小鼠造血干细胞CFU（小鼠造 🐛 血干细胞分离试剂 🌷 盒）
- 作者: 胡非晚
- 来源: 投稿
- 2025-06-01
1、小鼠 🐺 造血 🕊 干细胞CFU
小鼠造血干细 🐳 胞集落形成单位 (CFU)
小鼠造血干细胞集落形成单位 (CFU) 是一组原代体外细胞测定，用于识别和量化具有不同谱系分化潜能的小鼠造血干细胞。这 🐛 ，些测定。法是基 🐼 于干细胞从单个细胞形成集落的能力该集落代表了干细胞的增殖和分化
常 🐼 见的 CFU 测 🕸 定 🐞 ：
CFUGM (粒细胞巨噬细胞)：评估产生 🐋 粒细胞和巨 🐠 噬细胞的干细胞。
CFUE (红 🐼 细 🐳 胞)：评估产 🐠 生红细胞的干细胞。
CFUMix (混合)：评估 🐝 产生多个谱系（粒细胞、巨、噬细胞红细胞）的干细胞。
CFUC (成纤维细胞)：评估产生成纤维细胞的干细胞，在造血微环境中 🐶 起到支持作用。
程序：CFU 测定通常涉及以下 🐞 步骤：
1. 骨髓 🌵 收获：从供体小鼠中收 💮 获骨 🐺 髓。
2. 细胞悬液 💮 ：将骨髓细胞悬浮在 🌴 培养基中。
3. 稀释：将细胞悬液稀释，以获 🌼 得单个细胞。
4. 播种：将单个细胞播种到半固体培 🌷 养基中，例如甲基纤维素。
5. 培养：将细胞培 🦟 养一段时间 🍁 （通常为 714 天 🐎 ）。
6. 集落计数：在培养结束时计数，具有特征形态 🌳 （例如集落具有，CFUGM 中性粒细胞和巨噬细胞）的集落。
应用：CFU 测定广泛用于研究造血干细胞生 🌿 物学，包括：
确定不同干 🌻 细胞群的频率。
研究 🐋 干细胞的增殖 🐛 和分化 ☘ 。
评估造血疾病和治疗干 🐋 预 🌷 措施的影响。
用于研究干细 🦆 胞移植和再生医学。
局限性：CFU 测定 🦊 有 🌲 其局限 🐅 性，例如：
测 🦊 定受培养条 🪴 件的影响 🐳 。
不能 🍁 捕 🐒 获所有类型的 🌵 造血干细胞。
无法区分具有 🌷 相同分 🌵 化潜能的不 🐼 同干细胞群。
2、小鼠造血干细胞分 🦈 离 🐟 试剂盒
小鼠造血干 🕸 细胞分 🍁 离 🪴 试剂盒
用途分离小鼠骨髓和外周血中的造血干细胞和 (HSC) 祖细胞 🦈 。
原理该试剂 🕸 盒使用磁珠 ☘ 分选技术：
1. 免疫标记 🌲 ：抗体磁珠与特异性 HSC/祖细胞标记物结合 🐧 。
2. 磁珠分离：标记的 🌲 细胞被磁 🦊 柱捕 🐠 获。
3. 洗脱：非靶细胞被洗脱，留下富 🦉 含 HSC/祖细 🐅 胞的细胞 🐵 群。
优点高纯 🦋 度：产生高度纯化的 HSC/祖细胞群。
快 🌼 速简便：可以在不到 2 小时内进 🐈 行分离。
可扩展性：适合从大容量 🐎 样品中分离细胞。
试剂盒内容 🐠
抗体包被 🌿 磁 🐋 珠
分离 🪴 缓冲液
洗 🌺 脱缓冲液 🦅
磁 🌷 分离柱 🐠
使用说明1. 准备细 🌳 胞悬液：从骨髓或外 🦉 周血中分离 🐡 单个细胞悬液。
2. 免疫 🌵 标记：将抗体包被磁珠与细胞悬液孵育，结合 HSC/祖细胞标记 🐼 物。
3. 磁性分离：将 🦉 细胞悬液施加到磁 💐 柱上，并将标记的细胞捕获。
4. 洗脱：用洗脱缓冲液洗脱未标 🐶 记的细胞 🦊 ，释放纯化的 HSC/祖细胞。
应用发育生物学研究研究：祖 🕊 HSC/细胞的发育和分化。
干细胞移植：分离用于移植 🐯 的 🐧 纯 🐳 化 HSC。
癌症研究研究：白血 🦢 病和淋巴瘤 🦁 中 🌿 的 HSC/祖细胞。
3、小鼠造血干细胞 🦉 移植实验
小鼠造 🌿 血干细胞移植 🐱 实验
目的：研 🌵 究造 💐 血干细胞在血液系统重建中的作 🦊 用
评估新疗法 🌺 针对血液疾病的 🦄 有效性
