流式鉴 🦅 定小鼠脂肪干细 🌴 胞（流式鉴定小鼠脂肪干细胞的方法）
- 作者: 陈茁沅
- 来源: 投稿
- 2025-06-04
1、流式鉴定小鼠脂 🐳 肪干细胞
流 🐘 式鉴定 💐 小鼠脂肪干细 🌷 胞
材料：抗小鼠流式细胞 🐟 术 🐞 抗 🌻 体：CD34、CD45、Sca1、CD31、CD105、PDGFRα
含血清的流式细胞术缓冲 🐋 液（如含 🌷 PBS 2% FBS）
细胞表面标 🦋 记 🐋 试剂盒
流 🐵 式细 🌵 胞仪
步骤：1. 解剖 💮 和脂肪组织 🦋 消化：
解剖 🐺 小鼠并收集脂肪组织（如 🦍 腹部或上皮脂肪）。
将 🐳 脂肪组织切碎并用 🌾 含胶原酶 🦆 的消化液消化。
将 🌼 样 🌾 品 🦉 过滤并离心去除消化液。
2. 红细胞裂解 🌸 ：
用红细胞裂解液 💐 裂解 🐱 红细胞。
离心并用流式细胞术缓冲液洗涤细 🐞 胞。
3. 细胞表 🐶 面标 🌺 记 🐝 ：
使用细胞表面标记试剂 🍁 盒，根据制造商的说明标记细胞表面抗原。
孵育后 🌵 ，用流式细胞术缓冲液洗涤细胞。
4. 流式 🌸 细 🦄 胞术 🦍 ：
将标记的细胞悬浮在流式细 ☘ 胞术缓冲液中。
使用流式细 🐼 胞仪获取细 🐛 胞的流式细胞术 🐅 数据。
分析数据以识别表达 🌷 CD34、CD45、Sca1、CD31、CD105 和 PDGFRα 的细胞 🦊 群。
特征标 🍁 记：
典型的脂肪 🌼 干细 🦈 胞（ASC）表现出以下特征 🌲 标记：
阳 🕊 性 🌺 ： CD34、Sca1、CD105、PDGFRα
阴 🌳 性 🐝 ： CD45、CD31
注 🐧 意事 🦟 项：
使 💮 用 🐘 高品 🦆 质的抗体并进行适当的对照。
优化细胞标记 🐠 过程以最大限度 🐴 地 🐎 减少非特异性结合。
使用适 🦍 当的门控策 🐛 略以排除非目 💮 标细胞。
2、流式鉴定 🦁 小鼠脂肪干细胞 🦉 的方法
流式鉴 🌿 定小鼠脂肪干细胞 (ASCs) 的 🐡 方法
材料:脂肪 🌷 组织样 🕊 本
酶消化缓冲 🌵 液 🌵 （胶原酶 IV）
细 🦈 胞 🌿 过滤器 🌸 （40 μm）
缓冲 🪴 液 🦊 （如 🌷 PBS）
一抗（针对 🐬 ASC 特异性标记物，如 CD29、CD34 和 Sca1）
二 🌸 抗（荧光标记 🦁 的 🐛 ）
流式 🍀 细胞 🐅 仪
步骤:1. 分 🐯 离 ASCs:
将脂肪组织切成小块 🐵 。
将切碎的组织转移 🐬 到酶消化缓冲液中，并 🌾 孵育 3060 分 🌵 钟。
将消化液通过 40 μm 细胞过滤 🐶 器 🦢 过滤 🦋 。
用缓 🌷 冲液洗涤离心后的细胞。
2. 标 🐬 记 🦈 ASCs:
将细胞重悬于缓冲液中，并按制 🐞 造 🌿 商说明书添加一抗。
孵育 🌺 3060 分 🍁 钟 🦢 。
洗涤细 🌾 胞并用缓 🦆 冲液 🦢 重悬。
添加二 🐡 抗并孵 🌷 育 3060 分钟 ☘ 。
洗涤 🦁 并 🦆 重 🦢 悬。
3. 流式细 🐒 胞 🦁 术分析:
使用流式 🐟 细 🌺 胞 🐝 仪分析细胞悬液。
设置与未标 🐶 记细胞对照相同的门。
确定表达特定 ASC 标记物 🦉 的细胞群。
常见 ASC 特异性标记 🌼 物:
CD29 (整 🐼 合素β1): ASC 的主 🌼 要表面标记 🌼 物。
CD34: 造血干细胞和内皮 🌳 细胞的标记物。
Sca1 (干细胞 🐺 抗原1): 早期发育干细胞 🦋 的标记物。
CD44: 参 🍀 与细胞细 🐛 胞相互作用和趋化性的标记物。
PDGFRα (血 🦊 小板衍生生长因子受体 α): 参与 ASC 分化和增殖的标 🐛 记物。
注 🐋 意事 💐 项:
标记物表达因 🌷 ASC 亚群和脂肪组 🍀 织来 💮 源而异。
同时使用多 🐯 个 🐴 标记物可 🦍 以提高特异性。
门设置至关重要，以确 🐝 保准 🐅 确的细胞群识别。
