小鼠 🐈 肺干细胞分离方法（小鼠神经干细胞的分离及培养实验）
- 作者: 朱荞汐
- 来源: 投稿
- 2025-07-13
1、小鼠肺 🦋 干细胞分离方法
小 🌳 鼠肺干细胞 🌴 分离方法 🐈
所需材 🐯 料：
小鼠Hank's 平衡 🐳 盐 🐝 溶液 (HBSS)
胶 🐵 原酶 🐟 IV (300 U/ml 在 HBSS 中 🐧 )
胰蛋白 🌼 酶 (1 mg/ml 在 🍁 HBSS 中)
红 🐺 细胞裂解 🐈 缓冲液
富含血 🐅 清的 🐱 培养基
细胞 🐺 过滤器 🐕 （100 μm）
离心机和培 💮 养 🌿 板
步骤：1. 获取肺组织：处死小鼠取 🦄 ，出肺。去。除胸膜和支气管主分支
2. 酶消化：将肺切成小块，放 🐛 入含有胶原酶 IV 和胰蛋白酶的 HBSS 溶液中 🐶 。在 37°C 孵育 30 分，钟。偶尔涡旋
3. 过滤：将消化后的肺组织通 🐎 过的 🦉 100 μm 细胞过滤器过滤到培养板中 🌷 。
4. 红细胞裂解：在培养 🦄 板中加入红细胞裂解缓冲液 🦟 ，孵育 5 分钟。
5. 离心：将 🌹 细胞悬浮液以离心 300 x g 分 5 钟。
6. 富集：去除上清液。小。心地重悬 🐕 细胞并将其转移到新的培养板中
7. 培养：将细 🦢 胞重悬在富含血清的培养基 🕊 中，并置于 🌹 含的培养 5% CO2 箱中 37°C 。
纯化 🦈 肺 🐛 干细胞 🐕 ：
分离的细胞群可 🌷 以使用特定于肺干 🦍 细胞的表面标记进行进一步纯化。例如：
Sca1：Sca1 抗 🌼 体 💐
CD34：CD34 抗 🦄 体 🦍
CD45：CD45 抗 🐅 体
使用流式细胞术或磁性细胞分选器从分离的 🦊 细胞群中选择表达这些标记的细胞。
提示：使用新鲜小鼠肺获得最佳结果 🌷 。
优化酶消化时间以获得最大的细胞产 🐈 量和 🐝 活力。
小心 🌷 操作，因为机械应力会导致 🐶 细胞损伤 🌵 。
筛选纯化的细胞群以验证肺干细胞的特性，例如自我更 🐱 新、多分化和对损伤的修复潜力 🐵 。
2、小鼠神经干细胞的 🍁 分离及培养实验
小鼠神经干 🌾 细胞的分离及培养实 🌹 验
材料 🐳 和试剂
胚胎小鼠 🐼 （E14.5）
Hank's 平衡盐 🦆 溶液 (HBSS)
胰蛋白酶 🕸 EDTA 溶 🌷 液 🦋
神经元基础培 🐴 养基（含 B27 和神经生 🌿 长 🌸 因子）
聚赖氨酸 🐛 包被的培 🐅 养 🦟 板
神经干细胞 🐶 培养基（含 EGF 和 FGF2）
方法1. 小鼠 🐎 胚胎解剖 🦈
处死 E14.5 胚胎小鼠 🦢 并取出 🐧 头部 🌴 。
在无菌 🐧 条件下，去 🐠 除皮肤和骨骼。
2. 神经干 🦉 细 🕊 胞的分离
将 🍀 大脑组织切碎成小块，用 HBSS 洗涤两次。
向组织块中加 🌲 入胰蛋白 🐟 酶EDTA 溶液并孵 🌹 育 30 分钟，37°C。
用 🐈 HBSS 洗涤并离心收 🐛 集 🐎 细胞。
3. 初级神经干细胞培养 🐧
将细胞重悬 🐟 于神经元基础培养基中，并接种到聚赖氨酸包被的培养板 🌸 中。
在 37°C、5% CO2 的孵 💮 箱 🐠 中 🌴 培养 24 小时。
4. 神经干细胞扩增 🦁
24 小时后 🍁 ，除，去上清液向培养物中加入新鲜 🐴 的神经干细 🐠 胞培养基。
每 🐼 34 天更 🐱 换培养基，直至神经干细胞形成神经 🐟 干细胞球。
5. 传 🦁 代 🌴
当神经干细胞球达到适当大小时，用胰蛋白酶EDTA 溶 🦈 液消化。
将细 🐳 胞重悬于神 🦋 经干细胞培养基中，并传代到新的培养板中。
6. 分 🌿 化 💐
要将神经干细胞分化成神经元 🐬 或神经胶质细胞，需要改变培 🌴 养基。
神经元分化：用包 🐴 含脑衍生神经营养 🦋 因子 (BDNF) 的神经元分化培 🐋 养基更换培养基。
