐 骨髓腔，收。集冲洗液
5. 消化骨髓：将收集到 💐 的骨髓转移到细胞培养皿 🌺 中。加入胶原酶溶液（终浓度 0.1%）并孵育 45 分钟 🦊 ，37°C。
6. 终止消 🌷 化：用含 10% FBS 的 αMEM 培养基终止消化。
7. 离 🌾 心：将细 🐳 胞悬液以离心 400 x g 分 5 钟。
8. 弃上清液：小心地弃掉上清液，只留下 🦢 细胞沉淀。
9. 重悬细胞：用新的 αMEM 培养基重 🐧 悬细胞，调整细胞密 🌳 度至 1 x 10^6 个细胞/ml。
10. 培养：将细胞转移到新的细胞 🐼 培养皿中，并加入含 🌿 抗生素的培养 αMEM 基。在 37°C、5% CO2 条。件下培养 🦆 细胞
注意：在整个过程中保持无菌操作，以 🐶 防止感染。
骨髓提取是一个精细的过程，需要小心进 🌼 行。
细胞 🐠 培养 🌺 前应彻底终 🦆 止消化，以防止细胞损伤。
4、小 🌵 鼠骨髓来源巨 🐼 噬细胞提取
小鼠骨髓来源巨噬 🐝 细胞 🐒 提取
材料68 周 🍀 龄 🌾 C57BL/6 小 🦍 鼠
24 孔培养 ☘ 板
PBS (磷酸 🌸 缓冲盐 🐟 溶液)
红 🐴 细胞裂解缓冲液（150 mM NH4Cl，10 mM KHCO3，0.1 mM EDTA）
完全培养基培养基：DMEM 含，青 10% FBS、1% 霉 💮 素链霉素
抗 💐 CD11b 微 🐅 珠 🌼
磁性 🐠 分 🦉 选 🌵 柱（如 BD IMag）
培养 🦄 皿 🦢 或培 🌿 养瓶
步骤：1. 获取骨 🐵 髓：杀死小鼠取，出股骨和胫骨。用 70% 乙。醇，清洁 🦢 骨骼表面将骨骼两端剪断 🌷 并将骨髓冲洗到 24 孔。培养板中
2. 去除 🐈 红细胞：离心骨髓悬液（300 x g，5 分钟去除）。上。清液并 🦉 用红细胞裂解缓冲液重悬细胞孵育分钟 🦅 510 然，后离心（300 x g，5 分钟）。
3. 磁珠标记 🕊 ：将细胞重悬在 PBS 中，每 10^7 个细胞加入 🐶 10 μl 抗 CD11b 微珠。孵育 15 分钟，4°C。
4. 磁性分选：将微珠标记的细胞加载到磁性分选柱上。按。照制造商的说明进行洗涤和洗 ☘ 脱
5. 培养：将分选后的巨噬细胞重悬在完全培 🌿 养基中，以 25 x 10^5 个细 🍀 胞/孔接种到培养皿或培养瓶中培养。小 24 时，以 🐒 。便细胞贴壁
细胞 🐼 特 🐝 性：
CD11b 阳 🦟 性 🐬
附着 🕸 生 🦆 长 🐡
表现出 🌺 吞噬细胞活 🐞 性
注 🌴 意事项 🐵 ：
对小鼠进行麻醉，并采 🌴 取无菌技术。
操 🐧 作 🦟 过程中 🌸 保持细胞在 4°C。
分选后的细胞应尽快用 🐦 于实验 🐠 。
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