猪脂肪干细胞提纯 🐱 方法（猪脂肪干细胞提纯方法 🐎 有哪些）
- 作者: 陈书瑶
- 来源: 投稿
- 2025-07-27
1、猪脂肪 🌺 干细胞提纯 🦋 方法
猪脂肪干细胞提 🐳 纯方法
材料：猪脂 🦟 肪组织 🐘 （新鲜或冷 🌻 冻）
胶原 💐 酶 IV
DMEM/F12 培 🐒 养 🌾 基 🌷
FBS（胎牛血清 🌲 ）
离心管细 🐺 胞培养板
步骤：1. 脂肪 🌹 组织剪 🐱 切（机 🦢 械法）：
用锋利 🦆 的剪刀将脂 🐦 肪 🕷 组织剪成小块。
将剪碎的 🦉 脂肪组织放入离心管中。
2. 胶 🦉 原酶消化：
配制胶原酶 IV 消化液 🐋 胶原 🌺 酶（培 IV：1 mg/ml，DMEM/F12 养基：9 ml）。
将 🐶 胶原酶 IV 消化液加入离心管中，每克脂肪组织 🌿 加入消化 🦋 液 10 ml 。
将离心管置于 37°C 恒温振荡器中 🌳 ，以 💐 150 rpm 速度振荡 60 分钟。
3. 过 🐝 滤：
将脂肪组织消化液通过 100 μm 滤网过滤 🦢 ，除去未消化的组织碎片。
4. 离 🐕 心：
将滤过的消化液 🍀 以 💐 500 g 离心 5 分钟。
弃去上清 🐦 液。
5. 洗 🐝 涤 🐝 ：
用 DMEM/F12 培养基 🌷 重悬细胞沉淀，轻轻吹 🦄 打形 🦄 成单细胞悬液。
以 🐈 500 g 离 🌲 心 5 分钟。
弃去上 💐 清液 🌼 。
6. 去 🦆 红 🌹 细 🐝 胞：
用红细胞裂解 🐛 液重悬 🐞 细胞沉 🐼 淀。
按照制造 🦉 商的 🍀 说 🦅 明书进行操作。
以 500 g 离心 5 分 🐝 钟 🦉 。
弃去上清 🐞 液。
7. 培 🐋 养 🌳 ：
用 DMEM/F12 培养基重 🐟 悬 🐬 细 🦅 胞沉淀。
将细胞接种 🐕 到细胞培养板中。
每 🐺 口井接种 🌼 25×10^5 个 🐬 细胞。
在 🦊 37°C、5% CO2 培养 🐺 箱中培养 2448 小 🌼 时。
8. 贴壁细胞 🌸 选择：
培 🌲 养 🐋 2448 小时后，漂浮细 🐧 胞会自然死亡。
将培养 🦍 液 🐵 更换为新 🍀 鲜的培养 DMEM/F12 基，含 10% FBS。
继续培养 710 天，直到贴壁细 🐘 胞形成单层。
贴壁细胞即为猪脂肪 🕷 干细胞。
2、猪脂肪干细 ☘ 胞提纯方 🌹 法有哪些
猪脂肪干细胞提纯方法 🐬
1. 胶 🐵 原酶消化法
将少量脂 🐵 肪组织切 🦁 碎并清洗 🦟 。
将组织悬浮在含有胶原酶的溶液中，并在37℃下孵 🐠 育数小 🦅 时。
胶原酶消化可解离脂肪组织 🦋 ，释放干细胞 🐠 。
随后，将，细 🐞 胞悬液离心分 🌷 离 🌺 收集沉淀物中的干细胞。
2. 流 🌺 体剪切法
将脂肪组织切碎并 🐱 悬浮在生理盐水 🐧 中。
将悬液置于剪切力 🐋 施加装 🌷 置中（如涡旋搅拌器或组织匀浆器）。
剪切力可破 🐱 坏脂 🐼 肪组织中的 💮 结构，释放干细胞。
随后，将，细胞悬液离心分离收集沉 🐕 淀物 🍀 中的干细胞。
3. 机械分 🕸 离 🐦 法 🐬
将 💮 脂肪组织进行机械处理，如 🍀 涡旋 🐒 搅拌、离心或过滤。
这些过程可通过破坏脂肪细胞和细胞外基质 🐅 来释放干细胞。
随后，将，细胞悬液离心分离收集 🌸 沉淀物中的干细胞 🦟 。
4. 密度梯度离心法 🐝
将脂肪组 🌿 织悬浮在密度梯度介质（例如 🌵 非离子和连 🐟 续梯度介质）中。
离心后，干细胞会根据其密度沉降在不同密度 🐦 层的界面处。
