牙周膜干细胞protocol（牙周膜干细胞可分 🐶 化成什么细胞）
- 作者: 马俞安
- 来源: 投稿
- 2025-04-10
1、牙 🌸 周膜干细胞protocol
牙周膜干 🐧 细胞分离和培养方案
材料牙周膜组织 🐝
Dulbecco's PBS (DPBS)
胶原酶 🐛 IV
弹性蛋白 🕊 酶
DMEM/F12 培养基 🐋
FBS 血 🦄 清
抗生素（青霉素链霉 🦟 素）
胰 🌷 蛋白酶/EDTA
细 🐎 胞 🐯 培养瓶 🐦
细胞培养板 🐦
方法组织采集
1. 从 🍀 拔除的 🌷 牙齿中收集牙周膜组织。
2. 用 🌴 DPBS 冲洗组织以 🦁 去 🦢 除血迹。
组织解离1. 将组 🐡 织切成 🐟 小块 🦉 （约 12 mm3）。
2. 将组织块放入含有胶原酶 IV 和弹性蛋白 ☘ 酶的消化溶液中 🐧 。
3. 在 37°C 下孵育 1 小 🌼 时，每 20 分 🌷 钟振荡一次。
细胞分 🌼 离和培养
1. 将消化后 🌷 的 🦁 组 🦉 织过滤过 70100 μm 尼龙网以去除碎片。
2. 将滤液离 🐶 心 5 分钟，800 x g。
3. 用 DMEM/F12 培养 🐴 基重悬细 🐝 胞沉淀。
4. 将细胞接种在涂有胶原 🪴 蛋白的细胞 🐎 培养 🐝 瓶中。
5. 在 37°C、5% CO2 条件 🪴 下培养。
细胞 🦁 扩增和 🦋 传代
1. 每 23 天更 🍁 换培养 🐘 基。
2. 当细 🌴 胞 🌴 达到 8090% 融合时，用胰蛋白酶/EDTA 溶液消化细胞。
3. 将细胞悬 🕊 液转 🐯 移到新的培养瓶中，并更换新鲜培养基。
细胞鉴定1. 用牙周膜干细胞标记物对细 🐛 胞进行鉴定，例如 CD44、CD271 和 STRO1。
2. 通过成骨成、脂和成软骨分化能力对多能性进行 💮 评估。
提示使用新鲜 🐘 的 🐘 牙周膜组织 🐘 以获得最佳结果。
消 ☘ 化时间和酶 🌳 浓度可能根据组织类型 🦆 而需要调整。
培养基中 FBS 浓度 🐳 可能需要优 🐝 化以维持细胞生长。
定期监测细胞培养物以确保细 🐳 胞形态和生长正常。
2、牙周膜干细胞可 🌹 分 🌷 化成什么细胞
成骨 🌵 细 🌼 胞 🐎
成牙骨 🌿 质细胞 🌾
成 🌺 纤 🐋 维细胞 🐈
上 🐝 皮细胞
神经 🐒 细 🦉 胞
3、牙周膜 🐘 干细胞原代提 🐅 取
牙 🐵 周 🦉 膜干细胞原代 🍁 提取
材料和 🐈 仪 🐛 器：
新 🐋 鲜拔除的人类牙周膜组织
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
小 🦁 牛 🕸 血清 🐧 (FBS)
胶 🐞 原 🌺 酶 💮 I
弹性 🦄 蛋 🐦 白 🦈 酶
培养皿细 🐳 胞滤网
培养基CO2 孵 🐅 箱 🕊
程序：1. 组织 💮 处 🌴 理 🐯
将 🐝 牙周膜组织 🐦 切分成小块。
用 🐧 DMEM/10% FBS 冲 🦢 洗组织块。
2. 酶 💐 消 🐘 化
将组织块放在含胶原酶 I (2 mg/mL) 和 🌵 弹 🌴 性蛋白酶 (0.5 mg/mL) 的 DMEM/10% FBS 中。
在 37°C 下消化 12 小时，每隔 30 分钟搅拌 🌼 一次。
3. 单细胞悬液 🐘
将消化后的组织块过滤通过的 70 μm 细胞 🌻 滤网。
