小鼠神经干细胞的分离及培养实验（小鼠精原细胞有几条染色体 🌿 ）
- 作者: 杨知栀
- 来源: 投稿
- 2025-09-29
1、小鼠神经干细胞的分离及 🌸 培养实验 🦄
小 🐶 鼠神经干细胞的分离及 🦄 培养实验
材料小鼠 🌳 胚胎（产 🐈 后 1416 天 🐎 ）
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
神经元培 🪴 养基 🕊 （如 NeurobasalA）
脑组织 🦟 切 🌺 片器
培 🦆 养板 🦋 或培养瓶 🦍
PolyLornithine（PLO）
纤维蛋 🐳 白原
胰 🐟 蛋白酶
胎牛 🍀 血 🦍 清 🐶 （FBS）
抗生素（如青霉素/链霉 🌸 素）
聚乙烯 🦄 亚胺（PEI）
神经干细胞特异 🐱 性标记抗体（如 nestin、Sox2）
方法1. 小鼠胚胎的分离 🐘
对怀孕小鼠进行 🐺 剖腹产。
在无菌操作 🕊 下，收集 🦟 产后 1416 天的小鼠胚胎。
将胚胎放入含 DMEM 和抗生素的培养 🌸 皿中 🦁 。
2. 神经 🐛 组织的获取
使用脑组织切片器，将小鼠胚胎的大脑切成 🌿 300500 微米的切 🦍 片 🐺 。
将切片收集到含神经元培 🕊 养基的培养皿中。
3. 神经 🍀 干 🌺 细胞的分离
使用胰 🍀 蛋白酶将神经组织中的细胞 🦅 分离出来 🐒 。
过滤悬浮液 🐬 以 🦄 去除细胞 🐼 碎片。
离心培养 🌵 基以收集细胞 🕷 。
4. 神经干细胞 🦢 的 🐬 培养
将分离出的细胞重悬于 🌾 神经元培养基中，并接种到预先包被 🐞 有 PLO 和纤维蛋白原的培养容器中。
将培养物置于 37°C、5% CO2 的培养箱 🌼 中 🐈 孵育。
5. 神 🦁 经干细胞的 🐵 扩增
每 34 天 🦢 更换培养 🐡 基。
根据需 🐼 要，将神经 🌳 干细胞传代到新的培养容器中。
可 🪴 使用 PEI 转染神经干细胞，以过表达转基因。
6. 神经干细胞 🐞 的鉴定 🐶
使 🦁 用免疫细胞化学或流式细胞术来检测神经干 🕸 细胞特异性标记（如 nestin、Sox2）。
提示使用 🐅 无菌 🐯 技术进行 🌹 所有操作。
小心 🦁 处理胚胎和神经组织，避免损伤。
优化培养条件以获得最佳的神经干细胞 🐼 生长和分化。
使用适当的 🕷 对 🦄 照来验证实验 🐝 结果。
2、小鼠精原细胞 🌵 有 🐅 几条染色体
20
3、小鼠神经干细胞 🪴 提取方法
小鼠神 🌲 经干细胞提取方法
材料：小鼠脑组 🦄 织（出生后 13 天）
无菌器 🦈 皿和 🕷 工具
Hank's 平 🦋 衡盐溶液（HBSS）
Dulbecco's 改良鹰 🐬 氏培养 🐛 基（DMEM/F12）
神经生长因子 💮 （NGF）
碱性成 🦆 纤维细胞生长因子 💐 （bFGF）
除蛋 🌳 白酶 🐬 胰蛋白酶（Dispase II）
10% 胎牛血清 🐳 （FBS）
抗生素 🦆 抗 🐟 真 🦊 菌药物（AntiAnti）
步骤：1. 制备 🕸 脑组织
将小鼠杀死 🐠 ，取出大脑。
在 🐒 无菌条件下，清除 🦍 脑膜和脑血管 🦆 。
将大脑切成小块 🦋 （约 1 毫米3）。
2. 消 🐘 化 🐘 脑组 🌷 织
将脑组织块转 🕸 移到含有 Dispase II 的 HBSS 中（最终浓度为 2U/mL）。
37°C 孵育 30 分钟，间 🐺 歇性搅拌。
