干细胞培养琼脂配方（干细胞培养琼脂配方是什么）
- 作者: 杨鹿绫
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、干细胞培养琼脂配方
干细胞培养琼脂配方
成分：无血清培养基（如 DMEM/F12） 500 ml
BPE（牛小肠提取物） 50 ml
FBS（胎牛血清） 50 ml
L谷氨酰胺 5 ml (200 mM)
青霉素链霉素 5 ml (100 U/ml 青霉素，100 μg/ml 链霉素)
海藻酸钠 10 g 低粘度（ cP）
Na2HPO4·7H2O 2.13 g (15 mM)
MES 2.92 g (20 mM)
CaCl2·2H2O 0.223 g (2 mM)
步骤：1. 在无菌条件下，将无血清培养基、BPE、FBS、L谷氨酰胺、青霉素链霉素和海藻酸钠混合。
2. 用磁力搅拌器充分搅拌，直至海藻酸钠溶解。
3. 在培养基中加入 MES 和 Na2HPO4·7H2O，然后充分搅拌。
4. 加入 CaCl2·2H2O，搅拌至溶解。
5. 将配制好的琼脂液倒入无菌培养皿中，厚度约为 23 mm。
6. 储存琼脂板于 4°C 至使用前。
注意事项：
海藻酸钠的浓度会影响琼脂的刚度。较高的浓度会导致较硬的琼脂。
培养之前，需要用无血清培养基将琼脂板平衡过夜。
使用琼脂板时，请小心不要刮伤或损坏表面。
定期更换培养基以维持无菌条件和细胞健康。
2、干细胞培养琼脂配方是什么
干细胞培养琼脂配方
成分：牛血清蛋白 (BSA)：2%
琼脂：0.8%
乙醇 (70%)：足以使最终浓度为 40%
无菌水：余量
制备方法：
1. 将 BSA 和琼脂溶解在无菌水中，使其成为 2% BSA 和 0.8% 琼脂的溶液。
2. 在通风柜中，将乙醇加入溶液中，使其最终浓度为 40%。
3. 搅拌或涡旋混匀，直至所有成分完全溶解。
4. 分配溶液至培养皿或其他培养容器中，并将其置于通风柜中过夜挥发乙醇。
使用说明：
琼脂在培养皿中形成一层凝胶状涂层，为干细胞提供附着基质。
过夜挥发乙醇可去除任何残留溶液，并在使用前使琼脂变硬。
使用前，用无菌 PBS 或培养基洗涤琼脂涂层一次去除任何残留物。
将干细胞悬浮液接种到琼脂涂层培养皿中，并按照常规培养程序进行培养。
3、干细胞培养琼脂配方比例
基础琼脂配方：
琼脂粉：1 克/500 毫升培养基
培养基：500 毫升
添加剂：添加剂的比例取决于培养基的类型和干细胞系。以下是一些常见的添加剂：
血清：520% 无血清培养基
生长因子：根据制造商的说明
抗生素：根据制造商的说明
β巯基乙醇：0.1 mM
谷氨酰胺：2 mM
制备方法：
1. 在一瓶 500 毫升的培养基中称取并溶解 1 克琼脂粉。
2. 将培养基加热至沸腾并搅拌至琼脂完全溶解。
3. 将培养基从热源中取出并冷却至 4248°C。
4. 加入必要的添加剂并充分混合。
5. 将溶液分装到无菌培养皿或多孔板中。
6. 琼脂固化后，即可接种干细胞。
注意：配方的比例可能因不同类型培养基和干细胞系而异。
始终遵循培养基和添加剂制造商的说明。
灭菌所有器皿和试剂，以防止污染。
确保琼脂完全溶解，以避免琼脂块形成。
冷却至适当的温度后再加入添加剂，以避免使其失活。
4、干细胞培养琼脂配方表
干细胞培养琼脂配方表
基本配方：
干细胞培养基（具体配方取决于细胞类型） 500 ml
低熔点琼脂（浓度取决于所需凝胶硬度） 510 g
添加剂（可选）：
血清（浓度取决于细胞类型） 1020 ml
抗生素和抗真菌药物（浓度取决于所需保护水平） 适当的量
生长因子或其他补充剂（取决于细胞类型） 适当的量
步骤：1. 将干细胞培养基倒入烧杯或锥形瓶中。
2. 加入低熔点琼脂，搅拌至溶解。
3. 加入任何可选添加剂。
4. 加热混合物至琼脂溶解并煮沸，不时搅拌。
5. 将混合物从热源中取出并立即分配到培养皿或其他容器中。
6. 让琼脂凝固，通常需要 3060 分钟。
重要提示：
琼脂的浓度将影响凝胶的硬度。较高的浓度产生较硬的凝胶，而较低的浓度产生较软的凝胶。
干细胞培养琼脂应在无菌条件下制备。
琼脂凝胶应在使用前储存至少 24 小时以允许完全凝固。
