ne4c小鼠神经干 🐼 细胞（小鼠神经干细胞的 🌿 分离及培养实验）
- 作者: 胡丞恩
- 来源: 投稿
- 2025-06-05
1、ne4c小鼠 🌳 神经干细胞
ne4c小 🐶 鼠神经干细 🍁 胞
ne4c小鼠神经干细胞是一 🐯 类高度致瘤性的小鼠 🦟 神经干细胞 🐱 系，由EML4ALK融合蛋白的表达诱导。
特征：致瘤性高：ne4c小鼠神经干细胞在体内和体外都表现出高 🐈 度的致瘤性，形成侵 🐈 袭性神经母细 🐵 胞瘤。
自我更新能力强：这 🐬 些细胞 🦋 具有很强的自我更新能力，可，以在神经干细胞培养基中无限增殖并保持多向分化潜 🌷 能。
多能性：ne4c小鼠神经干细胞可以分化为各种神经元和胶 🌿 质细胞类型，包括神经元、星形 🪴 胶质细胞和少突胶质细胞。
EML4ALK融合蛋白表达 🐳 ：这EML4ALK些细胞的特征性标志是表达融合蛋白这是，一EML4种ALK由和基因融合形成的致癌蛋白。
应用：ne4c小鼠神经干 🌷 细胞 🌻 已广泛用于啮齿动物模型中 🍁 研究：
神经母 🌷 细胞瘤：研究神经母 🦅 细胞瘤的生物学、致癌机制和治疗方法。
脑肿瘤：研究其他类型的脑肿瘤，如胶质瘤和 🌴 髓母细 ☘ 胞瘤。
再生医学：探索神经干细胞在修复神经系 🌻 统损伤中的潜力。
限制：使用ne4c小鼠神 🐞 经干细胞的 🕷 主要限制是它们的致瘤性。在研究中，必。须采取适当的措施来防止这些细胞形成肿瘤
结论：ne4c小鼠神经干细胞是一种有价值的 🦋 研究工具，用于研究神经肿瘤、再生医学和其他神经系统相关疾病。它，们的。致瘤特性需要谨慎使用但它们的自我更新和多能性使其成为研究各种神经生物学问题的有力模型
2、小鼠神经干细胞的 🐡 分离及 🐯 培养实验
小鼠神经干细 🌹 胞的分 🍀 离及培养实验
材料小 🐟 鼠胚胎 🦁
无血清 🐼 培 🐺 养基 🦆
神经生长因子 🌵 (NGF)
表 🐺 皮 🐞 生长 🐼 因子 (EGF)
胰 🌼 蛋白酶
除 🐎 蛋 🦢 白酶
多 🦉 壁 🕊 培养 🦉 瓶
培养皿方法
1. 小鼠胚 🦍 胎 🦍 分离
处 🌸 死妊 🍀 娠 14.5 天的小鼠。
取出胚胎并将其头 🪴 部放入盛有冷无血清培养基的培养皿中。
使用 🦊 显 🐘 微镜，移除 🌼 头部表面的脑膜。
用胰蛋白酶处理胚胎头部 30 分钟，然后用 🐧 除蛋白酶终止 🌸 消化 🌴 。
2. 神经干细 🕷 胞的分离
将消化后的组织过滤到培养 🦍 瓶中 🦍 ，然后离心 5 分钟，1000 g。
用无血 🌸 清培养基 🐎 洗涤沉淀物。
将沉淀物 🦄 悬浮在含有 🌺 NGF 和 EGF 的培养基 🐯 中，加入培养皿中。
3. 培 🌴 养 🌼
将培养皿置于 🌿 培养 🐧 37°C、5% CO2 箱中 🦢 。
每 23 天更换培 🍀 养 🦟 基。
4. 神经干细胞球 🍁 的形 🐋 成
神 🐞 经干细胞将在培养基中 🦍 形成悬 🦍 浮神经干细胞球。
710 天后，神经干细胞球 🦉 会 💮 附着在培养皿上。
5. 神经干细胞 🐱 的分化
神经干细胞球可以分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质 🐒 细胞。
要诱导分化，请在培养基中添加适当 🦢 的生长因子或激素。
6. 神经干细胞的 🌷 鉴定 🦅
