💮 小鼠干细胞培养流程（小鼠干 🐯 细胞培养流程视频）

1、小鼠干细胞培 💮 养流程 🌲

小鼠干细胞培 🐟 养流程

材 🌳 料准 🐠 备：

小鼠胚胎或胚胎 🌴 干细胞系

培养基 🕊 （如 DMEM/F12、N2B27 补充 🐯 剂、2巯基乙醇）

血清（如小 🐎 牛血清、胎牛血清 🐈 ）

转染 🌲 试 🌿 剂（如 Lipofectamine 2000）

组 🐛 织培养 🐈 板或培养瓶

CO2 培 🦋 养箱 🦋 (37°C，5% CO2)

1. 胚胎 🐴 干细胞提取

从受精后 2.53.5 天的小鼠胚胎 💮 中摘取内细胞团。

将 🐅 内细胞团接种到组织培养 🍁 板中，用培养基培养 💮 。

2. 胚胎干细胞 🌹 株建立

胚胎 🐘 干细胞将形 🐕 成紧密贴 🐒 壁的菌落。

定期传 🦈 代菌 🌴 落，去除分化的细胞 🦟 。

筛选出稳 🐛 定、未分化的胚胎干细胞株。

3. 细胞 🐵 培养

将胚胎干细胞 🦉 株接种 🌴 到组织培养板或培养瓶中 🦢 。

使用含 🐯 血清的培养基培 🌹 养细胞。

定 🦍 期传代细胞，保持细 🍁 胞处于对数生长期。

保持 🌷 细胞密度在 5080% 合流 🐡 度之间 🐺 。

4. 分 🦁 化 🐕

根据需要，使用特定的分化方案将胚胎 🐕 干细胞分化为特定细胞类 🌸 型。

分化方案可 🍁 能包括特 🌷 定生长因子、小分子或转 🐶 导。

5. 鉴 🐬 定 🌷

对分化的细胞进 🦅 行免疫表型分析或功能分析，以确认分化成功。

使用特定的标记物 💐 或功能性检测，如荧光激 💮 活细胞分选或 🦁 RTPCR。

6. 保 🦅 存

将细胞 🐧 接种到高浓度的 🌵 血清培养基中，并分装 🦄 到冷冻管中。

以液氮 🌹 温度 🌲 冷冻 🌵 保存细胞。

注 🐎 意 🦉 事项 🍀 ：

胚胎干细胞培养 🌼 应在无 🐎 菌条件下进 🐧 行。

定期监测细胞污染，如，有污染立 🐯 即丢弃细胞。

分化过程 🌺 必须仔细优化，以确保获得所需的细胞类型 🦆 。

在操作胚胎干细胞时，请 🐠 遵守所有生物 🐈 安全规 🕸 定。

2、小鼠干细胞培 🐘 养流程视频

小鼠 🐋 干细胞培 🍀 养流 🪴 程

小鼠胚 🐯 胎或成年小 🦋 鼠组织

无 🌼 血清培 🌺 养基 🐺

组织培养板 🐦 或培养瓶

组织 🐬 培 🌼 养箱 🦢

细胞 🌲 刮 🐵 刀

1. 组织获取 🦆

从小 🐒 鼠胚胎或成年小鼠组织中提取组织样本。

具体组织类型根 🌵 据 🐯 研究目的而定。

2. 组织解 🌴 离

使用无血清培养 🐺 基冲洗组 🌴 织并将其切碎成 🐕 小块。

用胰蛋白酶或胶 🍀 原酶处理组织，将其解 🐘 离成单 🐼 细胞。

3. 细 💐 胞 💮 培养 🦉

将单细胞悬液 🌴 转移到组织培养板 🐈 或培养瓶中。

加入无血清培养基培养基，中含 🌸 有适 🦢 当的生长因子和抗生素。

将细胞培养在 🦆 37°C、5% CO? 的组织培养箱中。

4. 细胞 🦊 传 🐕 代

当细胞长 🐘 至 🌵 8090% 汇合时，需要进 🐺 行传代。

用无血清 🌼 培养基 🌿 冲洗细胞并用细胞刮刀刮下细胞。

将 🌾 细胞转移到新的组织培养板或培 🕷 养瓶中 🌳 。

5. 分 🌿 化 🐈

根据 🐴 需要，可以对干细胞进行分 🐟 化。

不同的 🐼 分化培养基和生长因子用于 🌸 诱导干细胞 🐼 分化为特定的细胞类型。

6. 冷冻 🐎 保存 🦍

可选：为了长 🦉 期保存 🐵 ，细胞可以在传 🐘 代时冷冻。