3、流式细胞术检测小鼠脾细胞 🐟 分群
流式细胞术检测小 🐧 鼠 🐳 脾细 🐎 胞分群
目的：鉴定小鼠 🕊 脾细 🐋 胞中不同亚群的分 🐝 布。
材料：小 🦆 鼠脾 🦅 脏 🌹
流式细胞 🍀 仪
标 🐝 记抗 🐅 体 🐼 ：CD3、CD4、CD8、CD19、B220
PBSFACS缓 🌲 冲 🐴 液
细胞分离 🐅 介质（如淋巴细胞分离液）
方法：1. 脾 🦋 脏 🐝 处 🐠 理：
从 🌺 麻醉的小鼠中移除 🐝 脾脏。
将脾 🐋 脏研磨成单细胞悬液。
用细 🐛 胞分离介质分离淋巴细胞。
2. 细胞计 ☘ 数和 🐼 活力评估 🐳 ：
使 🐒 用血 🐳 细胞计 🐎 数仪计数细胞。
使用台盼蓝 🐛 染色评估细 🐵 胞活力。
3. 标 🌵 记细胞：
将 🐼 细胞分成不 🦊 同管 🦋 中。
加入 🪴 荧光标记抗 🐵 体并孵 🐎 育。
洗 🐳 涤细 🐼 胞 🕊 两次。
4. 流式细胞 🦢 术分析 🐕 ：
将标记的 🌷 细 🌿 胞 🦈 悬浮在FACS缓冲液中。
在流式细 🦈 胞仪上进行数据采集 🦄 。
使 🐴 用 🌵 流式细胞术软件分 🦆 析数据，将细胞分群为不同的亚群。
5. 细 💮 胞分 💐 群 💐 ：
T细 ☘ 胞 🐦 ：CD3+
辅 ☘ 助 🌷 性T细 🐬 胞（Th）：CD3+CD4+
细胞毒性 🦉 细胞T（Tc）：CD3+CD8+
B细 🐠 胞 🌳 ：CD19+B220+
预 🌴 期结 🐛 果 🦆 ：
流式细胞术分析将产生显示不同细胞亚群分布的图表。这。些亚群的百分比和绝对数量可以用来表征小鼠脾细胞的免疫细 🌷 胞组成
注意 🦟 事项 🦄 ：
使用高品质的抗体和 🦢 试 🕊 剂。
小心处理细胞，避 🌴 免损伤或激活。
在适当的时 🦟 间范围内进行流式细胞术分析 🐳 。
对数 🐟 据进行适当的统计分析，以确定结果的显著性。
4、流式鉴定小 🌴 鼠脂肪 🦢 干细胞的原理
流式细胞术鉴定小 ☘ 鼠脂肪干 🕊 细胞的原理
背景脂肪干细胞（ADSCs）是从脂肪组织中提取的多能干细胞，具有自我更新和分化为各种细胞类型的 🐘 潜力。流，式细胞术是一种强大的工具可用于鉴定和富 ☘ 集ADSCs，基。于对特定细胞表面标记的检测
原理流 🐯 式细胞术鉴定ADSCs的原理涉 🐅 及以下步骤：
1. 制备单 🌹 细胞悬液：脂肪组织消化 🐟 成 🐳 单细胞悬液。
2. 标记细胞：使用特定于ADSCs的抗 🌵 体标记细胞表面标记。这：些 🌷 标记通常包括 🦟
CD34： hematopoietic 干细 🍀 胞标记
CD44：基质中黏蛋白质 🐺 的受体 🐛
CD105：内 🌾 皮 🌷 生长因子受体 🌹 2 标记
Sca1：干细 🌺 胞抗原 1，在造血干细胞和中胚层 🦊 干细胞中表 🌿 达
3. 流式细胞术分选：单 💮 细胞悬液通过流式细胞仪，该仪器根据 🦁 标 🌿 记的抗体检测细胞表面标记。
4. 细胞分群：标 🌷 记有特定标记组合的细胞被分 💐 群 🐕 为ADSCs。
常用标记 🌼 组合
鉴定小鼠ADSCs时，最常用的标记 🦟 组合包括：
CD34CD44+CD105+Sca1+
CD34CD44+CD105+Sca1
优点流式细胞术鉴定 🐞 ADSCs的优点包括：
特异性：使用特定抗体确保鉴 🌺 定出真 🐅 ADSCs。
定 🌷 量：提 🐎 供ADSCs群体的数量信息。
富集：分离并 🐱 富集ADSCs，以进行 🦆 进 🌵 一步研究和应用。
局限性流式细胞术 🕷 鉴定的局限性 🌷 包括：
成本：流 💮 式细胞仪和抗体的成本可能很高。
技术要求：需要受过培训的技术人员操作流式细 🐯 胞仪。
假阳性和假阴性：抗体交叉反应或 🐬 脱落 🐺 可能导致假阳性和假阴性结果。
结论流式细胞术提供了鉴 🐟 定小鼠ADSCs的强大方法。通过使用特定细胞表面标记的抗体，可，以定。量 🐶 识别和富集这些干细胞从而用于再生医学研究和治疗应用
