🌵 小鼠间充 🌵 质干细胞培养（小鼠间充质干细胞培养基 sciencell）
- 作者: 杨舒念
- 来源: 投稿
- 2025-07-07
1、小鼠 🍀 间充质干细胞培 🦍 养
小鼠间充质 🐼 干 🐦 细胞培 🐅 养
材料：小鼠
无血 🌻 清 🐠 培 🌴 养基（如 DMEM/F12）
含 10% FBS 的 🐡 培 🐞 养基
抗生素 🐝 抗 🍁 /真菌 🦆 剂
胰蛋 🦍 白酶 🐺
培养皿 🌼 和培养瓶
移液 🌺 器和枪 🦈 头
步骤：1. 小 🌹 鼠 🐳 的处 🦄 理
根据机 🐶 构的 🦄 规程获得小鼠。
对小鼠 🌿 进行安乐死。
2. 组织分 💮 离 🍀
分离小鼠骨髓、脂肪组织或其他含 🌲 有间充质干细胞的 🐳 组织。
用 🐅 无血清 🦢 培养基冲洗组织。
机械或 🐝 酶促地消化组织，释放 🦁 细胞。
3. 细 🦁 胞悬液的制备
将细胞 🐝 悬液通过细胞 70 μm 滤 🦉 网 🐯 过滤。
离心细胞 🐧 （200 x g，10 分钟）。
丢弃上清 🌴 液。
4. 细 🕊 胞贴 🐅 壁 🦄
将 🐟 细胞重悬于含 10% FBS 的培养基中。
以约 1x10^6 个细胞/cm2 的密度将细 💮 胞播种在 🦄 培养皿或 🐝 培养瓶中。
将细 🦆 胞 🐞 培 🐱 养于培养 37°C、5% CO? 箱中。
5. 培养基 🌾 更换 🐦
每 💮 23 天更换培养 🦄 基，或根据细胞生长情况更换培养基。
6. 细 🌿 胞传代
当细胞达到 7080% confluency 时，进 🐟 行细胞传代。
去除 🌻 培养基。
用胰蛋白酶消化细胞胰蛋 🐒 白酶（0.25% 分，5 钟）。
钝化胰 🌼 蛋白酶 🐼 活性（10% FBS 培养基）。
离心 🐝 细 🐝 胞，丢弃 🦅 上清液。
将细胞重悬于新鲜培养基中 🐟 ，按所需的密度播种到新的培养皿或培养 🐳 瓶中。
7. 特 🐳 征分 🌻 析 ☘
可通过流式细胞术分析间充质干细胞标记 🌾 （如 🌲 CD44、CD73）来鉴定细胞。
可使用成 🕊 纤维细胞分化、软骨分化和脂肪分化等方法评估细胞的分化潜力。
提示：使用无 🦅 菌 🦁 技术进行所有操作。
定 🦉 期监测细胞生长 🐺 情况。
优化培养 🌷 条件以实现最佳细胞生长和分 🐟 化。
间充质干细胞的特征和分化潜力可能因组织来源 🌻 和培养条件而异。
2、小鼠 🕷 间充质干细胞培养基 sciencell
ScienCell 小鼠间充质干细胞培养基 🍁
产 🐋 品编号： M3234
特点：专 🐧 为培养哺乳动物间 🌴 充质干细胞设计。
无 🦁 血清，不含动物来源成分。
可维持 🕊 干 🐡 细胞的 🦟 增殖和分化潜力。
不含抗 🐯 生素或抗真菌剂。
质量控 🦉 制已验 🐕 证无支原体和 🦍 细菌。
成分：基础 🕊 培 🌻 养基 🌿 （DMEM/F12）
10% 胎牛血清 🌹
1% 间充质干细 🦊 胞生长补充剂（含 EGF、FGF 和胰岛素）
培 🌾 养说明：
1. 解冻细 💐 胞并按制造商 🌼 的说明培 🦆 养。
2. 将细胞培 🦟 养在 37°C、5% CO? 的湿润培 🌸 养箱中。
