🐵 小鼠神经干细胞分化（小鼠神经干细胞的分离及培养实验）
- 作者: 马则先
- 来源: 投稿
- 2025-06-05
1、小鼠神经干细 🐋 胞分化
小 🦍 鼠 🐳 神经干细胞分 🐡 化
定义神经干细胞是能自我更新并分化为中枢神经系统三大主 🦢 要细胞类型的神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞的 🌳 多能干细胞。
分化途径小鼠神经干细胞分化途径的监管涉及多种分子和 🐼 信号通路：
细胞内信号 🌴 通 ☘ 路：
Notch 信号：抑制神经 💐 元分化，促进胶质 🐛 细胞分化。
Wnt 信号：促进神经元 🐶 和少突胶质细胞分化，抑制 🌷 胶质细胞分化。
Shh 信号：促进神经 🌿 元 🐞 分化，抑制胶 🌹 质细胞分化。
生 🐦 长因子：
表 🌷 皮生 🐅 长 🌻 因子 (EGF)：促进神经元分化。
神经生长 🐼 因子 (NGF)：促进神 🐧 经元分化和存 🕊 活。
白细胞介素6 (IL6)：促进少突胶质细胞 🐅 分化。
转录因 🐴 子 🌺 ：
Pax6：神经元分化的关键调节因子 🐟 。
Olig2：少突胶质细胞分化的 🌷 主要决 🐋 定 🐡 因子。
Sox9：星形胶质细胞分 💐 化的标记。
分化阶段小鼠神经干细胞分化通 🐞 常遵循 💐 一个序列性过程：
1. 神经祖细 🦋 胞：多能 🐶 干细胞，分化为神经元和胶质细胞前 🪴 体细胞。
2. 神经元前 🐬 体 🐟 细胞：进一步分化为神经元。
3. 少突胶质细胞前 🌷 体 🦊 细 🐈 胞：进一步分化为少突胶质细胞。
4. 星形胶质细胞前体细胞 🐒 ：进一步分化为星形胶 🐞 质细胞。
在外界环 🐎 境中的 🦍 影响 🐳
神经干细胞分 🕊 化过程受到许多环境因 🐧 素的影响，包括：
发育阶段：神经干细胞分化潜能 🦊 随发育阶段而变化 🐳 。
组织环境：与邻近细胞和细胞 🐠 外基质的相互作用调节分化。
损伤或疾病：脑损伤或疾病可以改变神经 🌼 干 🐞 细胞分化模式。
应用了解小鼠神经 🐵 干细胞分化对于再生医学具有重要意义，因为它为修复受损神经组织和治疗神经系统疾病提供了潜力。
2、小鼠神 🐦 经干细胞的分离及培养实验
小 🪴 鼠神经干细胞的分离及 🐼 培养实 🌷 验
材 🌿 料 🐛 和试剂 🐬 ：
CD1 小鼠 🌳 (13 周龄)
无 🕷 血清 🐝 培养基 (如 NeurobasalA)
神经 🌹 生 🐅 长因 🕊 子 (NGF)
表皮 🐒 生 🌷 长因子 🐦 (EGF)
白蛋白 🕊 (BSA)
培养板玻璃移液 🐛 管 🐼
细胞计数仪 🐘
步骤：1. 小鼠脑组织 🦋 的 🦉 解剖：
麻醉小 🦋 鼠，处 🦆 死后迅速取出 🐋 大脑。
在无菌条件下 🌹 ，去除小脑和 🐠 脑膜。
将大脑切成 🐅 小块，加入含 2% BSA 的无血清 🐒 培养基中。
2. 神经干 🦅 细胞 🐎 的分 🐠 离：
用玻璃移液管轻轻研磨脑组织 🐴 ，直至形成细胞 ☘ 悬液。
过滤细胞悬液，去除细胞 🦊 碎片 🐘 。
将细胞悬 🐛 液离心 10 分钟，1000 x g。
收集细胞沉淀，用含 NGF 和 EGF 的无血清 🐶 培养基重悬。
3. 神经 🦅 干细胞 🦁 的培 🌸 养：
将细 🕸 胞悬液接种 🐅 到培养板中 🌼 。
每 34 天 🐞 更换培养 🐵 基。
在 37°C、5% CO2 环境 🦊 中培 🐯 养 🦅 。
4. 神 🐦 经干细胞的鉴定 🦊 ：
免 🐕 疫细胞化学染色，检，测神经 🌵 干细胞标记物如 🦄 Nestin。
神经分化诱导，培，养神经 🌸 干细胞并添加诱导因 🕸 子观察分化为神经元和少突胶质 ☘ 细胞。
培 🌼 养基配制 🦈 ：
无 🌾 血 ☘ 清 🦋 培养基：NeurobasalA
生 🌸 长因子培 🍁 养基：无血清培养基 + 20 ng/ml NGF + 20 ng/ml EGF
注意事 🍀 项：
使用无 🐋 菌技术。
小鼠脑组织中可能含有传 🐒 染性物质，因此需要采取 💐 适当的安全预防措施。
NGF 和 EGF 对温度敏感，需 🌳 要在 🦅 4°C 下保 🦁 存。
细胞培养过程中需 🦈 要 🐛 定期监测 pH 值。
3、小鼠神经干细胞 🦅 分化成 🐘 什么
神 🦢 经元、星、形胶质细 🐦 胞少突胶质细胞
4、小鼠神经干细 🦟 胞分化实验
小鼠 🌵 神经干细胞分化实验
目的：研 🐳 究小鼠神经干细胞分化的条件 🐼 和机制。
确定 🐒 促进神经干细胞定向分化为特定神经元 🐳 亚型的因素。
材料：小 🍀 鼠神经干 🐴 细胞培养物
分化培养基 🐴 （含生长因子 🐺 和激素 🦊 ）
培养 🐶 板和 🌻 培养基 🦆
抗体和试 🐅 剂（用于免疫荧光 🐈 染 ☘ 色和 Western blotting）
显微镜和 🕊 成像系 🌷 统
程序：1. 细胞培 🦢 养：将小鼠神经干细胞培养在分化培养基中。
2. 分化诱导：加入适当的诱导因子 🌷 （如生长因子或小分子）以促进分化。
3. 时间 🐦 序列：定期采集细胞样品，以分析分化过程中的时程。
4. 免疫荧光 🦆 染色：使用 🐳 特定抗体标记不同的神经元亚型（如神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、突触素 1 (SYN1)、谷氨酸受体亚基 (GluR1)）。
5. Western blotting：分析分化过程中关键蛋白的表 🌲 达水 🐞 平（如 Nestin、GFAP、βIII微管蛋 🌸 白）。
6. 数据分析：定量分 🕷 析免疫荧光信号和数据 Western blotting 以，评估分化效率和特定神经元亚型的表达。
预期结 🦊 果 🍀 ：
神经干 🕊 细胞分化 🐕 成成熟 🐕 的神经元，表达特异性神经元标记。
特定诱导条件 🦊 促进神经干 🐺 细胞定向分化为特定神经元亚型。
分 🐬 化过 🦈 程涉及特定蛋 🐅 白表达模式的变化。
意义：了解神经干细胞分化的机 🌲 制有 🐠 助于神经再生和疾病治疗的研究。
确定的分化因素可以 🐠 用于生成特定类型 🪴 的神经元细胞移植。
该实验模型可用于筛 🐬 选和评估促进或抑 🍁 制神经干细胞分化的化 🪴 合物。