随后，收集位于适当层（通常是中层或低密度层）的干细 🐶 胞。
5. 免疫 🐬 磁珠选择 🐦 法
使用与脂肪干 🐈 细胞表面标记物（如CD34或CD105）结合的免 🦉 疫磁珠。
将免疫磁 🌸 珠与脂肪组织悬 🐟 液 💐 孵育磁珠，会与干细胞结合。
使用 🦁 磁力柱收集与免疫磁珠结合的干细胞 🐵 。
6. 流式细胞 🐈 术分 🐴 选 🐈 法
使用与脂肪干细胞标记物结合的荧光抗 🐒 体。
将脂肪组织悬液孵育后，使用流式 🍀 细胞术根据荧光标记筛选和收集干细胞。
在 🕷 选择提 🐬 纯方法时，需要考虑因素包括 🐘 ：
目标应用 🐠
所需 🐶 干 🕊 细胞 🌿 数量
干细 🐕 胞 🐬 的纯度和活性
3、猪脂肪干细胞提 🐞 纯方 🐶 法是什么
猪脂肪干细胞提 🐅 纯方法
1. 脂 🐎 肪组 🦆 织采集
选 🐧 择健康 🦉 、体重超过 100 公斤的猪。
从猪背部或腹部 🐝 采 🌷 集脂肪组织。
2. 脂肪 🐅 组织消化
将脂肪组 🐡 织切成小块。
用 🌳 含有胶原酶和胰蛋白酶的消化液消化 🌼 脂肪组织。
消化时 🌷 间通常 🐶 为 12 小时，温度为 🐺 37°C。
3. 离心分离 🌵
消化后的脂肪 🌺 组织 🦅 进行离 🌳 心分离。
脂肪细胞会浮在顶 🌾 层，而底层则含有干细胞。
4. 密 🐒 度梯度离心 🌹
将底层 🐝 细胞进行密度梯度 🐱 离 🌴 心。
不同的细 🕷 胞类型 🐝 会根据它们 🕸 的密度在梯度介质中分离。
干细胞将聚集在特定密 🕊 度 🐅 层 🦆 。
5. 收集 🐦 和洗 💮 涤 🐈
将含 🐠 有干细胞的层收集起来。
用缓冲液洗涤干细胞，去除梯度介质 🐼 。
6. 活 🕊 力 🌻 检测 🕊
用流式 🦢 细胞术或其他方法检测干细胞的活性。
活性干 🐕 细胞 💮 通常表达特定表面标记 🐅 ，如 CD34 和 CD90。
7. 扩 🌷 增 🪴 和 🐒 培养
将活化 🦅 的 🐘 干细胞接种到培养 🦅 基中。
在适宜的培养条件下，干细胞会扩 🦆 增和分化 🦢 。
注意:脂肪干细胞提纯的效率受猪的 🐟 健康状况脂肪、组织的质量和提纯方法等因素影响。
培养基的成分和培养条件也需要 🍁 优化 🦉 以获得高活性的干细胞。
4、脂肪 🦆 干细胞怎么提取和回收
脂肪干细 🐒 胞的提取 🌹 和 🦍 回收
步骤 1：脂肪组 🌴 织 🐅 获取
通过抽脂手术从腹部、大腿或臀部等脂 🕊 肪 🐳 部位收集脂肪组织。
抽脂术通常使用 🪴 局部麻醉进 🦋 行。
步骤 2：脂肪组织消 🦟 化和分离
将抽出的脂肪 ☘ 组织在酶溶液中消化以分解脂肪细胞。
然后通过离心将脂 🐠 肪干细胞和其他细胞类型分离出来。
步骤 3：脂 🌺 肪干细胞培养
分 💮 离出的脂肪干细胞在富含生长因子的培养基中培养。
细胞在无 🌹 菌条件下 🍀 培养，以去除任何污染 🐶 物。
步骤 4：脂肪 ☘ 干细胞 🐘 扩 🦄 增
培养的 🐛 脂肪干细胞会分 🌷 裂 🌼 和增殖。
通过反复 🐱 传代，可以 🐵 将细胞扩增到所需 🕊 的数量。
步 🌸 骤 5：脂肪干细胞回收
扩增后的脂肪干细胞通 🐈 过离心从培养基中回收。
细胞用 🌼 无血清培养基洗涤并 🦢 悬 🐠 浮在生理盐水中或其他合适的溶液中。
其 🐕 他注意 🐞 事项：
脂肪干细胞的提取和回收程序 🐠 必须在无菌条件下进行，以防止污染。
提取 🦈 的脂肪干细胞的数量和质量取决 🐋 于供体和手术技术等因素。
回收的脂肪干细胞可用于研究、再生医学或临床应用 🪴 。