可以使用免疫细胞化学 🌾 或流式细 🐞 胞术来鉴定 🍀 神经干细胞。
神经干细胞通常表达 Nestin、Sox2 和 Oct4 等 🌺 标记 🐞 。
注意事项确保所有材料和设备无菌 🐅 。
在无菌罩 🦁 内进行操作。
按照正确的安全协议处理 🦅 生物危害物质。
定期监测培养物，以确 🐺 保神经干细胞球的 💐 生长和 🌷 存活。
3、小鼠骨 🐞 髓干细 🐱 胞attc
小 🦋 鼠 🐟 骨髓干细 🐯 胞 (ATCC)
目录号 🐅 ： TIB44
细胞类型： 骨髓基质 🐶 细胞
来源 🌸 ： 小鼠
培养基： DMEM，含 10% FBS 和 🐎 1% 抗生素 🐛 抗真菌剂
生长条件 🐦 ： 37°C，5% CO2
倍增时 🐼 间： 2448 小时 🐡
形 🐋 态： 多角形、贴 🌼 壁生长
应用：研 🦅 究骨髓发育和功能 🐟
再生医学和组织工 🐱 程
开发治疗骨髓 🐛 疾病的新疗法
药 🌴 物筛 🌸 选和毒 🦢 性检测
特性：高度 🐟 增殖能 💮 力 🐶
分 🐡 化为多种细胞 🌸 类型，包括成骨细胞 🌼 、软骨细胞和脂肪细胞
具有免疫调节特性 🐕
分泌促生 🐬 长因子和细胞 🐘 因子
注意：培养细胞时 🐼 ，应定期更换培养 🐒 基并监测细胞生长。
细胞应在对数生 🐯 长 🐺 期进行传代。
过度传代会影响细胞的增 🐧 殖能力和分化潜能。
4、小鼠 🐝 神经干细胞提取方法
小 🪴 鼠神经干细胞提取方 🐛 法
材料：68 周 🐠 龄雌 🐺 性小 🦄 鼠
无菌 ☘ 手术 🌷 器 🐳 械
生 🕊 理 🐶 盐 🦄 水
1x PBS
胰蛋 🦆 白 🌿 酶 🐵 (0.05%)
含 10% 小 🐅 牛血清和 B27 补充剂的神 💮 经 🐟 干细胞基础培养基
培养板培养瓶
CO2 培 🦋 养箱 (37°C, 5% CO2)
步骤：1. 动 💮 物准备 🐛
给小鼠麻醉 🦈 ，并进行消毒。
2. 脑组 🌼 织获 💮 取
打开头 🐶 骨，暴 🌳 露出 🐒 大脑。
切除脑室侧壁的脑组织，包括海马体、齿 🌿 状回和 🦟 皮层。
3. 酶 🌵 消 🪴 化 🐕
将脑组织切 🐟 碎，放入 🐛 含胰蛋白酶的培养基中。
在 37°C 搅拌孵育 30 分 🌴 钟。
4. 离心和细胞分 🍁 离 💮
将酶消化 🕊 物离 🦍 心 🐅 （300 x g，5 分钟）。
用 1x PBS 洗涤沉淀 🐧 物 🌷 。
重新 🐳 悬浮沉淀物，并过滤通过过滤 40 μm 器。
5. 培 🐳 养 💮
将过滤后的细胞悬浮液 🦢 接种到神经干 🌳 细胞基础培养基中。
将培养板置于培养 37°C、5% CO2 箱 🐵 中 🌺 。
在培养 24 小时后更换培养 🦆 基。
6. 成球 🦆 形成 🕷
细胞将形 🦋 成悬浮的成球，代表神经干细胞。
每 34 天 🐱 更换一次培 🌷 养基。
7. 传 🌸 代 🐛
当成球直径达到约 150200 μm 时，可 🦋 以传代到新的培养板中。
用移液枪小心地吸取成球，将其转移到新鲜的培 🦟 养基中。
提示：使用无 💮 菌技 🐼 术以防止 🐈 污染。
持续监测细胞生长并定期更换培养基 🌳 。
小鼠神经干 🌻 细胞通常在培养 🐠 基中稳 🦆 定培养 12 个月。
提 🌴 取的 🦟 神 🐠 经干细胞可以用于各种神经科学研究，例如分化、再生和疾病建模。
