小鼠干细胞怎么提取（小鼠干细 🦢 胞提取用什么 🐬 部位）

1、小鼠干细胞怎 🦋 么提取

小鼠胚 🐼 胎 (9.513.5 天 🕊 )

Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)

胎 🐋 牛 🕸 血清 (FBS)

非 🦅 必需氨 🐼 基酸

白 🐯 蛋白 (BSA)

胶 🍀 原 🌾 酶 🦈 (0.25%)

DNase I (100 U/mL)

PBS (含 🕸 2% FBS)

细胞 🐳 过 🕊 滤器 (40 或 70 μm)

1. 准备胚 🌼 胎：从 🐕 怀孕的小 🦄 鼠中取出胚胎，并用 PBS 洗涤。

2. 去除内脏：使用解剖剪 🦁 刀或镊子去 🐒 除，胚胎的内脏 🐳 。

3. 胶原酶消化：将胚胎放 🐛 入含有胶原酶和 DNase I 的培养基中。在的 🦆 37°C 孵箱中搅拌 2030 分钟，直 🐞 。至组织完全消化

4. 过滤：用细胞过 🐼 滤 🐶 器滤出消化后的细胞。

5. 离 🦁 心：在离心 300 x g 分 5 钟。

6. 重悬：将细胞重悬在 🐶 含 10% FBS 的新鲜培养基中。

7. 培养：将细胞接种 🦉 到涂有明胶的 🐴 培养皿中。在的培养 37°C 箱中培养，环境为 5% CO2。

8. 形成菌落：小鼠干细胞将形成分离的菌落。大约 🐦 710 天后菌落，可。以被挑选和传 🐬 代

使用无菌技术至关重 🐎 要 🐞 。

胚胎的年龄和发育 🌵 阶段会影响干细胞的产量和质量。

培养基应定期更换以保持最佳生长条 🐈 件。

小鼠干细胞可以长期在体外培养，但 🐴 需要 💐 定期传代。

2、小鼠干 🌹 细胞提取用什么部位

3、小鼠神经 🐬 干细 🌺 胞提取方法

小鼠神经干细胞提取方 🐘 法

68 周龄 🐕 小鼠

无菌 PBS 溶 🦍 液

无血 🌻 清培养基 🐱 ：DMEM/F12 + N2 + B27

去粘附 🦆 剂 🕷 （Dispase II 或 Accutase）

胰 🐯 蛋 🐯 白酶 🕷

琼脂糖酶 🕸

聚乙二醇 🦍 （PEG）4000

1.6% 琼脂糖（在 🦍 PBS 中 🦊 ）

70% 乙 💮 醇 🍀

1. 小鼠屠宰 🦄 ：用二氧化碳窒息法处死小鼠。颈部消毒后，解。剖 🐎 小鼠并取出大脑

2. 脑膜去除：将大脑置于无 🐛 菌 PBS 溶液中，用镊子小 🐵 心去 🐯 除脑膜。

3. 切碎大脑：将大脑切成小 🐞 块（约 1 mm3），转移到含有 🦢 无血清培养基的培养皿中 🦊 。

4. 消化 🐧 ：加入去粘附剂（每 1 g 组织 2 mL）和 🌴 （胰 1 g 蛋白酶每组织 1 mL）。37°C 孵育 15 分钟，轻 🐯 。柔摇晃

5. 尖 🐶 端吹打：用移液枪尖端吹打组织，直至组织解离成单细胞悬液。

6. 过滤：将细胞悬 🐱 液通过 40 μm 的细胞滤网过 🌳 滤。

7. 去除髓鞘：在琼脂糖酶溶 🐛 液（每 🦅 10 mL 无血清培养基琼脂糖酶 0.5 mL 中）孵育 🐱 细胞悬液 30 分钟，37°C。

8. 密度梯度离心：用 PEG 4000 制 🐡 备密度 🐱 梯度溶液（4%、8% 和 16%）。将细胞悬液小心分层到密度梯度 🌹 溶液上离心分。1200 x g 钟 45 。

9. 神经 🐝 干细 🐺 胞 🐴 收集收集：和 8% 介 16% 质界面处的细胞。

10. 琼脂糖嵌入：将收集的细胞悬液与琼脂糖 1.6% 混合 🐺 ，每 🐛 孔播种 个细 🦢 胞。

11. 固化 🐅 琼脂糖：室温下静置 510 分钟，直至琼脂糖固化。

12. 培养：用 🐳 无血清培养 🌺 基培养神经干细胞。

使 🐬 用无菌技术至关重要。

在 🌷 培养基中加入抗生素可以防止细菌污染。

神经干细胞可以增殖并分 🐕 化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。

4、小鼠干细胞提取 🦋 用什么鼠

C57BL/6 小 🍀 鼠 🐱