用 🐅 DMEM/10% FBS 洗 🌷 涤细胞沉淀。
4. 细胞 🌹 培 🌷 养 🦊
将细胞悬液接种到培养基中培养基，通常由 DMEM、10% FBS 和生 🦍 长因 🐧 子组成。
将培 🪴 养皿置于 37°C、5% CO2 的 🐎 孵箱中 🦢 培养。
5. 细胞 🐘 标 🦢 记 🐕
为了鉴定牙周 🐧 膜 🐺 干细胞，可，以使用特定的细胞表面标志物例如 🌿 CD271、CD105 和 CD146。
可以通过流式细胞术或免疫荧光 ☘ 染色 🪴 进 🐅 行细胞标记。
注意 🐶 事 🦢 项 🦈 ：
使用新鲜组织非常重要，因为牙周膜干细胞对缺血 🐕 很敏感 🐴 。
酶消化时间和浓度应 🦍 根据组织的类型和大小进行优化。
培养基应含有适当的生长因子和营养物质 🐧 以支持牙周膜干细 🦅 胞的 🐵 生长。
培养细胞应定期监测并更换培养基 🐧 。
4、牙周膜干细胞原 🌺 代培养
牙周 🐕 膜干细胞原 🐕 代 🦄 培养
简介牙周膜干细胞（PDLC）是（存）在于牙周膜牙龈 🐴 和骨骼之间的牙周组织中的多能干细胞。PDLC 具（有自我更新和分化为多种牙周组织细胞例如成骨细胞成、纤 🌾 、维细胞牙）本。PDLC 质细胞的能。力的原代培养涉及从牙周膜分离和培养这些细胞
材料和 💮 设备
人/动物牙周膜组 🌺 织
无菌手术器械（例如解剖 🌵 刀、镊子）
无血清培养基（例 ☘ 如 🐵 Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F12）
抗生素 🌻 抗/真菌剂
生长因 🕷 子（例如 🦍 表皮生长因 🦟 子）
细 🌿 胞培 🐦 养板/瓶
培养箱程序
1. 牙周膜 🌲 组织 🦄 获取：
从 🦉 新鲜提取的牙齿或动物模型中获取牙周膜组织。
2. 组织解 🦁 剖 🌴 ：
使 🐋 用无菌器械小心地去除牙龈组织，露出牙周膜。
以 12mm 间隔刮取牙周膜，注意避免损伤相 🐴 邻组织。
3. 细 🦋 胞 🕊 分 🌵 离：
将刮下 🐟 的牙周膜组织剪碎成小碎片。
用胶 🦆 原酶溶 🌷 液消化组织，使细胞从基质 🐶 中分离出来。
4. 细胞培 🌸 养：
将离心的细胞悬浮液接种到细胞 🐞 培养板上/瓶中。
使用无血清培养基，并补充抗 🐈 生素抗/真菌剂和生长因子。
5. 细胞生长 🦄 和 🐱 扩增：
将细胞培养在培养箱 🦋 中，温度为 37°C，CO2 浓度为 🐶 5%。
定期 🦈 更换培养基，保持无菌条件。
细胞 ☘ 通常 🐯 在 12 周内贴壁，并开始扩增。
6. 细 🦆 胞鉴 🐺 定 🐅 ：
使用免疫荧光或流 🕷 式细胞术 🐳 等技术鉴 🌳 定 PDLC。
检测成纤维细胞标记（例如 vimentin、CD44）和（牙 🦍 周膜特异性标记例如 CD105）。
注意事项保 🐯 持无菌条件对于成功的原代培 🌼 养至关重要 🦢 。
优化培养条件（例如培养基组成和生长因子浓度）对于 PDLC 的 🦉 生长和分化至关重要。
定期细胞传代和冷冻保存对于长期 🦄 培养和 🌸 生物 🐈 应用非常重要。
应用牙周膜干细胞原 🌹 代培养 🦉 在以下方面具有广泛的应用 🦢 ：
牙周组织再生和 🌲 修复 🌴
颌 🐼 骨组织 ☘ 工 🌼 程
口腔粘 🦟 膜疾病的 🐈 研究
免疫调 🌷 节 🐼 和 🐠 组织修复
