诱导小鼠骨髓干细胞（小鼠骨 🐳 髓造血干细胞 🦉 染色体的制备和观察）

1、诱导 🐬 小鼠骨髓干细胞

诱 💐 导小鼠骨髓干细胞

诱导小鼠骨髓干细胞 (BMSC) 是通过体外培养和适当的诱导剂处理将 BMSC 再编程为 🪴 特定细胞类型的过程。以 BMSC 下步 🦢 骤了诱导小鼠的一般方法：

1. BMSC 分 🌷 离和培养：

从小鼠胫 🦈 骨或股骨 🦆 中提取骨髓。

在合 🐡 适的培养基中分离和 🌾 培 🌵 养 BMSC。

2. 转基因 🐘 或病毒转 🕊 导：

转染或 🐶 转导 BMSC 表达诱导转 🐋 录因子的基因 🕷 ，如 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc。

这些因 🐬 素促 🐠 进细胞重编程。

3. 诱 🌿 导培 🐯 养：

将转基因 🪴 的 BMSC 培养在含有 🐦 多能性相关因子的诱导培养基中。

培养条件随 🌳 着时间的推移而变化，以促进多能性 🌴 。

4. 产生 🌸 iPSlike 细胞：

经过 🌵 一段时 🐞 间的诱导后，BMSC 将获得诱 🐒 导多能干细胞 (iPS) 样细胞的特征。

这些 🐋 细胞表现出与胚胎干细胞相似的多能 🦁 性和 🌲 分化能力。

5. 表 🐵 征 🕷 和验证：

通过免疫细胞化学染 🦆 色、RTPCR 或转录组学分析对 iPS 样细胞进行表征。

确 🐕 认多能性标记的表达和分 🐦 化潜能。

6. 分 🐒 离 🦆 和扩 🐶 增：

从诱 🌷 导培养物中分 🐯 离 iPS 样 🐳 细胞并进一步扩增。

纯 🍁 化并冷冻用于未来的 🐼 应用 🦁 。

诱导小鼠 🐝 BMSC 具有广泛 🌿 的应用 🐒 ，包括：

药物筛选和毒 🐴 性研究

再 🐋 生 🌾 医学和 🐛 组织工程

发育 🦈 生 🪴 物学研 🐡 究

疾 🌿 病建模 🍁 和治疗

2、小鼠骨髓造血干细胞染色体的制备和 🕸 观察

材 🦊 料 🐝 和设备 🐵

小鼠 🦋 骨 🌸 髓

Hank's 溶 🐧 液 🦊

胶 🌵 原酶 IV

胰蛋 🦅 白酶

胎牛 🌸 血 🐴 清 💮 (FBS)

RPMI 1640 培 🕸 养 💐 基 🌴

次 🦋 黄 🌲 嘌呤 🌵

柠 🦅 檬酸 🐡 钠 🐧

抗 🐈 凝血剂 🐶

超速 🌻 离 🐵 心机

染色 🦋 剂（例如吉姆 🐬 萨染液染液、Giemsa 或特异性荧光抗体）

1. 骨髓采 🌿 集

将 🌼 小鼠安乐死。

暴露股骨和小腿 🍀 骨。

使用无 🐦 菌注射器和针头抽取骨髓 🐅 。

2. 造血干细 🐯 胞分离

将骨髓悬浮在 🕸 Hank's 溶液中。

加入胶原酶 IV 和胰蛋白酶消化 🦟 30 分钟。

过滤细胞 🌴 悬液以去除骨碎片。

用 RPMI 1640 培养基补充 FBS 冲洗 🐵 细胞。

将细胞悬液 🐟 离 🦉 心，去除上清液。

3. 染 🌷 色体制 🐕 备 🐝

将细胞悬浮在 🐴 次黄 🌾 嘌 🐼 呤溶液中 20 分钟。

加入酚 🐎 红 🍁 溶液 510 分钟，使细胞膨胀 🐵 。

加入柠檬酸钠溶液 510 分 🐦 钟，进行固定。

4. 幻灯片制备 🕊

将细 🌳 胞悬 🐡 浮滴在滑片上。

倾斜滑片以使细 🐎 胞扩散。

用 37°C 加 🌾 热的烤箱干燥 🌳 滑片。

5. 染 🐅 色 🐘

根据使用的染色剂进行染色，具体方 🐼 法因染色剂而异。

用水冲洗 🪴 染色 🦉 过的 🦊 幻灯片。

干燥 ☘ 幻灯片 🌸 。

6. 观 🌲 察 🌸

在显微镜下 🌻 观察染色过的染色体。

拍摄图像以进行分 🐒 析。

在无菌条件 🐧 下进 🐒 行所有操作。

优化消化和 🦍 染色步骤以获得高质量的染色体制备。

选择性染色剂 🐞 可用于识别特定的染色体区域或标记特定基因。

对染色体进行适当的分析和解释，以确定造 💐 血干 🌷 细胞的遗传特征。

3、小鼠 🐴 骨髓间充质干细胞培养 🦉 实验报告

小鼠 🐶 骨髓间充 🐞 质干 🪴 细胞培养实验报告

间充质干 🦋 细胞 (MSC) 是多能干细胞，可，在培养基质中自我更新和分化成各种间充质谱系例如成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。小鼠骨髓是 MSC 的，丰 MSC 富。来。源可用于研究的生物学特性和治疗潜力本实验报告介绍了小鼠骨髓间充质干细胞的培养和表征

