小鼠胚胎干细胞消化（小鼠胚胎干细胞可以来自囊胚中的）
- 作者: 马毅霖
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、小鼠胚胎干细胞消化
小鼠胚胎干细胞消化
材料：小鼠胚胎干细胞培养物
0.05% 胰蛋白酶EDTA
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（PBS）
含10% 小牛血清的培养基
步骤：1. 移除培养基：从培养物中小心移除培养基。
2. 加入胰蛋白酶：向细胞加入0.05%胰蛋白酶EDTA，足以覆盖细胞。
3. 孵育：将培养物在37°C下孵育57分钟，或直至细胞从培养基底脱离。
4. 停止消化：加入相同体积的含10%小牛血清的培养基以停止消化作用。
5. 离心：将细胞悬液在1200 rpm下离心5分钟。
6. 移除上清液：小心移除上清液。
7. 重悬细胞：将细胞重悬在新鲜培养基中。
注意事项：
消化时间应根据培养物的年龄和密度进行调整。
避免过度消化，因为这会导致细胞损伤。
如果细胞仍然附着在培养基底上，可以重复胰蛋白酶处理步骤。
消化后立即使用细胞，或将它们存放在冰上，直到使用为止。
2、小鼠胚胎干细胞可以来自囊胚中的
内细胞团
3、小鼠胚胎干细胞最早于多少年获得
1981年
4、小鼠胚胎干细胞消化酶的作用
小鼠胚胎干细胞消化酶的作用
消化酶在分离和培养小鼠胚胎干细胞 (ESC) 中起着至关重要的作用。它们用于从培养皿中分离细胞并制备单细胞悬液，以便进行进一步分析和培养。
消化酶类型
最常用的消化酶组合是胰蛋白酶和乙二胺四乙酸 (EDTA)：
胰蛋白酶：一种蛋白质水解酶，它切割细胞外基质 (ECM) 中的蛋白质，促进细胞从培养基质中分离。
EDTA：一种螯合剂，它螯合钙和镁离子，从而削弱 ECM 的结构并促进细胞的分离。
其他用于 ESC 消化的酶包括：
解离酶：从鲍鱼中提取的酶，它可以温和地裂解细胞间连接。
胶原酶：一组酶，可以降解胶原蛋白，ECM 的主要成分。
消化步骤ESC 消化的典型步骤包括：
1. 用含消化酶的溶液覆盖 ESC。
2. 在 37°C 孵育一定时间（例如，515 分钟）。
3. 用抑制消化酶活性的培养基冲洗细胞。
4. 通过离心收集单细胞悬液。
选择合适的消化酶组合
选择正确的消化酶组合对于有效地分离和培养 ESC 至关重要。因素包括：
细胞系的敏感性：不同的 ESC 系对不同消化酶的敏感性不同。
培养基质：ECM 的组成会影响所需的消化酶类型。
所需的细胞完整性：温和的酶（例如解离酶）可最大程度地提高细胞生存能力，而更强的酶（例如胶原酶）可提供更彻底的分离。
考虑事项消化时间应经过优化，以最大程度地提高细胞分离和生存能力。
重要的是要完全抑制消化酶活性，以防止对细胞造成损害。
消化后应尽快使用 ESC，以尽量减少死亡和分化。
