小鼠 🐬 多能干细胞 🐴 转换（小鼠脂肪干细胞怎么提取）
- 作者: 陈清羽
- 来源: 投稿
- 2025-07-10
1、小鼠 🐬 多能干 ☘ 细胞转换
小鼠多 🐠 能干细胞转换
定义：小鼠多能干细胞转换是指将一种 🍁 类型的小鼠多能干细胞转化为另一种类型的过程多能干细胞是 🐠 。具 🕸 。有分化为所有细胞类型的潜力的未分化细胞
方法：转 🐟 化的方法根据要转换的干细胞类型和所用技术而异。常见的方法包括：
病毒载体：使用逆转录病毒或慢 🌻 病毒等病毒载体将特定基因或转录因 🌸 子引入干细胞。
转染：使用脂质体 🦢 或电穿 🕸 孔等方法将质粒或 DNA 引 RNA 入干细胞。
重编程因子：使用 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc 等重编程因子诱导成 🌺 熟细胞逆转回到 🌸 多能状态。
应用：小 🌴 鼠多能干细胞转化在多个研究领域具有广泛的应用，包括：
发育生物学：研究不同干 🕷 细胞类型之间的发育途径。
疾病建模 🐟 ：创建携带突变或疾病相关基因的特定 🐵 干细胞系。
组 🐅 织工程：产生用于组织和器官替代的特定细胞类型。
再生医学：开发新的治疗疾病和损伤的方 🐬 法。
挑战：虽然小鼠多能干细胞转换是一种强大的技术，但 🌷 ，也存 🦢 在一些挑战包括：
转化效率低：将干细胞从一种类型转 🦍 化为另一种类型 💐 的效率往往很低。
基因组不 🐟 稳定性：转换过程 🐕 可能 🐕 导致 DNA 损伤和染色体异常。
免疫排斥：如果将转换的干细胞移植到另 🌷 一种动物中，则可 🦅 能会发生免疫排斥反应。
进展：小鼠多能干细胞转换领域正在不断 🌸 取得进展，科学家正在提高转化效率并解决相关的挑战。随，着。这些挑战的克服该技 🌸 术的潜力在研究和治疗领域变得越来越大
2、小鼠脂肪 🐵 干细 🐯 胞怎么提取
小鼠 🦉 脂肪干细胞 🦍 提取 🐋 步骤：
材料：68 周 🦢 龄 🕸 母鼠 🌼
碘剂70% 乙醇 🌷
灭菌器械（剪 🍀 刀 🦈 、镊、子解剖刀 🐠 ）
注 🌹 射 🦉 器（5 mL 带 21G 针头）
含胶原酶的消化缓 🐅 冲液
过滤 🐼 网 🐶 （100 μm）
离心机含血清培养基（例如 🦢 含，的 10% FBS DMEM）
步骤：1. 准备 🐵 小鼠 🐎
用 💮 碘剂 💐 和 70% 乙醇对小 🐡 鼠进行消毒。
euthanized 小 🐈 鼠。
2. 去除 🐟 脂肪垫
切开腹腔，暴露 🐧 腹 🐯 腔脂肪垫。
用解剖刀小心地去除 🦍 脂 🐞 肪垫。
3. 剪 🦁 切脂肪 🐎 垫
用剪刀将 🐈 脂肪垫剪成小块。
4. 消化 🐠 脂 🐶 肪组 🐧 织
将脂肪组 🐟 织转移到含有消化缓 🌿 冲液的培养皿中。
将培养皿置于 37°C 的摇 🦢 床上孵育 3060 分钟，或直至脂肪 🌲 组织完全消化。
5. 过滤细胞悬 🐳 液
用 100 μm 过滤 🐅 网过滤细胞悬液，去除未消化的组织。
6. 离 🐳 心细胞
将过滤后的细胞悬液以 🐛 300 x g 离心 5 分钟。
弃去 🐦 上清 🦢 液。
7. 重悬细 🕊 胞
用含血清培养基重 🐧 悬细胞。
8. 培养细 💮 胞
将细胞转移到培养 🌳 皿中 🕷 ，置于 37°C、5% CO2 下孵 🦅 育。
每 23 天更换 🐋 培养基。
9. 干细胞 🕷 分 🐶 离
细胞 🌾 贴壁后（通常需要 710 天），可以用流式细胞术或免疫荧光染色对脂肪干细胞进行表型分析和分离 🐡 。
3、小鼠间充质干 🐯 细 🐘 胞大小
2040 微 🌵 米 🐱
4、小鼠脂肪干 🐞 细 🐟 胞提取
小鼠脂肪干 🐶 细胞提取
材料：胶原酶 🐶 I
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)
小牛 🌳 血 🐧 清 🐺 （FBS）
FicollPaque
培养基 🐘 （含有 DMEM、10% FBS、1% 抗生 🌳 素）
细胞培养 🦉 板 🦉
吸 🐘 管和移液 🐶 器
离心机程序：
1. 脂 🐳 肪组织收 🌸 集 🐡
处死小鼠并切 🌼 除腹 🐧 腔脂肪 🐡 组织。
2. 消 🕷 化 🌷
将 🦁 脂肪组织 🐋 剁碎成小块 🐅 。
悬浮在含 🌼 有胶 🌿 原酶 I 的 DMEM 中。
37°C 孵育 1 小 🐛 时，定 🌵 期搅拌。
3. 密度 🦈 梯度离 🦋 心
将消化后的组织悬浮 🐬 液 🐞 过滤到试管中。
将 FicollPaque 轻轻分 💐 层到 🦢 悬浮液上 🐞 。
300 x g 离心 30 分 🕸 钟。
4. 脂肪干 🐯 细 🐝 胞分 🌾 离
收 🐞 集离心后 🦢 界面处的细胞。
用培养基 🕊 冲洗细胞 🐧 并离心。
5. 培养 🦉
将分离的细胞 🐛 悬 🌲 浮在 🐈 培养基中。
接种 🌹 到细胞培养板中。
37°C、5% CO2 孵 🐵 育。
6. 扩增和分 💐 化
细 🐈 胞会附 🐯 着 🐡 并增殖。
定 🦄 期 🌾 更换培养基以去除未附着 🐵 的细胞。
培 🦊 养到所需的细胞数量和分 🐟 化程度。
注意 🕸 事 🌾 项：
使用无菌技 🐕 术以避免污染。
小 🌴 鼠应健康且无感染。
优化胶原酶 I 的浓度和消化时间 🐋 以获得最佳收率。
密度梯度离心操作应 🦄 小心 🐛 进行，以避免破坏细胞 🌲 。