创 🐳 建免 🌹 疫缺陷小鼠模型 🍀 以研究人类疾病
实验流 🐈 程：
1. 小鼠供体和 🌸 受体 🐶 选择 🐈 ：
选择有合适基因 🐋 型的健康小鼠作为供体和受体。
对受体进行照射 🐯 或化学处理以破坏 🐦 其骨髓 🐟 。
2. 造血干 🦄 细胞采集：
从供体小鼠骨髓或血液中采集造血干细 🌷 胞。
用抗体标 🐅 记和 🪴 分 🐎 选造血干细胞。
3. 干 ☘ 细胞移植：
将供体造血干细胞静 🐒 脉注射或注射到受体小鼠的骨髓中。
输注的细胞数量和种类将根据实验目标而有所不 🦄 同。
4. 移植后 🌵 的监 🦟 测：
定期 🦄 监测受体 🐱 小鼠的体重、血液细胞计数和器官健 🦆 康状况。
使用 🦅 流式细胞术和其 🐯 他技术分析移植细胞的植入和分化。
根据需 🦅 要进行功 🐅 能评估，例如免疫 🌲 反应测试。
数据分 🦉 析 ☘ ：
分析移植细胞在受体小鼠 🦄 中的植入分、化和功能。
评估移植后血液 🌸 系统重建 🐅 的时间和程度。
研究新疗法 🦈 的效果，例如 🐺 存活率、疾病进展和治 🐧 疗反应。
应用：研究造血干 🐈 细胞生物学
开发针对白血病、贫 🐞 血和免疫缺陷等血液疾病的新疗法
创建免疫缺陷小鼠模 🐈 型以研究人类 💐 疾病，例如癌症和自身免疫 🐒 疾病
探索基因治疗和其他干细胞疗 🌷 法的应用
注 🦟 意事项 🌷 ：
小鼠造血干细胞移植实验涉及活体动物。必。须遵守所有动物福 🐘 利和伦理准则
移植成功率可能因小鼠品系、供体和受体的 🐅 基因 🐠 型以及 🌴 移植技术等因素而异。
应仔细设计和实施实验 🐦 ，以 🐳 确保获得可靠和可重复的结果。
4、小鼠造血干 🌷 细胞怎么提取 🐴
小鼠造血干细胞 (HSC) 的 🐶 提取
材料：雄性 🐛 或雌性小鼠
PBS (pH 7.4)
2% 小牛血 🌹 清 🐴 白蛋白 🕸 (BSA)
抗凝剂 🐡 (如肝 🐘 素 💮 或 EDTA)
40 μm 细胞滤 🕸 网 🦄
磁性细胞分选 (MACS) 系统或流式细胞术 🌾
抗体抗抗 🌴 ：和抗抗 🌲 体 CD34、 CD38 cKit
步骤：1. 小鼠麻 🌴 醉和 🦢 杀 🦢 伤
将 🐋 小鼠用异氟醚麻醉 🐅 。
用 🐬 剪刀沿中线剪开腹 🐱 部，露出骨盆腔 🦟 。
取 🐧 出完 🐋 整股骨。
2. 去除 🐴 骨髓 🦉
用 27 号针 🦈 头和 1 mL 注射器小心地从股骨两端吸出骨髓 🐧 。
将骨髓收集到 🐘 含抗凝剂的 PBS 中。
3. 红细胞裂 🐵 解
将骨 🐯 髓悬浮液用平 🦊 衡的盐溶液稀 🐵 释 1:10。
加入 🍁 红细胞裂解缓 🌸 冲液，轻柔摇动 5 分钟。
离心去除裂解 🐈 的红细胞 🦢 。
4. 洗涤 🌷 和 🍀 过滤
将细胞悬浮液用 PBS 洗涤 🌳 两次。
通过 40 μm 细胞滤网过滤悬浮液 🐒 ，去除细 🐝 胞团 🌷 块。
5. 磁性细胞 🐡 分选 (MACS) 或流式细胞术
MACS: 使用 MACS 系统和磁 🦊 性珠子将 CD34+ 阳性细胞富 🦈 集 🕊 。
流式细 🌾 胞术: 使用抗抗 CD34、和抗抗 CD38 体 cKit 通，过流式细胞术对 HSC 进行分选。
6. 收获 🌲 和培养
收获富集的 HSC，并将其悬浮 🦄 在培养基中。
将细胞培养在含生长因子（如 🌺 IL3 和 SCF）的 🐳 半固体培养基中，形成集落。
注 🦋 意事项：
使 💐 用无菌技术进行 🐋 所有步骤。
用 🐝 新鲜骨髓制 🐱 备 HSC。
小 🐛 鼠年龄 🪴 会影响 🕊 HSC 的数量和质量。
优化抗体浓度 🐅 和孵育 🐈 时间，以获 💮 得最佳 HSC 富集。
