小鼠人间 🐳 质干细胞提取（小鼠骨髓间充质干细胞培养实验报告）
- 作者: 朱颜沁
- 来源: 投稿
- 2025-09-01
1、小鼠人 🐼 间质干细 🐱 胞提取
小鼠人间质干细 🐴 胞（MSC）提 🌾 取
材料：健康小鼠 🐛
无菌手术 🐶 器械
无 🦍 菌培 🐵 养 🌸 基
培养板细胞 🐳 过滤 🦈 器
离心机步骤：
1. 准备 🐼 小鼠：
对 🌿 小鼠进行麻 🌷 醉。
剃 🐕 除 🦢 手术部位的毛发 🌼 。
用酒精消 🐘 毒 🐟 手术部 🌿 位。
2. 骨髓抽 🦈 取 🌲 ：
用无菌针头和注射器从小鼠股 🐳 骨或胫骨中抽取骨髓。
将骨髓转 🐞 移到无菌 🐞 培养基中 🦢 。
3. 单 💮 核细胞分 🐼 离：
将骨髓悬浮 🐎 液通过细胞过滤器 🦉 过滤，去除骨髓碎片和红细胞。
用 💮 离心 🐟 机以低速（约 400 x g，持续 10 分钟 🐎 离心）收，集单核细胞。
4. 培 🐦 养 ☘ MSC：
将单核细胞接种 🦄 到含培养基的培养板中。
将培 🕷 养板置于温暖（37°C）、潮湿（5% CO2）的培 🕷 养箱中 🐴 。
每 23 天更换培 🐵 养基 🍀 ，去除非贴壁细胞。
5. 细胞扩增 🦟 ：
贴壁的 MSC 会开始 🕸 增殖。
当细胞达到 7080% 的汇合度时，用胰酶消化细胞并 🍀 重新接种到新鲜培养基中。
6. 表型 🦊 分析 🦁 ：
可以使用 🌾 流式细胞术或免疫染色对 MSC 进行表型分析。
MSC 通常表达 🦈 CD29、CD44、CD105 和 CD90，但不 🐱 表达和 CD34 CD45。
提示：使用无菌技术 🐵 以保持细 🐺 胞无菌。
定 🦊 期监测细胞生长并更换 🦍 培养基。
避免过渡培养，因为 MSC 会随着传代而丧失分化潜 🐘 能。
2、小鼠骨 🌷 髓间充质干细胞培养实 🌸 验报告
小鼠骨髓间充 🐳 质干细胞培养实验报告
1. 实验 🦆 目 🐕 的
建立小鼠骨髓间 🐝 充质 🐛 干细胞 (BMSCs) 体外培养 🦆 系统
验证培养细胞的间充质干细胞特 🐒 性 🐋
2. 材 🍀 料 🦋 和 🍀 方法
2.1 材 🐵 料
小鼠 🐬 骨 🌷 髓 🐧
αMEM培 🕊 养 🐳 基
胎 💮 牛血清 🐟 (FBS)
抗生素 (青霉素/链 🐋 霉素)
胰 🦍 蛋 🦄 白酶
BDNF、TGFβ1、EGF 生 🐡 长因 🐱 子
Flow cytometry 抗 🐈 体 🐘
2.2 方 🦢 法 🌿
2.2.1 小鼠骨髓提 🌿 取
从雌 🕊 性 C57BL/6 小鼠中收集股骨和胫骨 🌸 。
用 PBS 清洗骨骼，然后从骨 🐠 髓腔中冲出骨髓。
2.2.2 BMSC 分 🕷 离 🐯 和 🦈 培养
将骨髓悬液匀浆 🐶 并 💐 通过 70 μm 细胞筛过滤 🌳 。
将细胞悬液 🐞 铺板到涂有 0.1% 明胶 🐧 的培养皿中。
用含有 10% FBS 和 1% 抗生素的 αMEM 培 🌵 养基培 🦍 养细胞，并在 🐅 和 37°C 环 5% CO2 境下培养。
2.2.3 分离 🐳 和培养 BMSC
培养 710 天后，当贴壁细胞达到 8090% 汇，合度时用胰蛋白酶 🦅 消化贴壁细胞。
将消化的细胞悬液 🌿 转移到新的培养皿中，并用新鲜培养基补充 🦆 至所需体积。
重复分 🐅 株 34 次，以获得纯化的 BMSC 群体。
2.2.4 间充质干细胞 🦋 特性 🕸 的验证
流式细胞术分析 🕸 ：使用 CD29、CD44、CD73 和 CD90 抗体对细胞进行标记，并通过流式细胞术 🦋 分析其表达水平。
多向分化：将 BMSC 诱导向成骨成、软骨和成脂肪细胞，并通 🦢 过染色验证其分化能力。
3. 结 💐 果
3.1 BMSCs 的分 🦅 离和 🦍 培养
骨髓悬 🐠 液中贴壁细胞 💐 在 710 天内达到 8090% 汇合度 🐺 。
