小鼠干细胞 🌾 如何培养（小鼠干细胞如何培养出来）
- 作者: 马瑾伊
- 来源: 投稿
- 2025-09-28
1、小鼠干细胞如 🐴 何培养 🍁
小鼠 🦁 胚 🐠 胎干细胞 (ESC) 的 🦟 培养
材料：ESC 培养 🦈 基：标 ESC 准培养基，如 DMEM/F12、B27 补充剂 🌵 、LIF（白细胞抑制因子）或抑制剂 2i
无血清 🕸 培养基：用于去除血清的培养 🌳 基 ESC
PSC 分離培养基：用于從貼壁細胞 🪴 培養 🐺 皿中分離 🦆 ESC 的培養基，如 Accutase
10 厘米培养 🕷 皿 🐵
胶 🌷 原 🐅 酶 🐯 IV
0.01% 明 🐈 胶 🐠
ESC Feeder 細胞 🦋 （例如 MEF）
步驟：1. 分離 Feeder 細胞：在 10 厘米培养皿中 🌵 貼壁培養 🐺 細胞 MEF 。
2. 塗布培 🐡 養皿：用 0.01% 明胶預塗 🐎 抹 10 厘米培養皿。
3. 移除血清：用 🌿 無血清培養基洗滌 Feeder 細胞，並更換為新鮮的無血清培養基 🦊 。
4. 收集 ESC：用 PSC 分離培養基孵育分 ESC。5 鐘後用，細 ESC。胞刮刀 🐟 輕輕刮下
5. 去除 Feeder 細胞：將收集的 ESC 加 🦅 Feeder 入 🌻 細胞培養皿中細胞將。Feeder 附著在培養皿底部，而 ESC 則。會留在培養基中
6. 收集 ESC：用 ESC 培 🐺 ESC 養基將懸浮物轉移到新的 10 厘米培养皿中。
7. 孵育：在 37°C、5% CO2 的培養箱中孵 🌿 育 🌺 ESC。每 23 天。更換一次培養基
小鼠 🕊 誘導 🌳 多能幹 ☘ 細胞 (iPSC) 的培養
材料：iPSC 培養基：標 iPSC 準培養 🦆 基，如 DMEM/F12、B27 补充 🦄 劑、LIF 或 2i 抑制剂
PSC 分离培养基：用于从贴壁细胞培养皿中分 🌾 离 iPSC 的培养基，如 Accutase
Matrigel 或 vitronectin：基质涂层 🦍 用于培养 🌸 iPSC
10 厘 🌸 米 🐧 培养皿 🐞
步骤：1. 塗布培養皿：用 Matrigel 或 vitronectin 預塗抹 🐋 10 厘米培養皿。
2. 收集 iPSC：用 PSC 分離培養 🦉 基孵育 🪴 分 iPSC。5 鐘後用，細 💐 iPSC。胞刮刀輕輕刮下
3. 去除基質：將收集的 iPSC 加 🐝 入預塗抹 🌷 的 10 厘米培养皿中。用 iPSC 培養基輕輕吹打 PSC，以去除基質。
4. 收集 iPSC：用 iPSC 培 iPSC 養基將懸浮 🦅 物轉 🦄 移到新的培 🌷 養皿中。
5. 孵育：在 37°C、5% CO2 的培養箱中孵育 🦅 iPSC。每 23 天。更換一次 💐 培養基
注 🐅 意事 🐡 項 🐞 ：
保 🦈 持 ☘ 無菌操 🦁 作，以防止污染。
定期檢查培 🦆 養物，並 🦅 去除任何分化的 🌺 細胞。
ESC 和 iPSC 對培 🦉 養條件很敏感，請仔細遵循 🦁 步驟並使用高品質的組成部分。
2、小鼠干细胞如 🐅 何培养出 🦍 来
小鼠干 🐛 细胞 🌹 培 🐘 养
材料：胚胎 🌲 或诱导多能干细胞 🐕 (iPSC)
培 🌼 养基 💐 （如 DMEM 或 20% FBS 的 🐞 RPMI1640）
小鼠 🐒 胚胎成纤维细胞 (MEF)
庆大霉 🐴 素/青霉素 🦢 溶液 🐝
0.25% 胰蛋 🐬 白酶 🦋
培养板培养瓶
步骤：
1. 激 🐡 活 🌾 MEF 培 🐡 养：
在 🐳 培养板中加入一层 MEF 并加入培养基。
在 37°C、5% CO2 孵育 2448 小时 🐶 ，直 🌴 至 🦆 MEF 形成贴壁层。
2. 制 🐟 备 🕸 胚胎 🐕 或 iPSC：
从胚胎 🐼 中分离 🦟 出内细胞团或从中 iPSC 收 🌿 集细胞。
3. 将胚胎 🌷 或 iPSC 放 🦊 置在 MEF 上：
将胚胎或 iPSC 悬 🐴 液添加到 MEF 培养 🐳 板上 🐅 。
轻柔地 🕊 摇晃培养板，促进胚胎或 iPSC 附着。
4. 培 🦊 养 🐈 ：
在 37°C、5% CO2 孵育 🐘 2448 小 🦉 时。
每 🐛 隔 23 天更换培养 🍀 基。
5. 选 🐅 择干细胞：
培养约 1 周后，观察培养 🐋 物中是否出现 ESC 样 🐬 菌落 🐛 。
