小鼠心脏干细胞提取（小鼠心脏干细胞提取 🌳 实验报告）
- 作者: 刘茉一
- 来源: 投稿
- 2025-10-11
1、小鼠心脏干细胞 🐟 提取
小鼠心脏干细胞提取 🦊
材料：小鼠
生 🐱 理盐 🐺 水
胰 🐱 蛋白酶
胶 🐘 原 🐟 酶 🐅 II 型
FBS心脏干细 🐺 胞培 🍁 养基
培养板管道枪和吸 🦁 头
步骤：1. 动物 🕊 准备
处死小鼠，取其心脏 🐯 。
2. 心脏 🐎 离解 🐝
将心 🦅 脏放入装有冷生理盐水的 🐯 培 🦢 养皿中。
用小剪 🦄 刀或手术刀切碎心脏组织。
加入胰蛋白酶和胶原酶 II 型，在 🐬 37°C 搅拌孵育 🐼 20 分钟 🐴 。
3. 酶 🐟 消化 🦢 停止
加入 FBS 停 🦟 止 🐠 消化反应。
用 🐕 管道枪反复吹打细胞悬液，使其均匀 🐋 。
4. 过 🦍 滤 🦟
用 70 微 🐞 米的细胞 🕸 过滤 🐅 器过滤细胞悬液。
收集过滤后的细胞 🐎 。
5. 离 🦈 心和 🦆 重悬 🐬
以 300 x g 离心 🐈 5 分钟，去 🐧 除 🐺 上清液。
用心 🐞 脏干细 🐅 胞培养基重悬细 🐡 胞。
6. 培 🐟 养 🦍
将细胞接种到培养板 🌾 中。
在 37°C、5% CO2 孵育 🌵 箱中培养。
定 🐛 期更换培 🌾 养基。
7. 心脏干细 🐱 胞 🦋 鉴定
使用免疫细胞化学或流式 🐵 细胞术来鉴定心脏干细胞。
提示：使用新鲜的 🦢 小鼠心脏组织以获得最 🐋 佳的结果。
优化酶 🦆 消化时间以最大程度地提高细胞活力。
定期监测 🦢 细胞生长并根据需要传代。
2、小鼠心脏干 🦅 细胞提取实验报告
小鼠心脏干细 🍁 胞提取实验报告
心脏干细胞具有再生心肌组织和修复心脏损伤的潜力。本实验旨在从小鼠心脏中 🌷 提取干细胞，以。研究其特性和应用
材料 🦉 和方法
小鼠雄性 🐞 C57BL/6 小鼠（812 周龄）
雌 🐛 性 C57BL/6 小 🌻 鼠（812 周龄）
试剂 🐝 和设 🕸 备
Hanks 平衡盐溶液 🐞 (HBSS)
0.1% 胶 🦢 原酶 IV
0.25% 胰 🐬 蛋 🐠 白酶
培 🌷 养基（DMEM/F12、20% FBS）
细 🐦 胞表面 🌿 标志物抗体：ckit、Sca1、Lin
FACS 分 🪴 选仪
方法1. 组织提取：收集小鼠 🌷 心脏，切 🌿 ，碎成小块在 HBSS 中洗涤。
2. 酶解：将组织培养在含胶原酶 IV 和胰蛋白酶 🐈 的溶液中 30 分钟，每分钟 10 轻柔 🐋 涡旋一次。
3. 离心沉淀离心：酶消化液，收集沉淀 🐛 物。
4. 免疫标记：将沉淀物重悬在含 ckit、Sca1 和 Lin 抗 🍁 体的培 🐕 养基中，孵育 30 分钟。
5. FACS 分选：使 FACS 用分选 🍀 仪将 🐒 ckit+、Sca1+、Lin 细胞 🌼 分离出来。
6. 细胞培养 🦁 ：将分选后的细胞培养 🐛 在培养基中，每周更换一次培养 🕷 基。
结果细胞提取：从每个 🐶 小鼠心脏中提取到约个 🐱 细 🌿 胞 100,000 。
FACS 分选分选：FACS 后，ckit+、Sca1+、Lin 细胞的纯 🐈 度大于 95%。
细胞培养：分选后的细胞在培养基中存活并 🐼 增殖。
讨论本实验成功地从小鼠心 🐘 脏中 🌹 提取了干细胞。这些细胞表现出 ckit+、Sca1+、Lin 的表型，与心脏干细胞的 🦈 已知标志物一致。FACS 分。选确保了细胞的高纯度
培养后，干，细胞保持存 🐵 活和增殖表明它们具有 🐴 干细胞特性。进。一步的研究将集中于表征干细胞的再生能力和心脏修复中的应用