离 🦍 心除去上清 🌷 液。
3. 去除 🌻 红细 🌺 胞
将沉淀物重悬于含有 10% FBS 的 🦟 DMEM/F12 培养基中。
离心除去上清 🐯 液。
重复该步骤两次，以去 🌼 除红细胞 🦊 。
4. 培养神经干 🪴 细胞
将沉淀物 💮 重悬于含有 NGF（最终浓度为最终浓度 💐 为 20 ng/mL）、bFGF（和 20 ng/mL）、10% FBS 的 🐬 AntiAnti 培 DMEM/F12 养基中。
将细胞稀 🐛 释至 🐛 1x10^6 个 🐴 细胞/mL。
在涂有聚 L鸟氨酸 🐒 的培养皿或培 🍀 养瓶中接种细胞。
37°C、5% CO2 孵 🦅 育 🦊 。
培 🐈 养基更 🕸 换 🌼 ：
每 23 天 🦈 更 🐵 换一 🐧 半的培养基。
在培养基中补充新 🦍 鲜的 NGF 和 bFGF。
注释：神经干 🦁 细胞可以使用流式细胞术 🌹 或免疫细胞化学方法对其特 🌺 征进行鉴定。
神经干细胞可以诱导分化为神经元、星形 🐝 胶质细胞和少突胶质细胞。
4、小鼠精原干细胞分 🌹 化图
小鼠 🐞 精原 🦟 干 🦟 细胞分化图
精 🦈 原 🌳 干细胞 (SSC)
分布在曲细精管基底膜 🌿 的 🐕 凹陷中
A 型 🦆 精原细 🌼 胞 (SA)
SSC 分 🐠 化 🐼 而来的 🦢 第一类精原细胞
含 🐧 有未缩合的异染 🐼 色质核
体 🐶 积较大 🐧
A1 型精原 🐝 细 🌳 胞 🐛 (SA1)
SA 分 🌿 化而 🕊 来 🐈
具有加厚的核膜和中心 🦁 位核仁 🌻
A2 型精原细 🕸 胞 (SA2)
SA1 分 🕸 化而来
含有缩合 🐠 的异染 🐱 色 🌺 质核
体 🦋 积 🕸 较 ☘ SA1 小
A3 型精原 🍀 细胞 (SA3)
SA2 分化 🐳 而 🌿 来 🐟
是 A 型精 🐘 原细 🦅 胞的 💐 最后阶段
具有高度缩 🦆 合 🐛 的异染 🐧 色质核
体积 🦄 小于 🐼 SA2
B 型精原 🐕 细胞 (SB)
SA3 分化而来 🐞
具有中央核仁和周围的淡 🐡 染色质环 🦋
体积较 🦟 SA3 小
过渡精 🍀 原 🦄 细胞 🕊 (IS)
SB 分 🐦 化而 🦊 来
具有 🐴 弥散的异染色质核和突 🐘 出的核仁
位于 🌴 曲细精管基底膜下方 🌲
精 💐 母 🦊 细 🍀 胞 I
IS 分 🦈 化而来 🕊
是精子形成 🌵 过程中的二倍体细胞
具有弥散的 🦢 异染色质核和粗大的染色体 🐒
精 🐝 母 🐱 细 🐴 胞 II
精 🌾 母细胞 I 分裂 🐒 而来
是精子形成过程中的单倍 🌵 体 🕸 细胞 🌸
具有 🦈 高度缩合 🐧 的异染 🐕 色质核
单倍体精细 🦟 胞 🐧
精母细 🌲 胞 II 分裂而 🐝 来 🌴
是精子形 🦁 成过 🌷 程中的单倍体细胞
具 🐶 有高度缩合的异染色质核
逐渐迁移到曲 🦢 细精管 🐈 管腔
圆形 🐛 精子细胞
单倍 🌾 体精细 🐡 胞分化而来
具有圆 🐦 形的核 🐴 和细胞质
开始进 🐝 行细 🐕 胞质重 🐧 塑
伸长精 🌻 子细 🦢 胞
圆形精子细胞 🐳 分化而来
具 🐴 有伸长 🐺 的核和细胞 🌷 质
鞭 🐒 毛开始形 🦋 成 💮
精子细胞伸长精 🐋 子细胞分 💐 化 🐝 而来
具 🌴 有成熟的 🌹 核和鞭 🌹 毛
位于曲细精管 🐅 管腔中
精子精 🌷 子细胞 🌵 分化而来
在附睾 🐶 中成熟
由头部 🕷 、颈部、中段和 🕊 尾部组成
