小鼠提 🦁 取神经干细胞（小鼠神经干细胞的分离及 🌹 培养实验）
- 作者: 李南星
- 来源: 投稿
- 2025-09-24
1、小鼠提取神经干 🕷 细胞 🐯
小鼠 🐶 神经干细胞提取 🌷
材料：刚出生 🐱 的 🌴 小 🌵 鼠
解剖盘手术剪 🐶 刀
手 🐺 术镊 🕸 子
1x PBS
0.25% TrypsinEDTA 溶 🐱 液 🪴
神经干细 🦄 胞培养基（含 10% FBS 和 1% 抗生素）
步骤：1. 安乐死 🌿 小 🐅 鼠 🕊
根据机构规定使用适当 🐶 的方法安乐死小鼠。
2. 解 🦆 剖 🌻
将小 🦟 鼠仰卧放置在解剖盘上。
用手术 🐝 剪刀剪开 🐟 腹腔，露出内脏。
3. 取 🦟 出 💮 大脑 🐈
小心提起大脑 🌾 ，并用镊子将其移至新的解剖盘中。
4. 解离 🐼 大 🕷 脑 🐵
用手术镊 🐼 子将大脑分成 🍀 左右 🦋 半球。
将每个大脑 🌴 半球放在盛有 1x PBS 的培养皿中。
5. 消 🌾 化
用 0.25% TrypsinEDTA 溶液覆盖大脑 🐶 半 🐱 球，并孵育 1530 分钟 🦉 ，37°C。
定期搅拌培养皿，以确 🌺 保均匀 🐴 消化。
6. 终 🦊 止 💐 消 🌿 化
用含 10% FBS 的培 🕊 养基终 🌸 止消化 🐺 。
将细胞悬液转 🦆 移到离心管中，并以离心 1000 x g 分 5 钟。
7. 去除细 🐠 胞 🍀 碎片 🕸
去除上清液 🐴 ，并用 🐒 含 10% FBS 的培养基重悬细胞。
用 🌻 40 微米的滤网过滤细胞悬液 ☘ ，以去除细胞 🐴 碎片。
8. 培 🐡 养 🦆
将过滤后的细胞悬液转移到预涂有多胺的培养瓶 🐴 中。
添加神经干细胞 🐟 培养基，并 🌻 孵育在 37°C、5% CO2 湿润培养箱中。
注意 🐋 事 🌾 项 🦍 ：
使用 ☘ 无菌技术进行所有 🦁 步 🦉 骤。
优 🐛 化消化时间至关重要，以最大限度地提高神经 🐦 干细胞的收益率。
过滤细胞悬液可去除细胞碎片，改善 🐕 神经干细胞的纯度。
2、小鼠神经 🦋 干细胞的分离及 🌲 培养实验
小鼠神经 🐛 干 🦟 细胞的分离及培养实 🐺 验
目的分离和培养小 🦄 鼠神经干细胞。
观察神经干 🌳 细胞的形态和增殖特性。
材料小鼠胚 🌹 胎 🦋 （14.5 天）
神经干 🐱 细胞培 🦁 养基 🐎
胰 🕸 蛋 🐵 白酶
EDTA
培养皿吸管
培养箱
方法
一、神经干细 🐈 胞 🪴 分离
1. 将小鼠胚胎取出 🦉 ，置于无菌培养皿中 🌻 。
2. 用无菌 🦢 剪 🐦 刀和镊子切除胚 🦉 胎的大脑。
3. 将大脑组织小心地转移到盛有胰蛋白酶溶液的培养皿中 ☘ 。
4. 在 37°C 下孵育 30 分钟，每分钟 10 摇 🐈 动一 🐎 次。
5. 将组 🐯 织用吸 🌳 管轻轻吹打将，其破碎成 🐦 单细胞悬液。
6. 加入 EDTA 溶液 🐬 ，终止胰蛋白酶消化。
7. 离心收集 💮 细胞 🌸 ，用培养基洗涤多次。
二、神经干细 🍀 胞 🐅 培养
1. 将细 🐕 胞重悬于神经干细胞培养基 🐋 中。
2. 将细胞接 🐈 种到预先涂 🐬 有聚赖氨酸的培养皿中 🦅 。
3. 将培养皿 🐺 置于 37°C、5% CO2 的培养箱中培养。
4. 每 23 天更换 🦈 培养基。
观察形 🐘 态观察：将神经干细胞培养 710 天后观察，其形态变化。
增殖观察：使用 🐒 MTT 或其他增殖检测方法，评价神经干细 🌹 胞的增殖 🐴 能力。
结果分离后 🌳 的小鼠神经干细胞呈圆 🐳 形或卵圆形，体积较小。
神经干细胞在培养基中增殖良好，形成神经 🐦 球样团块。
MTT 试验显示神经干细胞的增 🦆 殖呈指数增长。
讨论通过 🪴 本实验，成功分离和培养 🐳 了小鼠神经干细胞。这，些，神经干细胞。表现出良好的增殖和分化能力可用于进一步的研究如神经再生和神经 💐 疾病治疗
3、小鼠提取神经干细 🦄 胞的原理
小鼠神 🐈 经干细 🐯 胞提取原理
神经干细胞是从中枢神经系统 🦁 中获取的多能祖细胞，可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。小鼠神经干细胞的提取过程如下：
1. 组织 🐞 采集 🐦 ：
使用小鼠胚胎或新生小鼠脑组织作 🦢 为来源。
2. 胶原酶消 🦊 化：
将 🕷 组织切成小块，用胶原 🦆 酶溶液消化分离细胞。
3. 过滤和离心 🌳 ：
使 🌴 用细胞过滤器 🕷 去除组织碎片 🌳 。
离 🕷 心收集细胞。
4. 神经干细 🐟 胞选择：
使用免疫磁珠或流式细胞分选法选，择，表达神经干细 🐬 胞表面标记的细胞如或 nestin Sox2。
5. 扩增培养 🌻 ：
将分离的神经 🐎 干细 🐺 胞培养在培养基中，含，有生长因子和促增殖因子以促进细胞扩增。
6. 神经细胞 ☘ 分 🍀 化 🐯 ：
通过改变培养 🌼 条件或添加特定的诱导 🐯 因子，可将神经干 🦟 细胞诱导分化为神经元、少突胶质细胞或星形胶质细胞。
关键点：不同发育阶段的小鼠 🐠 组织含有不同数量和类型的神经干细胞。
提取方 🐦 法可能会因组织来源和所需细 🐳 胞类型 🦄 而异。
神经 🐬 干细胞的分化能力取决于它们的来源、培养条件和诱导因子。
4、小鼠提取神经干细胞多少 🐞 钱 🕊
小鼠提取神经干细胞的成本 🦉 可能 🕷 因研究机构、国家/地区和所使用的特定技术而异。一般来说可，以预期以下 🐶 费用范围：
研 🐧 究机构费用：每只小鼠 50200 美元，包括动物购买、饲养和设施费用。
手术 🦅 费用：每只小鼠 100300 美元，包括麻醉手术、和组织采集。
细胞培养费用：每只小鼠 50150 美元，包括培养基培养、皿和试 🐛 剂。
免疫分析费用：每只小鼠 50200 美元，包括抗体、细胞标记 🍀 和流式细胞术分析。
因此，提取一只小鼠的神经干细胞的总成本可能在每只小鼠 250750 美元之间。请，注，意。这些 🐧 只是估计值实际成本 🐈 可能会因具体情况而异
