小鼠骨髓干细胞分离（小鼠骨髓造血干细胞染色体的制备与 🌾 观察）
- 作者: 李南星
- 来源: 投稿
- 2025-05-15
1、小鼠骨髓干 🦋 细胞分离 🐯
小鼠骨髓 🌿 干细胞分 🐞 离
材料:小鼠骨 🦊 髓悬液
Hanks 平 🐒 衡盐 🐘 溶 🐼 液 (HBSS)
福氏 🐦 试剂 🐡 (StemCell)
磁性激活细胞分选分 (MACS) 离 🐬 柱和磁珠 (StemCell)
步骤:1. 制备骨髓 ☘ 悬液:
杀死小 🌾 鼠并取出 🐞 大腿骨。
用无 💐 菌 🦄 HBSS 冲 🦢 洗骨髓腔以收集骨髓细胞。
将骨髓细胞悬液过细胞 70 μm 筛 🐴 以 🐒 去除 💮 碎骨和细胞团。
2. 富集单 🦉 核细 🌳 胞:
将福氏试剂添加到骨 🌷 髓悬液中，以 🦍 富集单 🐡 核细胞。
根据制造商的说明 🐱 离心并洗涤细胞 ☘ 。
3. 磁 💮 珠分 🌿 离 🐈 :
将 MACS 微珠与福氏试剂标记的单核细胞 🦁 孵育 🐺 。
将 🕸 细胞悬液加 🐒 载 🐱 到 MACS 分离柱上。
应 🌲 用磁场，干，细胞将被珠子捕获 🐱 和 🐝 保留在柱子上而未标记的细胞将流出。
洗涤柱子以去除未 🌷 标记的细胞。
4. 收集干 🌿 细胞:
去除磁 🐅 场，用 🕊 HBSS 冲 🐛 洗柱子以释放被珠子捕获的干细胞。
提示:使用无菌 🐛 技术操作所有步骤。
如果 🦉 骨髓 🌻 细胞 🐦 悬液中含有大量红细胞，可以在分离之前进行红细胞裂解。
根据不 🌹 同的分离目标，可以选择不同的福氏试剂。
MACS 分离柱和磁珠的体积应与细胞悬液的体积相匹配 🦆 。
结果:此方法 🌻 将分离出小鼠骨髓中的干细胞分离。后的干细胞可用于各种下游应用，例如体外培养分、化。和移植
2、小鼠骨髓造血干细胞染色体的制备与观 🌾 察
小鼠骨髓造血干细胞染色 🐎 体的制备与观察
实验目的掌握小鼠骨髓造血干 🐡 细胞染色体的制备 🐳 技术
观 🌲 察小鼠骨髓造血干细胞染色体的形态和数量
实验材料雄性C57BL/6小 🦄 鼠（68周龄）
生 🦟 理盐水 🦅
PBS缓 🍀 冲液 🐳
0.075M KCl体 🐡 液 🐡
固定液（甲 🌷 醇：冰醋酸 = 3:1）
染色 🦟 液 🦉 （吉姆 ☘ 萨染液）
载玻片、盖玻片 🌴
显微镜实验步骤
一、小鼠骨髓造血 🍀 干细胞的 🌳 收集
1. 处 🐯 死小鼠，取出 🦉 股骨 🌾 和大腿骨。
2. 用生理盐水冲洗 🌹 骨腔，收集骨髓液 🌼 。
3. 离心骨髓液，收 🌲 集沉淀细胞。
二、染色 🕷 体 🐠 的 🌹 制备
1. 将沉 💮 淀细胞悬浮于0.075M KCl体液中，孵育30分，钟使细胞膨胀。
2. 离心细胞 🐎 ，弃上清液。
3. 加入甲醇：冰醋酸固定液固定，细胞 🦄 15分钟。
4. 离心细胞 🌷 ，弃上 🦈 清液 🐠 。
5. 加入少许吉姆萨染液（仅 🌷 覆盖细 🪴 胞染），色510分钟。
6. 离心细胞，弃上清液 🐒 。
7. 加入蒸 🕸 馏水，洗涤细胞2次。
8. 用载 🦋 玻片制片，盖玻片封片。
三、染色 🌾 体的 🐎 观察 🦁
1. 在显 🌺 微镜下 🌲 观察染色 🦟 体。
2. 计数染色 💐 体的数量，并，观察染色体的形 🌾 态如染色体 🦋 大小、着丝粒位置和染色单体的数目。
实验结果正常小鼠骨髓 🐈 造血干细胞的染色体数目应为 🐞 40条。
染色体形态应 🐞 清晰可见，着，丝粒位置正确染色单 🌲 体数目正常。
实 🐧 验注 🦉 意 🌻 事项
细胞悬浮 🌾 时应轻柔操作，避免细胞 🕊 破损 🦈 。
固定和染 🌾 色时间应严格控制，以免过度 🐴 或不足。
观察时应选择视 🐕 野 🐱 清晰的区域，并使用合适的放大 🌷 倍数。
3、小鼠 🐈 骨髓造血干细胞形成各种血细 🌻 胞
小 🐵 鼠骨髓造血 🐯 干细胞
定义：位于小鼠骨髓中的多能干细胞 🐛 。
产生 🐎 所有类型的血细胞 🐡 。
分 🐘 化 🐈 途径 🌷 ：
造血干细胞（HSC）分 化为中介祖 🌵 细胞 (IPC)。
IPC 分 化为通用 🐟 祖细胞 (CFC)，包括：
淋巴祖细胞（LC）：产生细胞 🐞 细胞 T 和 🐋 、B 自然杀伤细胞 (NK) 。
骨髓祖 🌴 细胞 🦢 （MNC）：产生粒细胞、单 🐕 核细胞和巨噬细胞。
巨 🦍 核细胞祖细胞（MgpC）：产生 🐅 巨核细胞，进而产生血小板。
调控：受各种 🐎 因素调控，包 🐅 括：
基因表 🐬 达 💮
生长因 🦅 子和细胞因子
微 🍀 环境信号
重要性：生 🦅 成各种血 🌸 细胞，维持血细胞平衡和功能。
在骨髓移植中至关重要，用于重建 ☘ 受损或有 🌼 缺陷的造血 🐡 系统。
研 🌴 究模 🦈 型用 🐬 于了解造血过程和血液疾病。
4、小鼠 🐦 骨髓细胞用什 🐒 么来分离
密度梯度 🐞 离心