神经胶 🐕 质细胞分 🦢 化：用包含血清或白蛋白的培养基更换培养基。
结果分离出小鼠神 🐅 经 🌷 干细胞，形成 🐱 神经干细胞球。
在神经干细 🌲 胞培养基中神经干细胞，可以扩增和维持未分化 🌼 状态。
通过改变培养基，神 🦈 经干细胞可 🦄 以分化成神经元或神经胶质细胞。
注意事项无 🦟 菌 🐼 操作至关重要 🌿 。
胰蛋白酶EDTA 消化时间应优化以 🦋 获得最大的神经干细胞产量。
神经干细胞培养需要严格遵守无菌操 🍁 作和细胞培养技术 🐅 。
分化的诱导条件可能因不 🐶 同的实验而 🦅 异，需要进行优化 🐠 。
3、小鼠造血干细胞分离 试 🐦 剂盒
小 🦊 鼠 🐵 造血干 ☘ 细胞分离试剂盒
产品描述小鼠造 🦈 血干细胞分离试剂盒是一种专为从小鼠骨髓和脾脏中分离造血干细胞 (HSC) 而设计的试 🐱 剂盒。该试剂盒基于 🐎 磁性激活细胞分选 (MACS) 技术，利。用抗原特异性抗体和磁珠的结合来纯化靶细胞
试 🐞 剂 🦊 盒内容 🐝
抗 🐒 小 🦆 鼠 CD34 磁性微 🐼 珠
抗小鼠 Ter119 磁性微 🪴 珠
预分 🐴 离 🕷 缓冲液
MS 柱 🌳 和架子 🐎
洗涤 🐡 缓冲液
主要特点高 🐛 纯度：该试剂盒 🐳 可分离 💐 高达纯度 95% 的 HSC。
易于使 🌲 用：MACS 分选过程简单且直接，只需几个步骤即 🐵 可完成。
可扩展性：该试剂盒可用于处理从 100 到 10^9 个细胞 🐺 不等的样品量。
灵活性：该试剂盒可与不同的分 🐧 选仪和试剂结 🐵 合使用。
应用HSC 研 🐳 究
干细 🐧 胞 🌾 移植
再生 🐝 医学
血液 🐶 学 🐎 研究
使用方法1. 准备样品：收集小鼠骨髓或脾脏 🍀 细胞，并用预分离 🕊 缓冲液稀释。
2. 磁性标记：将抗 CD34 和磁 🐛 性 Ter119 微珠与细胞 🦅 样品孵 🦢 育。
3. MACS 分选：通过 MS 柱将靶细胞与非靶 🌼 细胞分离开 💮 来 🐦 。
4. 洗涤 🦢 和 🐳 收集洗涤：柱以去除未 ☘ 结合的细胞，然后收集纯化的 HSC。
存储信息储存抗体微 🌷 珠于 28°C，避 🐺 免光照。
储存缓冲液于室温 🦊 下 🐡 。
4、小鼠肺干细胞分离 🌿 方法有哪些
小鼠 🦁 肺干细胞 🌼 分离方法
1. 机 🌿 械分 🌹 离 🐺
酶解法：将肺组织切碎，用，胶原酶和透明质 🦍 酸酶等酶消化将细 🌴 胞释放出来。
剪切法：使 ☘ 用剪刀 🌳 或研磨器将肺组织机械剪碎 🐅 ，释放细胞。
2. 免疫 🐺 磁 🦄 珠分 🐟 离
使用抗体磁 🐧 珠标 🌼 记特定表面标志物（如 Sca1、CD24）阳性的细胞。
将标记的 🐠 细胞与磁珠混合磁珠 💐 ，会将目标细胞与其他 🐵 细胞分离。
3. 细 🐦 胞分选
流式细胞术分选：使用荧光标记抗体识别特定细胞表面 🌹 标志物阳性 🌵 的细胞 💐 ，然后通过分选仪将其分离出来。
磁性分选：类似于免 🦉 疫磁珠分离，但使用磁珠标记细胞并磁性分 🦢 选仪分离。
4. 基于 🐅 培养物的分离
球体形成测定（sphereforming assay）：将肺细胞培养在富含生长因子的无血清培养基中，干 🐬 细胞会形成称为球体的三维结构。
克隆形成测定（colonyforming assay）：将肺细胞稀 🦉 释播种在培养皿中，干细胞会形成细胞克隆。
5. 转 🐈 基因 🐞 方 🐠 法
荧光报告基因敲入：将 🌳 编码荧光蛋白 🐯 的报告基因敲入小鼠干细胞的启动子中，使干细胞表达荧光蛋白。
CreloxP 系统：使用 Cre 重组酶特异性地激活或失活特定基因，从而标记或剔除 🌼 干 🌼 细胞。
注 🌼 意事 🌸 项 🌼 ：
选择分离方法时要考虑目标细胞的性 🌻 质和下游应用。
分离过 🐎 程应小心进行，以避免对细胞造成损伤。
分离后需进行细胞表征，以 🌷 验 🐘 证其干细胞特性。