将细胞悬液与冷冻保存液 🦟 混合，然后将 🌸 其放置在 80°C 的冰箱中。

视 🦋 频 🐈 教程 🌼 ：

[小鼠胚胎干 🦟 细胞培养视频教程 🌷 ]()

[成年小鼠成纤维 🐒 细 🐼 胞培养视频教程]()

3、小鼠干细胞培养流程图片 🦟

小鼠干细 🐕 胞 🦢 培养流 💮 程图片

步骤 🐟 1：收集小鼠胚胎

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步骤 2：从胚胎中分离出内细胞 🦉 团

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步骤 3：在胚胎干细胞培养 🐅 基中 🌻 培养内细胞 🐴 团

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步骤 4：观察干细 🦢 胞聚集并 🦅 形成 🐈 聚集体

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步骤 🕊 5：将聚集体传代到新培养皿

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步骤 6：继 🐝 续培养和 💮 传 🦆 代干细胞

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步骤 7：冻存 🌲 干细胞以备将来使用

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4、小鼠干细胞培养 ☘ 流 ☘ 程图

小鼠干 💮 细胞培 🐋 养流程图

1. 分离胚 🍁 胎干细 🐼 胞 (ESCs)

从受孕的 💐 雌 🌺 性小鼠中取出囊 🌴 胚

将囊 🐒 胚置于培养皿 🐴 中，去除外围滋养 🐕 层细胞

收集内细 🕊 胞团 (ICM)，即 ESCs 的来源

2. 建立初 🌿 代培 🐋 养物

将 ESCs接种到涂 🌼 有胚胎干细胞 🍀 培养基 🦟 质的培养皿中

添加富含营养 🐋 因子的培养基 🐠 ，如 DMEM/F12 补充 15% 胎牛血清 (FBS) 和 🍀 LIF

在 37°C、5% CO2 的培 🌷 养箱中孵育

3. 传代 🦉 培 🌿 养 🌼

定期（每隔 23 天）用 0.25% 胰蛋白酶分离培养物中的 🐒 细胞

将细胞重新接种到 🐡 新的培养皿 🌵 中，并加入新鲜的 💐 培养基

4. 分 🐅 化 🦄

ESCs 可 🦅 以通过各种方法进 🐧 行分化，包 🍁 括：

悬浮培养（EB 形成 🕊 ）：在缺少 LIF 的培养基中培养 ESCs

定向分化：使用特定生长因子和培养条件诱导分化 ESCs 为特定的细胞类型（如 🪴 心肌细胞、神经元）

5. 质 🌿 量控制 🐧

定期监 🍀 测培养物 🐋 以确保 ESCs 的多能性 🌾 和无菌性

进行基因表达分析、免疫细胞 🐵 化学 🐠 染色和分化检测

使用无支原生 🦉 物或屏障 🍀 方法来防止污染

6. 冷 🦟 冻保 🐡 存 🌿

ESCs 可以使用二甲基亚砜 (DMSO) 和培养 🌴 基冷冻保存

低温保存可用于长 🐯 期 🌵 储 ☘ 存和备份细胞系

7. 应 🐒 用 🕷

基 🕷 本研究研究：发 🦊 育生物学、干细胞生物学和 🐘 疾病机制

再生医学：用于组织工程、细胞 🐡 治疗和个性化医 🦅 疗

药物筛选：用于测试新药和 🐺 治疗方法的功效和毒性