🌴 小鼠皮肤诱导干细胞（小鼠神经干细胞的分离及培养实验）
- 作者: 胡星葵
- 来源: 投稿
- 2025-10-02
1、小鼠皮肤诱导干细胞 🐺
小鼠皮肤诱导 🕷 干细 🐟 胞 (miPSC)
定义：miPSCs 是从 🌾 成体小鼠皮肤细 🦊 胞通过体外重编 💐 程技术生成的多能干细胞。
生成方法 🐕 ：
miPSCs 通常通过将奥克塔维尔4 (OCT4)、Sox2、Klf4 和 cMyc 等转录因子转染到小鼠尾尖成纤维细胞中而生成。这。些转录因子激活了胚胎干细 🐞 胞特性所需的基因
特性：多能性： miPSCs 具有分化成所有三个胚层细胞 🦊 （内胚层、外胚层和 🐼 中胚层）的潜力，就像胚胎干细胞一样。
源自体细胞： miPSCs 是从成体细胞中衍生的，而，不是胚胎这消除了伦理问题 🌹 。
与供体 🌹 的遗传匹配 🌴 与： miPSCs 它们所衍生的供体遗传匹配，使其成为特 🐠 定疾病建模和细胞替代疗法的有力工具。
分化限制： miPSCs 可能会出现表观遗传异常，这可能会限制它们 🦄 的完全分化潜力。
应用：miPSCs 已广泛用于 🌿 以下 🐋 应用 🌾 ：
疾病建模 🦆 ： 研究人类疾病的细胞 🐵 机制 🐺 ，如神经退行性疾病和癌症。
药 🐎 物筛选： 测试 🐳 新药物对 🌹 特定细胞类型的反应。
细胞治疗： 产生用于修复受损组织 🐴 或治疗退行性 🐵 疾病的移植细胞 🐒 。
个性化医学： 开发针对特定患者量身定制的治 🌷 疗方法。
再生医学： 创建新的组织或 🌸 器官以用于 🐼 移植。
挑战：尽管 miPSCs 具 🐘 有巨大潜力，但，仍存在 💐 一些挑 🪴 战包括：
重编程效 🐘 率低： 转化成 miPSCs 的成纤维细胞比例很低。
表观遗传异常： miPSCs 可能保 🐦 留供体细胞的表 🐘 观遗传标记，这可能会影响分 🐛 化。
免疫排斥： miPSCs 衍生的细胞可能被免疫系统排斥，除非它们与患者遗传 🐱 匹配。
持续的研究正在解决这些挑战 🦢 并提高的 🌼 miPSCs 治疗潜力。
2、小鼠神经 💐 干细胞的分离及培养 🍁 实验
实验目的了解小鼠神经干细胞的分 🐈 离和培养技术。
实验材料小鼠胚胎 🌻 （E14.5）
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)
神经干 🌲 细胞基本培养基：DMEM + 10% 胎牛血清 (FBS) + 1% 抗生 🐕 素抗 🐟 真菌剂 (AA)
神经干细胞培养基神经干细胞基：本培养基 + 20 ng/ml 表皮生长因子 💮 (EGF) + 20 ng/ml 碱性成 🐦 纤维细胞生长因子 (bFGF)
聚 💮 赖 🦟 氨 🦊 酸（PA）
胰 🦁 蛋 🐘 白酶EDTA
培养瓶移液枪
培 🐅 养 🌴 箱 🐠 （37°C，5% CO2）
实验步骤一、分离 🐎 神经干 🦈 细胞 🍁
1. 解剖取出小 🦆 鼠胚胎的 🌿 脑，放入 🐬 含胰蛋白酶的EDTA 缓冲液中消化 30 分钟。
2. 离心 🐈 收集细胞 🐠 ，用神经干细胞基本培养基重悬并过滤。
3. 在预先包被 PA 的培养瓶 🦟 中 🕷 培养细胞 24 小时，去除未贴壁细胞。
二、培 🕸 养神经干 💮 细胞
1. 将神经干细胞转移到含神经干细胞培养基 ☘ 的 🌼 培养瓶中继续培养。
2. 每 23 天更换培养 🌵 基培养，箱 🌴 条件为 🦢 37°C，5% CO2。
3. 当细胞达 🐛 到 8090% 汇合度 🌸 时，用胰蛋白酶EDTA 消化并传代。
预期结果培养瓶 💮 中会出现贴壁生长的神 🐳 经干细胞，呈小簇状。
神经干细胞在神经干细胞培养基中能够增殖和自我更新 🌾 。
实验注 🌲 意事项
严格无 🌻 菌操作 🌵 。
准确 🌴 配制培养 🕊 基。
保持培养 🍀 环境 🕊 稳定 🐠 。
观察细胞形态和 🦆 增 🦅 殖情况，及时调整培养条 🐒 件。
3、小鼠皮肤诱导干细 🐟 胞的方法 🐼
小鼠 🌷 皮肤诱导干细 ☘ 胞诱导（iPSC）方法 🍀
材料：小鼠皮肤 🌲 生 🐠 物样本 🦍
Dulbecco's改良 🌵 Eagle培 🐟 养基 🌷 （DMEM）
胎 🐈 牛 🐵 血 🐘 清（FBS）
白 🌵 蛋 🐵 白 🌷 小鼠胚胎干细胞培养基（ESC）
G418
传代酶（如 🦋 丝裂 🍀 霉素 C）
逆转录病毒转导 🦄 颗粒，包含以下转录因子 🐦 ：Oct4、Sox2、Klf4、cMyc
步骤：1. 收集小鼠皮肤生 🦈 物样本：
从小鼠尾 🌺 部或耳部采集皮肤组织。
将组织切成小块并酶解为单细胞悬 🦍 液。
2. 培养基质细胞 💐 ：
将单细胞悬液接种在DMEM、10% FBS 和 1% 抗生素培养基中含有 🐱 灭活的丝裂霉 🦍 素的培养 C 皿中。
培养基质细胞 🍀 710 天，直至形成贴壁细胞层 🐅 。
3. 逆转 🕷 录病毒转导：
收 ☘ 集含 🐞 有转录 💮 因子 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc 的逆转录病毒转导颗粒。
将转导颗粒与基质 🪴 细胞一起孵育 24 小时。
4. 选 🐧 择性扩 🌷 增 🕊 ：
转 🍁 导后，用 G418 选择具 🌼 有耐药性的细胞。
耐药性细胞是已成功整合转录 🌷 因子的的 🌸 iPSC 克隆。
5. 克 💮 隆 🐈 iPSC：
用传代酶（如丝裂霉素传代 C）耐药性细 🐠 胞。
分 🐋 离出单个 iPSC 克隆并接种到新的培养皿中进行扩增。
6. 表征 🦟 iPSC：
通过免疫荧光染色、RTPCR、全 🐎 基因组测序等方法表征 iPSC 的 🪴 干细胞特性。
确认 iPSC 具有自我 🐯 更新能力、多能性并能分化为各种细胞类 🦉 型 🐵 。
注 🌿 意 💐 事项：
使 🌲 用免疫缺陷小鼠作为生物样本来源，以避免 🦉 免疫排斥。
仔细监测 🌴 iPSC 的培 🐛 养，以防止分化或肿瘤形成。
iPSC 的诱导效率可能 🦟 因小 🐠 鼠 🐼 品系和皮肤组织的质量而异。