分离和培养的 BMSC 呈梭形或星形，并形成典型 🐛 的集落。
3.2 间充质干细胞特性的验 🐛 证
流 🦄 式细胞术分析：BMSC 高度表达 CD29、CD44、CD73 和 CD90，这些是间充质干细胞的标 🦟 志物。
多向分化：BMSC 能够分化为成骨成、软骨和成脂肪细胞，证实了它们的间充 🪴 质干细胞特性。
4. 讨 🐋 论 🐧
本实验成功建立了小鼠骨髓间充质干细胞体外培养系统培养。的 BMSC 表现出典型的间 🌾 充质干细胞特性，包括自更新、贴 🐝 。壁能力以及多向分化潜能
建立的 BMSC 培养系统可用于各种研究应用，例如组织再生 🦋 、免疫调节和疾病建模。它 BMSC 还，为、探。索的 🐺 治疗潜力提 🌳 供了平台例如在骨科神经退行性疾病和癌症等领域的应用
3、小鼠 🌷 骨髓间充质干细胞培养 🌴 基
小鼠骨髓间 🐼 充质干细胞培养 🐅 基成 🦅 分：
基础培养 🌵 基：
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 或 🌹 α最小必需培养基 (αMEM)
10% 小 🐦 牛 🦁 血清 🐎 (FBS)
生长因 🦍 子 🐅 ：
成 🐎 纤维细胞生长因子2 (FGF2)
胰岛素样生长因 🌷 子 🌾 1 (IGF1)
血小板 🕷 衍生生长因子BB (PDGFBB)
抗 🦊 生 🦁 素 🦁 ：
青霉 🦍 素 🌲 (100 IU/mL)
链 🍁 霉素 (100 μg/mL)
其 🐼 他添加 🐴 剂 🌵 ：
戊二 🌼 醛 🌾 (1 mM)
β甘 🐳 油磷酸钠 (10 mM)
抗坏血酸磷 🐒 酸 🐛 酯钠 (50 μg/mL)
L谷 🐋 氨酰 💐 胺 (2 mM)
非 🐳 必需氨基酸
制备 🌺 方 🌴 法 🐞 ：
1. 将 FBS 解冻并灭菌滤过 🌸 。
2. 将 DMEM 或 αMEM、FBS、生长因子和抗生素按比例混 🐦 合。
3. 根据需要添 🦈 加其他 🐛 添加剂。
培养注意事 🌻 项：
将细胞培 🐼 养在 5% CO2、37°C 的 🐟 培养箱中。
每 23 天更 💮 换一次培养基。
当细胞达到 8090% 汇合时，使 🐯 用胰蛋白酶进行传代。
每隔 1015 次 🦆 传代，从新鲜小 🦆 鼠骨髓中分离新细胞。
4、大鼠骨髓 🐞 间充质干 🐠 细胞提取
大鼠 🦍 骨髓间充质干 🌻 细胞提取 🐱 步骤
材料：成年 🐶 大鼠
无菌 🕊 器材 🐎
Dulbecco's改良 🐅 伊格尔 🐠 培 🌿 养基 (DMEM)
胎牛 🦈 血 🐱 清 (FBS)
抗 🐠 生 🐼 素抗/真菌剂 🍁
淋巴 🌷 细胞分离液
细胞 🦈 培养板 🌺
步骤：1. 动物准 🌻 备 🦋 ：
将大鼠 🐟 麻醉 🌹 。
消毒手 🐶 术部位。
2. 骨髓提取 🐺 ：
使 💐 用无菌注射器和针头从两侧股骨和胫骨中抽取骨髓。
将骨髓放入含抗生 🐱 素抗/真菌剂 🌴 的 🦈 培养基中。
3. 红细胞裂 🐳 解 🐼 ：
将骨髓悬液转 🌸 移到淋巴细胞分离液中分层。
离 🌼 心分离。
小心 🐕 收集单 🐈 核细 🌹 胞层。
4. 细胞培 🦅 养：
将单核细胞层稀释 🌾 到 DMEM 培养基中，并补充 10% FBS 和抗生素抗/真菌剂。
将细胞接 🌷 种到细 🐧 胞培养板 💐 中。
5. 贴壁培养 💮 ：
将细胞培养 🐞 板置于 37°C、5% CO2 的孵箱中培 🐵 养。
培养 12 周，直至细胞贴壁生长 🐳 。
6. 干细 🐠 胞 🐬 鉴定 🌵 ：
使用荧光抗体或分选仪 🐱 对 🦄 细胞进行 CD90、CD73 和 CD105 等间充 🐯 质干细胞标志物的鉴定。
注意事 🐝 项：
所有步骤均应在无菌 🐶 条件下进行。
使用合适 🐳 的动物麻 🐶 醉剂和消 🐴 毒剂。
小心操作，避 🌷 免细胞损伤。
定期监测 🕸 细胞生长，并在贴壁后更换新鲜培养基。
