小鼠骨髓间质干细胞（小鼠骨髓间充质干细胞培养 🦈 实验报告）
- 作者: 杨晚棠
- 来源: 投稿
- 2025-04-15
1、小 🐟 鼠 🦁 骨髓间质干细胞
小鼠骨髓间质干细 🌲 胞 (BMSC)
定义：小鼠骨 🌴 髓间质干细胞 (BMSC) 是一种多能间充质干细胞，存在于小鼠骨髓中。它，们具有自我更 🐴 新和分化为各种间叶系细胞的能力例如成骨细胞、软骨细胞。和脂肪细胞
来源：小鼠 BMSC 从骨髓基质中分离得到 🦆 ，通常使用密度梯度离心或粘 🌾 附塑性培养方 🐠 法。
特性：多能 🐒 性：具有分化为多 🌺 种间叶系细胞谱系的 🦍 潜力，包括成骨细胞、软骨细胞、脂、肪细胞肌腱细胞和韧带细胞。
自我更新 🐬 ：能够 🌷 自我增殖和维持干细胞池 🐳 。
免疫调节：具有免疫调节特性，可 🦍 抑制免疫反应。
分泌 🦢 因子分泌：多种生长因子和细胞因子，调节组织修复 🪴 和再生。
应用：小 🌹 鼠 BMSC 已被 🐧 广泛应用于：
骨 🪴 再生 💐 ：促进骨折 🦟 愈合和骨缺损修复。
软骨修 🦄 复：治疗骨关节炎和其他软骨损伤。
神经再 💐 生：改善脊髓损伤 🐈 和其他神经系统疾病的恢复。
心血管疾病：修复心肌损 🌺 伤并促进心脏功能的恢复。
研究工具：用于研究间充 🦊 质干细胞生物学、疾病机制和 🐈 再生治疗策略。
优势：易 🕊 于获取：可通过骨髓抽 🍀 吸 🌻 方便获取。
高增殖能力：具有高的自我更新和 ☘ 增殖能力。
免疫兼容性：通常是自体移植，避免免疫排 🐟 斥反应。
多能性：分化为多 🌲 种细胞类型，扩大其治疗 🦄 应用范 🕷 围。
局限性：衰老：随着年 🦋 龄的增长的 🌻 增，BMSC 殖能力和分化潜能 🐠 下降。
肿瘤形成：长期体外 🐘 培养可 🐟 能 🐈 导致细胞转化和肿瘤形成风险。
异 🌸 质性：BMSC 群体在特性和分化潜力上存在异质性。
2、小鼠骨髓间充 🐯 质干细胞培养实 🦄 验报告
小鼠骨髓间充质干细胞培养实验 🌸 报 🕸 告 🐞
一、实 🌴 验 🐞 目 🕸 的
建 🐠 立并优化小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）培养体系。
二、实验 🦟 材 🐝 料
小 🐦 鼠：68 周 🐧 龄野生型小鼠 C57BL/6
Dulbecco's Modified Eagle's MediumLow Glucose（DMEMLG）
胎 🦈 牛 🐈 血清（FBS）
青霉 🦆 素链 🦉 霉素 🐼 溶液
胰蛋白 🐟 酶 🐒 消化液
PBS 缓 🕸 冲 💐 液 🐴
培养皿 🐅 培 🌳 养、板 🦆
细胞计数 🌷 板
三 🌷 、实验步骤 🌺
1. 骨 🌵 髓 🌷 提 🦍 取
小鼠处死后，取出 🌳 后 🍁 肢股 🐛 骨。
切除股骨两端，用 26G 针 🌳 头反复冲入 DMEMLG，收集冲洗液。
2. 单 🌴 核细 🌲 胞分 🌻 离
将 🕸 冲洗 🐅 液离心（1,500 rpm，5 分钟），收集细胞 🌾 沉淀。
重悬细胞，在 FicollPaque 溶液上分层 🌷 离心分（1,800 rpm，30 钟 🌹 ）。
收集中 🍁 间层单核细胞 🦟 。
3. BMSCs 分 🐠 离培 🌾 养
将单核细胞重悬于含 ☘ 10% FBS 的 DMEMLG 中，接种于培养 🐵 皿中。
培 🦅 养 35 天，更换培 🐡 养基并去 🌸 除非贴壁细胞。
连续传代培养，直 🐝 至 BMSCs 达到 80% 以上 🍁 的融合率。
四、结果1. 细 🌸 胞 🌻 形态 🦋
