小鼠脂肪干细胞 💐 制备（小鼠脂肪干细胞制备实验报告）
- 作者: 陈星野
- 来源: 投稿
- 2025-08-22
1、小鼠脂肪干 🕷 细胞制备
小鼠脂 🐕 肪干 🌿 细胞制 🍁 备
材料 🐬 和试剂 🦄
小 🍀 鼠脂肪组织
磷酸缓冲 🐵 液 🐟 (PBS)
胶 🦅 原 🐯 酶 🌴 IV
DNase I
红 🐼 细胞裂解缓冲 🐝 液
培养基 🐦 ：Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 补充 🐡 10% 胎牛血清 (FBS)
细 🕷 胞培 💐 养 🪴 板
步骤1. 小鼠脂 🐎 肪组织采 🦊 集
麻醉小 🐶 鼠并消毒取样 🪴 区域。
使用无菌手 🌴 术器械，采集腹部或背部皮下 🌲 脂肪组织 (~2 克)。
将 🦍 脂肪组织转移到装有冷 🌷 PBS 的无菌培养皿中。
2. 胶 🍁 原 💮 酶 🐼 消化
将脂肪 🦊 组织切 🦟 成小块 🌳 。
加入胶原酶 IV 溶 🕷 液 (1 mg/mL，用 DMEM 配制) 并孵育 1 小时，37°C，120 rpm 摇动。
加入 DNase I (100 μg/mL) 并 🍁 孵育 15 分钟，37°C，120 rpm 摇动。
3. 机械 🌿 解 🌺 离
用移 🦅 液管吹打脂肪组织以机械解离 🦋 。
过滤细胞悬液以去除碎片 🐘 。
4. 红细 🐧 胞裂解
向细胞悬液中加入红细胞 🌳 裂解 🌷 缓冲液并孵育 5 分钟，室温。
离心细胞悬液并 🦊 丢弃上清 🌴 液 🐕 。
5. 细 🐋 胞 🦍 培 🪴 养
用培 🌾 养基 🌾 重悬细胞并接种到培养板 🦢 中。
将细胞 🦆 培养在培养 37°C、5% CO2 箱中。
6. 培养和 🐼 扩增 🐴
每 23 天 🐬 换一次培 🦢 养基。
当细胞达到 8090% 汇 🐶 合度时 🐦 ，传代细 🌷 胞。
提示使用无菌技术至关 🐘 重 🦄 要，以 🐘 防止污染。
胶原酶消 🐟 化时间和温度可能因脂肪组 🐋 织类型而异。
过滤步骤可 🦢 以去除未 🌷 消化的脂肪和 🌵 纤维组织。
红细胞裂 🐎 解 🌷 可提高细胞纯度。
理想情况下，在，进行细胞分析或实验之前应表征脂肪干细胞并确认 🌸 其多向分化潜能。
2、小 🦋 鼠脂肪 🌴 干细胞制备实验报告
小鼠脂肪 🐺 干细胞制 🐝 备实验报 🦍 告
实验目的本实验旨在分离和分离小 🪴 鼠脂肪干细胞（ADSC）。
材料 🐕 和 🦊 方 🕊 法
材料小 🐕 鼠（C57BL/6，68 周龄）
肥胖 🌹 剪刀
培养皿无 🐡 菌 PBS
0.25% 胰 🐳 蛋 ☘ 白 🦉 酶/EDTA
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
含 🦄 10% FBS 的 🐒 DMEM
细胞过 🌾 滤 🐳 器 🌷 (40 μm)
离心机流式 🌺 细胞 🌸 仪
方法1. 动 🦅 物准备：将小 🐺 鼠 🐘 麻醉并剃除腹部的毛发。
2. 脂肪 🐧 组织切除：用肥胖剪刀沿着腹中线切开皮肤，暴露出皮下脂肪层。小心切除约 1 克 🐞 。的脂肪组织并将其转移到无菌培 🦋 养皿中
3. 胶原蛋 🌸 白酶消化：将脂肪组织切成小块并加入含 0.25% 胰蛋白酶/EDTA 的 DMEM 中。在 37°C 下孵育小 1 时，每 30 分。钟搅拌一次
4. 过滤和离心：将消化物通过 40 μm 细胞过滤器过 🌸 滤到一个新的培养皿中。用含的 10% FBS 洗 DMEM 涤细胞过滤器。并收集滤液将细胞悬液离心 10 分钟，1200 rpm。
5. 红细胞溶解：重新悬浮细胞沉淀并加入红细胞溶 2 mL 液。在 🐝 室温下孵育 5 分钟，然后用含 10% FBS 的 DMEM 洗。涤细胞
6. 细胞计数和活力测定：使用血细胞计数器计数细胞使用。台。盼蓝 🦈 排除法测定细胞活力
7. 流式细胞术：将细胞用含 1% BSA 的 PBS 稀释，标记用于 ADSC 表面 💮 标志物的抗体。使用流式细胞。仪分析细胞标记
