造血干细胞计 🦆 数计算（造血干细胞计数的国际标准方案包括哪些主要内容）
- 作者: 郭沫雅
- 来源: 投稿
- 2025-05-03
1、造血干细胞 🐳 计数 🐡 计算
造血干 🐈 细胞 (HSC) 计数计 🦋 算
目的：确定骨髓 🐎 或外周血样本中的 HSC 数量。
材料：骨髓或外周 🪴 血样 🦁 本 🍀
CD34 抗 🦅 体 🦊
流式细胞 🐞 仪 🐕
流式细胞仪 🦈 分析 🐡 软件
步骤：1. 样本制 🕊 备：
收集骨 🌿 髓或外周血样本 🐕 。
用PBS洗 🍀 涤样本。
加入红细胞裂解液并孵育以裂 🌴 解红细胞。
2. 标 💮 记 ☘ ：
用 🐧 荧光标记的 CD34 抗体标 🕊 记细胞。
CD34 是 🐅 HSC 的表 ☘ 面标记。
3. 流式 🦉 细胞仪分析：
将标记的 🐕 细胞 🦊 分析在流 🐟 式细胞仪上。
设置门来识别 CD34+ 细 🌷 胞群。
4. 数 🌺 据 🌲 分析：
使用 🐠 流式细胞仪分析软 🌺 件计算细胞 CD34+ 的绝对计数。
绝对 🐳 计数 = (CD34+ 细胞数/总细胞数) x 样本体 🌹 积
5. 单位 🐎 转换：
通常 🐡 以每微升 (μL) 样本 🌻 的 HSC 数量表示计 🦟 数。
如果样 🌳 本不是 1 μL，请使用以下公式进行转换：
转换后的计数 = (绝对 🪴 计数 / 样本体积) x 目标体积 🌳
注 🐞 意 🐬 事 🦋 项：
精确的 HSC 计数需要使用高 🐕 质量的抗体和合适 🌴 的流式细胞仪分析设置。
HSC 的数量因个体而异，并 🦍 受年龄、健康 🐦 状况和其他因素的影响。
CD34 标记可 🐝 以识别大多数 🐴 HSC，但它可能不能识别所 🐺 有 HSC 亚群。
2、造血干细胞计数 🌴 的国际标准方案包括哪些主要内容?
造血干 🐒 细 🍀 胞计数的国际标准方案的主要内容包括：
1. 样本 🐳 采 🐱 集和制 🐦 备
骨髓 🦊 穿刺或外 🕸 周血采 🦋 集
白细胞分离（层析离心或流式细胞术分 🐟 选）
2. 抗 🦆 体 🦅 染 🐼 色
使用 CD34、CD38、CD90、CD45 和/或其他标 🐋 记物抗体对细 🌿 胞进行染 🐵 色
3. 流式细胞术分 🐶 析
定量测定表达特定抗原表型的 CD34+ 细胞的绝对数 🌹 量
根 🌼 据抗体染色的不同组合，对 🌷 ，细胞亚群进 🐋 行表征包括：
CD34+CD38 细胞（造血 🐕 干/祖细 🐎 胞 🐶 ）
CD34+CD38+ 细胞（成熟淋巴细 🐼 胞）
4. 数据 🐯 分析
使用专门的分析软件 🌻 计算造血干细 🌳 胞的绝对数量（单位细胞：或细胞/mL /kg）
考虑样本稀释度 🪴 、细胞活力和抗体效价等因素进行校正 💮
5. 品质 🦟 控 🦢 制
使用标 🐳 准化试剂 🐘 和方法
参与实验室间比较试验 🌸 ，确保结果的一致性和可比性
6. 报 🐺 告 🦍
提供造血干细胞计数 🐦 的明确报告 🐠 ，包括 🌸 ：
样本类型 🐈
使用的抗体 🐝 组合
CD34+ 细 🐦 胞 🌷 的绝对数 🌺 量
细胞亚 🦟 群分 ☘ 析（如适用）
3、造血干细 🦢 胞检测结果多少数值合格 🦅
造血干细胞检测 🐺 结果合格的数值范围因检测方法和单位而异。
骨 🐺 髓穿刺 🌾 活检：
有核细胞 (CD45+)：大 🦢 于 20%
髓 🦈 母细 🌸 胞 (CD34+)：大于 🐦 0.5%
外周血：流式细胞术 🦊 ：
CD34+ 细胞：对于 🌿 干细胞移植对于，> 0.2%；集落形成单位 (CFU) 分析，> 0.1%
CD34+CD38 细 🦄 胞（CD34+ 干细胞）：> 0.05%
定 🐝 量 🦊 PCR：
套细胞表面抗原 (CD34) mRNA 拷贝数：> 1000 个拷 💐 贝/μg RNA
血小板表面糖蛋白 (CD41a) mRNA 拷贝 🌹 数：> 500 个拷贝/μg RNA
注意：这些是参考值，特定合格范 🐎 围可能因实验室而异。
造血干细胞计数会受 🐵 到年龄、性、别健康 ☘ 状 🦊 况和检测时机等因素的影响。
医生会根据患者 🦈 的具体情况解释检测结 🐎 果并确定是否合格。
4、造血干细胞计数的国际标准方案 🐎
造血干细 🐋 胞 🍁 计数的国际标准方案
目的建立用于造血干细胞 (HSC) 计数的标准化方法，以确保结果之间的可比性和可靠 🦈 性。
范围本方案适用于所 🐋 有用于 HSC 计数的实验室。
定义造血干细胞 (HSC)：能够自我更新并产 🌲 生所有类型血液细胞的未分化细胞。
CD34：一种在 HSC 和原始 🐈 造血 🕷 祖细胞表面表达的跨膜糖蛋白。
试剂抗 CD34 单 🌹 克隆抗体 🐡
流式细胞术缓冲 🦟 液
流式 🌴 细 🦁 胞仪 🌼
程序1. 样 💮 品 🐅 制备
从新鲜或冷冻 🐛 的骨髓、外周血 🦊 或 🐬 脐带血中收集单核细胞。
使用 🕷 红细胞 🐡 裂解缓冲液 🐬 裂解红细胞。
用流式细胞术缓 🦍 冲液洗涤细胞。
2. 免疫染色 🦄
用抗 🐘 CD34 单克隆抗体 🐈 对细胞进行标记。
孵育 30 分 🦍 钟 🐵 ，4°C。
用流式细胞术 🦈 缓冲液洗涤细胞。
3. 流 💐 式细胞术采集
使用 🌲 流式 💮 细胞仪 🐅 采集细胞。
门控 CD34+ 细胞群以排除碎片和非特 🐵 定结合。
4. 数 🐋 据分 🐎 析 🌷
分析 CD34+ 细 🐛 胞群的百分比和绝对数量。
使用合适的数据 🌷 分析软件 🌸 进行计 🦅 算。
报告报告 CD34+ 细胞的 🪴 百分比和 🐞 绝对数 🦢 量。
指定使用的 🦄 方法和试剂。
质量控制使用阳性 🕊 对照和阴性对照进行 🦉 定期质量控 🐅 制。
参与外部质量评估计划 🦆 。
定期 🐕 校准流式细胞仪。
注意事项该方案适用于 🕊 计数表达 CD34 的 HSC。其他方法可用于计数其 🌼 他 HSC 群。体
HSC 计数会因不 🐞 同试剂、仪器和分析 🪴 方法而 🌷 异。
重要的是使用与已发 🌾 表研究相同的标准化方法和试剂 🦉 进行比较。
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