BMSCs 在培养初期呈梭形，随着传 💮 代培养逐渐变为 🌳 多角形。
细胞贴壁 🐧 生 💐 长良 🐞 好，融合率高。
2. 增殖能 🐟 力 🐎
BMSCs 在传代培养过程中表 🐡 现出较强的增殖能力。
细胞倍增时间约为 🌳 24 小 🪴 时。
3. 分化 🐬 潜 🐱 能 🐵
BMSCs 通过诱导分化可向脂肪细胞、软骨细胞和成骨细 🍁 胞分化。
分化后细胞形态及标记物表达与相 🍀 应细胞类型 💮 一致。
五、讨论本实验成功建立了小鼠 BMSCs 培养体系。BMSCs 具有良好的增殖能力和分化潜能，可用于组织工程、再。生，医、学和，细 BMSCs 胞。治疗等研究优化培养条件如培养基成分生长因子添加和培养时间可以进一步提高 🌲 的培养效率 🐒 和分 🌸 化能力
3、小鼠骨髓间质干 🐴 细胞培养注意事项
小鼠骨髓间 🐠 质干细胞培养注 💮 意事项 🦉
培养基：使用含 10% 胎 🦄 牛血清 🦟 (FBS) 的 αMEM 或 DMEM 高糖培 🌲 养基。
可添加白细 🐬 胞介 🌵 素6 (IL6)、补骨素 (BMP2) 和 transforming growth factorβ (TGFβ) 等生长因子。
培养物：将小鼠骨髓提取并离 🐞 心。
通过密度 🌹 梯度 🐅 分 🐕 离法纯化间质干细胞。
将细胞 🦅 播种在塑料贴壁培养皿 🐘 或培养瓶中。
每 23 天更换 🦁 一次培养基。
培养环 💮 境：
在 🦁 37°C、5% CO2 的潮湿 🦁 环境下培 🐟 养。
定期监测培 🍀 养 🐡 物，并根据需要更换培 🐈 养基。
细胞株 🐠 维持 🌷 ：
当细胞达到 8090% 汇合度时 🦄 ，通过胰蛋白酶消化传代。
每 🌸 隔 35 代应冷冻保存细 🐅 胞 🦁 株。
培养 🕊 特点：
间质干细胞通常呈梭形或星形细胞 🦄 形态。
它 🐟 们具有自我更新和向多种细胞谱系 ☘ 分化的能力。
培养物 🌷 可 🌷 能会出现形 🐝 态变化或生长速率变化。
污 🐼 染 🐴 监 🐛 测：
定 🦍 期监测培养物是否存在支原体和真菌污染。
采取预防措施以 💮 避免污染，例如使用无菌技术和抗生素。
其他注 🦍 意事 🦅 项 🍁 ：
使用新鲜的细胞，避免细胞冻融循环 🌸 。
避 🐼 免过度 ☘ 传代，因为这可能会影响细胞的特性。
培养物应在生 🐅 物安全柜中操 🌹 作。
根据具体实验 ☘ 目的优化培养 🌴 条件。
4、大 🌻 鼠骨髓间充质 🍀 干细胞形态
大鼠骨髓间充质干细胞 🕷 （BMSCs）形态
BMSCs是一种成年干细胞，具有自我更新和多能分 🐺 化 🪴 的能力。它们最初是从大鼠骨髓中 🌺 分离出来的的。BMSCs形态特征包括：
纺 🐅 锤 🐞 形：BMSCs具有细长的纺 🐧 锤形，两端尖锐。
核：细胞核呈 🌷 现椭圆形或纺锤形，染色质分布均匀。
胞质胞质：透明，含有大量的内质网、高尔基体和线粒 🍀 体。
细胞大小 🐺 ：BMSCs相对较小，长度在 100200 微，米之间宽 🌵 度在微米 ☘ 之间 3050 。
贴壁 🍀 生长：BMSCs在培养物中呈贴壁生 🐒 长，形成规则的漩 🍁 涡状或梭形图案。
其他特 🕸 征 🌻 ：
除了形态特征外，BMSCs还具有以下 🌴 特征：
表面标记表：BMSCs达一系列 🌴 表面标记，包括 CD29、CD44、CD73、CD90 和 CD105。
分化潜力：BMSCs具有多能分化的能力 💮 ，可 🍁 以分化为成骨细胞成、软骨细胞和成脂肪细胞。
自我更新：BMSCs可以自我更新，从而产生具有 💐 相同 🌿 分化能力的新细胞。