3. 每 34 天更换培 🐘 养基。
4. 当细胞达到 70%80% 融合度时 💮 ，传代。
使用 🌷 说明：
用于增殖 🐟 和分化小鼠 🐅 间充质干细胞。
可用于研究间充质 🌼 干细胞的生物学和治疗 🦟 应用。
储 🐧 存 🐶 和保 🐴 质期：
储 🌺 存温 🐼 度 🕊 ：4°C。
保质 🐘 期：6 个月 🐅 。
3、小鼠 🌺 骨髓间充质细胞培养 🍁 实验报告
小鼠骨髓间 🐼 充质 ☘ 细胞培养实验 🐡 报告
摘要本研究旨在建立小鼠骨髓间充质细胞（BMSCs）培养体系，并探索其增殖和分化的行为。我们从小鼠C57BL/6中，分离骨髓并通过 🐬 贴壁法培养培养过BMSCs。程，中我们监测细 🐈 胞的增殖速率、形。态和分化潜能结果表明能，BMSCs够，从骨髓分离并增殖并在、适。当的诱 🌿 导条件下分化为成骨细胞软骨细胞和脂肪细胞
材 🐞 料和 🐕 方 🍀 法
小 🐶 鼠骨髓分离
从C57BL/6小鼠中 🐝 取出股骨和胫骨。
冲洗骨髓腔，收 🐴 集骨髓 🌹 细胞悬液 🦟 。
细胞培养将骨髓细胞懸液接 🐎 种至含10%胎牛血清（FBS）的αMEM培养基中。
培养于37°C、5% CO2的培养箱中 🌹 。
每 🦟 23天 🐴 更换培养基 🐕 。
细胞增 🐼 殖 🐺 分析
使用3(4,5二甲基噻 🦁 唑基二 🦄 2苯基)2,5溴化四唑盐 🦢 （MTT）检测细胞增殖速率。
在不同 🌼 的培养时间点取样，加入MTT溶液并 🦈 孵育4小时。
溶解甲臜晶体，测量吸光度 🌷 以评估 🌹 细胞增殖 🐱 。
细胞形 🐬 态观察
定期使用显 🦉 微镜 🌹 观察细胞形 🐵 态。
拍 🐳 摄图 🪴 像以记录细胞的形态变化 🐒 。
细胞分化诱导 🪴
成骨分化：在 🐧 培养基中添加β甘油磷酸、抗坏血酸和地塞米松。
软骨分化：在培 🐳 养 🐋 基中添加转化生长因子 (TGF)β3。
脂肪 🦁 分化：在培养基中添加异丁 🪴 基甲基黄嘌呤 (IBMX)、地塞米松和胰岛素。
分化分析成骨分化：甲苯胺蓝染色以检测 🪴 钙沉积。
软 🐼 骨分化：阿尔新蓝染 🐵 色以检测软骨基质。
脂 🐎 肪分化：油 🦟 红O染色以检测脂肪小滴。
结果细胞增殖
BMSCs在培养2周内显示出指数增长，达到饱和状态。MTT分，析显示，细。胞增殖速率在培养 🌷 初期较高随后逐渐减慢
细胞形态初始培养的BMSCs呈梭形，随，着培养时间的延长逐渐变得多角形。分，化，诱，导，后。细胞形态发生 🐝 显着变化成骨细胞呈立方形软骨细胞呈圆形脂肪细胞呈圆形 🕷 并含有脂肪小滴
细胞分化BMSCs在适当的分 🐦 化诱导条件下能够分化 🕊 为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化分。析表明成骨细胞诱导，组，中，出。现钙沉积软骨细胞诱导组中检测到软骨基质脂肪细胞诱导组中观察到脂肪小滴
结论本研究成功建立了小鼠BMSCs培养体系培养。的BMSCs具有增殖能力，并。在BMSCs适。当的诱导条件下能够分化为多种细胞谱系这些结果为进一步研究的生物学特性及其在组织工程和再生医学中的应用奠定了基 🌺 础