结论我们成功地从小鼠心脏中提取了心脏干细胞。这些细胞具有心脏干细胞的特征 🦅 ，并。为研究其再生潜力和心脏修复应用提 🐈 供了有价值的材料
3、小鼠心脏干细胞 🌻 提取方法
小鼠心脏干细胞 🦍 提取方法
材料：小鼠
细 🐋 胞培养基（含 10% 胎牛血清 🪴 ）
胶 🌻 原 🌲 酶 🐟 II
DNase I
磁珠分离系统 🐺 （针对 cKit 或 sca1）
细胞 🐘 培养 🐋 板
血 🌼 细胞计数器和培养 🕷 液
步骤：1. 小 🦁 鼠分 🪴 离 🐵
给小鼠注射麻 🌷 醉剂，然后安乐 🦍 死。
打开胸腔，提 🐠 取心 🐕 脏。
将心脏切碎并放入含有细胞培养基的培养皿 🐦 中。
2. 消 💐 化 🦟
用胶原酶 II 和 DNase I 消化心脏组织 3060 分钟，37°C 孵育 🌵 。
定期用吸管吹打组 🐳 织，以帮助消 🐺 化过程。
3. 细胞 🕸 分 🦆 离 💐
消化后，将 🐴 细胞悬液过 🐟 滤通过细胞过 🐋 滤 100 μm 器。
用 🌺 含 10% FBS 的细胞培养基洗涤细胞两次。
4. 磁珠分离 🌺
根 🦊 据制??造商的说明，使用磁珠分离系统选择 cKit 或 sca1 阳 ☘ 性细胞。
洗涤 🦋 细胞，去除未 🌳 结合的磁珠。
5. 细 🐵 胞培 🌴 养 🦄
将分离后的 🐱 干细胞接种到预涂 🌲 有纤维连接蛋白的细胞培养板中。
使 🕷 用含有生长因子的细胞培养基培养细胞 🌻 。
6. 细胞计数和 🦊 鉴定
使用血 🐵 细胞计数器计数培养的 🌾 细胞。
通 🌼 过流式细胞术或免疫组化分 🐛 析来鉴定 🐘 干细胞，检测或 cKit 表 sca1 达。
提示：使用新鲜心脏组 🐴 织 🐦 以获得最佳产率 🐺 。
消化时间应根据心脏组织的大 🦢 小和年 💮 龄而调整。
磁珠分离步骤可根据所使用的磁珠分 🦈 离系统而有所不同。
定期换液 🌳 以 🐶 保持细胞健 🦊 康。
4、小鼠心脏 💮 干细胞提取 🐅 原理
小鼠心脏干 🕊 细胞提取原理
心脏干细胞（CSCs）是从心脏组织中分离出的具有 🌹 自我更新和分化潜能的特殊细胞群。小鼠心脏干细胞提取通常遵循以下步 🌺 骤：
1. 心脏组 🌾 织采集 🍀 ：
从 🐼 健 🌿 康小鼠中 🐕 取下心脏。
用生理盐水冲洗心脏以去除 🐡 血 🐬 液。
2. 酶 🌼 消化 🐼 ：
使用胶原酶和 🐈 其他蛋白水解酶将心脏组织 🦟 解离成单个细胞。
孵育时间和酶浓度会根据具体方案而 🐳 有所 🐎 不同 🦄 。
3. 细胞分离 🐶 ：
利用密度梯度 🌺 离心或磁性珠分选等方法分离，出对心 🐺 脏干细胞标记物呈阳性的细胞。
这 🦁 些标记物可能包括：
ckit
Sca1
CD31
4. 培养 🦍 和扩增：
将分离出的细胞接种到富含 🐯 生长因子 🌻 的培养基中。
创建合适的培养条件 🐝 ，促进心脏干细胞的增殖和维持 🐬 其干细胞特性。
可能需要额外的标记物或分选方法来纯化心脏干细 ☘ 胞亚群。
原理：小鼠心脏干细胞提取 🐱 原 🦢 理 🕊 基于以下原理：
异质性：心 🐶 脏组织包含多种细胞类型包，括心脏干细胞。
标记物表达：心脏干细胞表达独特的表面 🐝 标记物，可将其与其他心脏细胞区分开来。
酶消化酶消 🌲 化：可 🕸 以温和地解离心脏组织，释，放出单个细胞同时保持细胞的 🌼 完整性。
细胞分离：密度梯度离心或磁性珠分选等 🦟 技术可根据细胞 🦄 的密度或标记物表达对其进行分离 🕷 。
干细胞特性：心脏干细胞在适 🕸 当的培养条件下具有自我更新 🕸 和分化成不同心脏细胞类型的能力，包括心肌细胞、平滑肌细胞和内皮细胞。
通过遵循这些步骤，可，以从小鼠心脏组织中提取出富含心脏干细胞的细胞群 🌹 体用于进一步研究和治疗应用。