这些菌 🕸 落通常呈圆形 🦊 、紧凑且具有清晰的边缘。
6. 传 🐈 代 🐕 ：
使用胰 🌴 蛋白酶消化干细胞菌落并 🐡 将 🐘 其转移到新的 MEF 培养板上。
重 🦄 复第 4 和第 🐺 5 步 🐱 。
提示：使用 🌷 高质量的 MEF 至 🌳 关重要。
培养基必须 🦈 富含生长因子（如 LIF 或 bFGF）。
培养物应定期监 🦟 测污染 🕷 。
传代应谨慎进 🐋 行，以避 🐝 免损坏干细 🐝 胞。
3、小鼠干 🍁 细胞如何培养的
小鼠 🦁 干 🌳 细胞培养方 🕊 法
材料：无 🐳 菌培养皿 💐 和培养瓶
无血 🌵 清培养基（如 🐧 DMEM/F12）
补 🐎 充 🐴 剂（如LIF、bFGF）
胚胎干 🦉 细胞（ESC）或诱 🦉 导多能干细胞（iPSC）
预涂有明胶或层粘连蛋白的培养皿 🌴
移液器 🌳 和吸头
二氧化碳 🐝 培 🌲 养箱 (37°C，5% CO2)
步骤：1. 解冻细胞：将冷冻的胚胎干细胞或诱导多能干细 🌾 胞在的 🦆 37°C 水浴中解冻 23 分钟或在的，培 37°C 养箱中 🐳 解冻分钟 5 。
2. 去除冷冻保护剂：将解冻的细胞缓慢稀释到 10 毫升无血清培养 🦁 基中，然后小心地 🐦 洗涤离心（1500 rpm，5 分钟）。
3. 接种细胞：将培养基小心地吸出，然后向培 🐋 养皿中加入 510 毫升新鲜的无血清培养基将细胞。悬，液接种到预涂好的培养皿中使细胞密度为 12 x 10^6 个细胞/mL。
4. 培养条件：将培养皿置于 37°C、5% CO2 的培养箱中。每天更换的培 🐴 养 50% 基。
5. 传代：当细胞变为 8090% 融合时，进行传代。小，心地吸出培养基用 PBS 洗。涤一次用 0.25% 甲状腺酶处理细胞 5 分，钟。然，后。用，无血清培养基终止消化轻轻吹打细胞以将它们从培养皿上分离下来将细胞悬液收集在离心管中然后离 💐 心分钟（1500 rpm，5 重）。新，悬浮细胞并将其接种到新的预涂好的培养皿中重复步骤 4。
提示：使用无菌技术来 🐟 避免污染 🕸 。
定期监测细胞以确保 🐧 它们健康和未 🐅 分化。
添加 LIF 或 bFGF 等补充剂 🦢 以促进干细胞 🐱 的自更新。
避免过 🦟 度传代，因为它可能 🐧 会导致细胞分化。
4、小鼠 🐒 胚胎 🕸 干细胞的培养
小鼠胚胎干细胞 🍀 的培养 🕸
材料：小鼠胚 🌵 胎 🌷 干细胞细 🐱 胞（ES ）
ES 细胞 🐦 培养基 🌾
灭活血清（例 🐯 如胚胎小 🕷 牛血清）
白细胞介素 🐶 2（IL2）
培养 🦅 皿 🌾 或培养 🦆 板
培养基过滤 🐈 装置 💮
离心机超净 🐠 工作 🌴 台
步骤：1. 解 💐 冻 ES 细 🌷 胞：
将冷冻的 ES 细胞迅速浸入的 37°C 水 🐒 浴中。
一旦溶 🦊 解，将细胞转移到含培养基的培养皿中。
轻轻吹 🦈 打培养皿以分 🌻 散细胞。
2. 去除 🐺 冷冻保护剂：
用离心机以每分钟离心 200 × g 细胞 🐦 分钟 5 。
去除 💮 上清液 🐎 。
向细胞沉淀中加入预热的培 🌺 养基 🐘 。
轻 🌿 轻 🐺 吹打培养皿以重 🌸 悬细胞。
3. 计数和 🐡 稀释细 🐵 胞 🕊 ：
使用血 🐴 细胞计数板 🐘 计数细胞。
将细胞稀释 🐡 到 1×10^6 个细胞/mL。
4. 接种细 🐋 胞：
将 🐕 细胞接种到涂有明胶的 🕸 培养皿或培养板中。
加入足够的培养基以覆盖细 🪴 胞 🌿 。
5. 培养细 🦅 胞：
将培养皿或 🦋 培 🐼 养板 🐳 置于 5% CO2、37°C 的培养箱中。
每 🐺 隔 🐋 23 天更换培养基。
每 🌹 隔 710 天传代 🌳 细胞。
传代 💮 细 🐟 胞：
用 🌲 胰蛋白酶处理细胞 510 分 🌷 钟，直至细胞从培养皿上脱落。
用灭活血清终止 🐧 胰 🌷 蛋白酶消化。
离心 🌾 细 🐵 胞并去除上清液 🦄 。
用培 🐯 养基重悬 🦊 细胞。
将细胞接种到 🕊 新培养皿或培 🍁 养板中。
提示：使用高品质的 🐡 ES 细 💮 胞培 🐟 养基。
培养基过滤以去 🐼 除 🌾 细菌或真菌污染 🌳 。
在超净工作台操作以防 🐦 止污染。
定期监测细 🦊 胞的形态和增殖速率。
ELISA 或免疫荧光分析可用于验证 ES 细胞的特征 💮 。
