小鼠干细胞增殖 🐝 方法（干细胞的增殖表现为两种方式 🦈 ）
- 作者: 王奕琛
- 来源: 投稿
- 2025-04-16
1、小鼠干细胞增 🐞 殖方法
小鼠干 🌵 细 ☘ 胞增殖 🦊 方法
材料：小鼠胚胎干细胞 (ESC) 或诱 🐕 导多能 🐠 干细胞 (iPSC)
无 🐺 血清培养基（如DMEM/F12）
胎 🌳 牛 🍀 血 💮 清（FBS）
丝 🐼 裂霉 🌹 素 C
2巯基乙醇 🕸
方法：1. 解冻细胞：将冷冻 🦈 的小 🐞 鼠干细胞快速 🐬 解冻于 37°C 水浴中。
2. 洗涤细胞：将解冻的细胞转移 🐞 到 15 mL 离心管中，用无血清培养基洗涤两次（400 x g，5 分钟）。
3. 接种细胞：将洗涤的细胞接种到预先涂有明胶 🦉 的培养皿 🌷 中 🕸 。建议接种密度为 12 x 10^4 个细胞/cm^2。
4. 培 🐘 养基准备：在無血清 🦆 培养 🦊 基中添加 10% FBS、4 ng/mL 丝裂霉素 C 和 0.1 mM 2巯基乙醇。
5. 培养细 🐠 胞：在 37°C、5% CO2 湿润培养箱中培养 🕷 细胞。每 23 天。更换培养基一次
6. 传代细胞：当细胞达到 7080% 汇合时，进行 🐠 传代。
7. 酶解 🐶 细胞：用 0.25% 胰蛋白 🐒 酶EDTA 溶液处理细胞 510 分钟 🐺 ，然后用培养基终止酶解。
8. 计数细胞：使用血细胞计数器 🌻 或流式细胞仪计数细胞。
9. 重新 🦋 接种细胞：按照步骤 4 所述重新接种细胞至新的培养皿中。
提示：在整个过程中保 ☘ 持 💮 无菌条件非常 🕊 重要。
FBS 的批次可能 🐕 会影响细胞增殖。建 FBS 议。使用经过验证的批次
丝裂 🐵 霉素 C 是一种抗生素，可以防止细菌污染。
2巯基乙醇可以保护 🦢 细胞免受氧化损伤。
细胞汇合过 🍁 高会抑制 🐠 增殖。
为了获得最佳结果，建议 🌵 每 23 代传代 🦈 细胞一次。
2、干细胞的增殖表 🐈 现为两种方式
对称分裂：干细胞分裂产生两个相同的子细胞，每个 🌸 子细胞都能 🐦 自我更新并分化为不同类型的细胞。
不对称分裂：干细胞分裂产生一个干细胞子细胞和一个被指定用于分化的子细胞被指定用于分化的子 💮 细胞。可。能继续分裂或进入分化途径
3、造血多能干细 🐼 胞的增殖 🐞 方式
不对 🐡 称分裂 🌲
4、干细胞无限 🌼 增殖的原 💐 因
干细胞无限 🌼 增 🐈 殖的原因 🐦
1. 端粒酶的活性 🐒 ：
端粒酶是一种酶，负，责维护端 🍁 粒即染色 🐬 体末端 🌷 的保护帽。
在正常细 🕸 胞中，每，次细胞分裂端粒就会缩短最终导致衰老 🐝 和细胞死亡 🐋 。
干细胞具有活性端粒酶，可，以延 🐧 长端粒允许它们 🦁 无限增殖。
2. CDK 抑 🦁 制剂的表达：
细 🐅 胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 抑制剂是 🌸 调节细 🕷 胞周期的蛋白质。
干细胞表达较高的 CDK 抑制剂，阻，止 🦋 它们过早退 🦉 出细胞周期从而允许它们 🐠 长期增殖。
3. 自我更新机 🐠 制：
干细胞通过非对 🍀 称分裂来自 🐴 我更新，其，中一个子细胞保持干细胞 🐱 状态而另一个子细胞分化为成熟细胞。
这允许干细胞 🌻 群体随着时间的推 🐘 移保持其自身，同时产生新的细胞。
4. 微环境的影 🐯 响：
干细胞的微环境，称 🐯 ，为，龛提 🐼 供支持信号促进其增 🦆 殖和存活。
龛中的生长因子 🦊 、细胞外基质和细胞与 🦟 细胞相互作用创造了 🍀 一个有利于无限增殖的条件。
5. 表观遗传 🌴 调 🐎 节 🐦 ：
表观 🐠 遗传调节是指基因表达的改变，不受 🐴 DNA 序列本身的改变。
干细胞具有 🐠 独特的表 🌼 观遗传特征 🌳 ，允许它们维持自我更新和多能性。
6. 器 🐵 官特 🐧 异性机 🐦 制：
不同的器官和组织中的干细胞具有独特的特性 🌹 ，影响其无限增殖能力。
例如，造，血干细胞可以通过不对称分裂和自我更新机制无限增殖而上皮干细胞的增殖则 🕊 受到组织特异性信号的调节。
干 🦄 细胞无限增殖的原因是一个复杂的过程，涉，及多 🐡 重因素的相互作用包括端粒酶活性、CDK 抑、制、剂、表达自我更新机制微环境影响表观遗传调节和器官特异性机制。