结果从约 1 克的脂肪组织中分离出大约 🌵 1 × 10^6 个细胞细胞。活力大于 90%。流式细胞术分析显示细胞，阳性 🐘 表达表 ADSC 面，标志物如 CD29、CD34 和 CD44。
讨论本实验成功分离并分离了小鼠脂肪干细胞。这些细胞具有 ADSC 表面标志物阳性的特征，使其成为各种研究应用的有用工具。ADSC 已被证明具有自我更新、多分，化。和免疫调节能力这使其成为再生医学和组织工程等领域的重要细胞来 🐯 源
结论本实验 🐠 验证了从小鼠脂肪组织分离和分离脂肪干 🐛 细胞 🌳 的有效方法分离的。具有 ADSC 良好的活力和表征，使。其适合进一步研究和应用
3、大鼠脂肪间充质 🕷 干细胞提取
大鼠脂 🐒 肪间 🦈 充质干细胞提取 🕸
材料肥胖 🦍 大鼠（成年，体重至 🐝 少 300 克）
无 🌺 菌手术 🦁 器械
0.9% 生 🐵 理盐 🐵 水 🍀
胶 🦟 原酶 I（1mg/ml）
脂肪 🌳 细胞裂解缓冲液
培养 💐 基 🐟 （含 🐱 10% FBS）
细胞 🌷 培养 🦉 瓶或板
程序1. 获取脂 🌷 肪 🦄 组 🌿 织
麻醉大鼠并剃除腹部 💮 区 🕷 域 🐶 毛发。
在腹中 🌻 部做一纵向 🌷 切口。
暴露并收集内脏 🦄 脂肪垫（例如网膜脂肪或肠 🐎 系膜脂肪）。
2. 组 💮 织消 🐴 化
将脂 🐠 肪组织放入无菌培 🦊 养皿 🕸 中。
加 🦢 入胶原酶 🐈 I 溶液（1 mg/ml）并轻轻搅拌 💐 。
在 🦍 37°C 孵育 12 小时，每 30 分 🍀 钟搅 🦄 拌一次。
3. 离 🦍 心和过滤 🦢
消化后，将细胞悬液转移 🐛 到 50 ml 离心管 💐 中。
以 1000 x g 离 🍁 心 10 分 🐴 钟。
收集 🐞 沉淀。
用 40μm 细胞过滤器过滤细 🐒 胞悬液，以去除未消化的碎片。
4. 脂肪细胞裂 🐼 解 🐎
加入脂肪细胞裂解缓 🐝 冲液脂肪（10 ml/g 组织）并涡旋混匀。
在室温 🐵 下孵育 30 分钟，每 🐎 分钟 10 涡旋一次。
用 🌷 50 ml 生理盐水稀释 🪴 细胞悬 🐦 液。
5. 离 🦉 心 🐕
以 1000 x g 离 🦉 心 10 分 🐠 钟。
收 🕊 集沉 🐈 淀 🐝 。
6. 培 🐟 养 🐎
将 🐒 细 🐵 胞悬液重悬于 🦉 培养基中。
将细胞播于细胞 🐈 培养瓶或板中 🕷 。
在 🌷 37°C、5% CO2 条件下培养。
注意事项使 🌴 用无菌 🦆 技术至 ☘ 关重要，以防止污染。
消化时间 🐬 和 🐘 温度应根据大鼠的脂肪组织厚度和动物物种进行 🐦 优化。
培养基应根据特定干 🌼 细 🐡 胞应用进 🐎 行调整。
提 🦟 取的干细 🐱 胞应进行表征，以确认其间充质干细 🐶 胞特性。
4、小鼠脂肪干细 🌻 胞制备原理
小鼠脂肪干 🐺 细胞 🕸 制 🐈 备原理
材料：小鼠 🐛 脂 🍁 肪 🕷 组织
无 🐛 血 🍀 清 🐝 培养基
胶原酶消 🐵 化液
培养皿细胞过滤器 🐛
离心机步骤：
1. 获取脂 🦟 肪组织
处死 🌹 小 🌿 鼠并取出 🌲 腹腔脂肪垫。
2. 消化脂肪组 🐘 织
将脂肪组织放入含胶原酶消化液的培 🐴 养皿中。
在 37°C 下孵育 1 小时，不断搅拌 🐒 。
3. 分 🦄 离干细胞 🐼
将消化后 💐 的细胞悬液过滤掉未消化的 🐟 组织残骸。
将细胞 🦅 悬液离心 5 分钟，1000 rpm。
将上清 💐 弃去，收 🌷 集细胞沉淀。
4. 培 🐛 养 🦆 干细胞
将细胞沉淀重新悬浮于无血清 🐦 培养基中。
将细胞接种到培养皿 🐛 中。
在 🐳 37°C、5% CO2 培养箱中孵育。
5. 干细 🐞 胞的 🐯 鉴定
在 12 周后观察细胞形态以及对干细 🦁 胞标记 🐟 物（如 🐵 CD29、CD34）的免疫表征。
阳性 🦊 标记表明细胞为脂 🌺 肪 🕸 干细胞。
原理：胶原酶消化液会 🕸 消 🐺 化脂肪组织中的细胞外基 🕷 质，释放出脂肪干细胞。
离心分离将脂肪干细胞从其他细胞和组织残骸中 🐯 分离出来。
无血清培养基为脂肪干细胞提供生长和增殖所需的营 🦁 养物质。
培养一 🐞 段时间后，脂肪干细胞会在培养皿中贴 🐋 壁生长。
免疫表 🐼 征可用来鉴定脂肪干细胞特有的表面标记。