材料和方 🌳 法 💐

从 🐒 健康小鼠中解剖 🐟 出股骨和胫骨 🐳 。

用无菌 PBS 冲洗骨 🐒 髓腔以收集骨髓细胞。

MSC 培 🌺 养 🐒

将骨髓细胞悬液按 🪴 1:2 的比例接种到含 DMEM/F12 培养基、10% 胎牛血清 🐴 (FBS) 和 1% 青霉素链霉素的培养瓶中。

在 37°C 和 5% CO2 培 🐎 养 🍀 箱中培养 🌵 细胞。

每 🐟 34 天更换新鲜培养基 🐱 。

免疫细胞化学 🐝 染色：用 CD29、CD34 和 CD44 抗体染色 MSC，以确认它们的免疫表型。

成骨分化：在成骨诱导培养基中培养 MSC 21 天，并使用茜素红染色法检测成 🐵 骨细胞的分化。

软骨分化：在软骨诱导培养基中培养 MSC 21 天，并 🦁 使用阿尔新蓝染 🦈 色法检测软骨细胞的分化。

脂肪分化：在脂肪诱导培养 🐯 基中培养 MSC 21 天，并使用苏丹红染色法检测脂肪细胞的分化。

MSC 培 🦉 养 🦍

MSC 形 🌳 态呈梭 🐒 形，贴壁 🐼 生长。

MSC 每 34 天分裂一次，达到 confluent 状 🪴 态。

免疫细胞化学 🐦 染色 🕊 证实 MSC 对 CD29 和 CD44 呈阳性对呈，阴性 CD34 。

成骨诱导培养后，MSC 分 🐅 化为 🐴 茜素红阳性的成 🐘 骨细胞。

软骨 🕷 诱导 🦋 培养后，MSC 分化为阿尔新蓝阳性的软骨 🐛 细胞。

脂肪诱导培养后，MSC 分化为苏丹 🦆 红阳性的脂 🌴 肪细胞。

本研究成功地从小鼠骨髓中培养和表征了间充质干细胞培养。的表 MSC 现出自我更新和分化为成骨细胞、软骨细胞和。脂 MSC 肪 🐵 细胞的 MSC 能力这些可用于研究的生物学特性和治疗潜力，例。如骨再生和软骨损伤修复

4、小鼠骨 🕊 髓间充质干 🌷 细胞提取方法

小鼠骨髓间充质干细胞 🐵 提取方法

70% 乙 💐 醇 🌾

PBS 缓 🐞 冲液

骨 🦁 髓采 🐶 集针 🐕 （21G）

15mL 离心 🌲 管 🐧

无 🐟 血清 🐋 培 🐴 养基（如 DMEM/F12）

完 🐎 整培养基（如 DMEM/F12，含 🕷 10% FBS）

1. 准备小鼠 🌷 ：

对小鼠进 ☘ 行麻 🐼 醉。

用 70% 乙醇擦拭小鼠后肢 🐠 。

2. 采 ☘ 集骨 🐶 髓：

将骨髓采集针插入小鼠股骨 🦁 远端 🕊 。

缓慢抽吸，收集 🐋 ~1mL 骨髓悬液。

3. 离 🦟 心 🦈 ：

将骨 🐈 髓悬 🐦 液转移到 🌸 15mL 离心管中。

4°C，1200 rpm 离心 🐈 10 分 🐧 钟。

4. 收 🦈 集骨髓 🦆 细胞 🦉 ：

小心地吸出上 ☘ 清液。

加入 🐬 无血清培养基重悬细胞。

5. 贴 🦄 壁 🦍 培 🐺 养：

将 🐟 细胞悬液接种到 🦢 培养皿中。

37°C，5% CO2 下 🐱 孵 🪴 育 🦊 。

隔日更换培养 🐳 基。

6. 贴壁 🐡 细胞增殖：

贴壁细胞在 🐶 710 天内增殖并形成细胞簇。

当细胞达到 8090% 汇合度时 🌻 ，用胰蛋 🕸 白酶消 🌴 化并传代。

保 🐅 持无菌 🐟 操作 🐠 以防止污染。

轻轻 🐠 处 🦍 理细胞，避免损 💮 伤细胞。

定 🐟 期监测细胞生长并更换培养基。