小鼠干细胞转染试剂（基 🌺 于胚胎干细胞的转基因小鼠制备原理与过程）
- 作者: 张颂沅
- 来源: 投稿
- 2025-07-17
1、小鼠干细 🦈 胞转染试剂
小鼠干细 🦅 胞转 🐛 染试剂
小鼠干细胞转染试剂是一 🍁 种化学试剂，用于将外源 DNA 或 RNA 引入小鼠干细胞中。这。些试剂利用靶向脂质体或聚合物载体来携带核酸分子穿过细胞膜并进入细胞质
类型脂质体 🌲 试剂脂质体：是人工脂质囊，可以包裹和传递核酸分子。常见的脂质体试剂包括和 Lipofectamine? TransITLT1。
聚合物试剂聚合物试剂：是带电的聚合物，可以通过静电作用与核酸分子结合并将其传递到细胞 🦊 中。常见的聚合物试剂包括 PEI 和 FuGENE HD。
电穿孔电穿孔：是一种物理方法，它，通过施加电脉冲在细胞 🐒 膜上形成短暂的孔允许核酸分子进入细胞。
选择因素选择小鼠干细胞转染试剂时，需要考虑 🐵 以下因素 🐧 ：
转染效率：试 🐋 剂的转染效率指的是成功将核酸分子引入细胞的细胞百分比。
细胞毒性：试剂不应该对细胞产生严重 🐝 的毒性。
易于使用 🐎 ：试剂应该易于使用并提供可靠的结果 🐈 。
成本 🦉 ：试 🌿 剂的成 🦅 本应该合理。
使用方法小 🐺 鼠干细胞转染试剂的典型使用方法如下：
1. 准备 🐠 细胞悬液。
2. 将 🐳 核酸分子与 🦅 试剂混合 🍀 。
3. 将试剂/核酸混合物添加到细 🦋 胞悬液中。
4. 孵育 🐋 细 🪴 胞以允许转染发生 🐎 。
5. 使用适 🐋 当的方法 🐶 筛选或纯化转 🐝 染的细胞。
应用小鼠干细胞转 🐝 染 🦆 试剂广泛用于各种应用，包括：
基因敲 🌹 除 🦈 或敲入研 🐘 究
干细胞分化 🐞 研究
干 🕸 细 🕷 胞治疗的研究 🐧
蛋白质表 🦍 达研究
2、基于胚 🐺 胎干细胞的转基因小鼠制备原理与过 🐱 程
基于胚胎干细胞的转 🕸 基 🌸 因小鼠制备 🐬 原理
转基因技术是将外源基 🪴 因导入靶细胞，使其表达目的蛋白的技术基。于，胚 🐕 ，胎。干细胞的转基因小鼠制备方 🍁 法是将目的基因导入胚胎干细胞然后将转基因胚胎干细胞注入小鼠胚胎中通过胚胎发育产生转基因小鼠
过程1. 克隆目的基 🐳 因 🐞
从供体基 🦉 因组中分 🦢 离出目的基因。
将目的基因克隆到表达载体 🦄 中，该载 🌷 体含有启 🌸 动子和选择标记。
2. 转染胚胎 🐈 干 🌼 细胞
将带有目的基因的 🐠 表 🐛 达载体转染到胚胎干细胞 🦆 中。
使用 🌿 病毒载体、脂质体或电穿孔等方法 🐶 将转基因 DNA 引入细胞。
3. 选择转基因胚胎干细 🐬 胞 🐋
使用与选择标记相关的 💮 抗生素或筛选剂进行筛选选择，成 ☘ 功整合转基因的胚 🐱 胎干细胞。
培养转基 🕷 因胚胎干细胞，建立稳定的细胞系。
4. 注射胚胎干 🐕 细胞
将筛选后的转基因胚胎干细胞注射到 💮 小鼠 🦟 胚胎的囊胚腔中。
囊胚被移植到假受体 🐝 小鼠的子宫中。
5. 产生转 🌹 基因小 🌿 鼠
转基因胚胎干细胞在小 🦆 鼠胚胎中分化并产生组织和器官。
一些小鼠后代将携带 🕸 转基因，并表 🐈 达目的蛋白。
6. 筛选转 🌼 基因小鼠
使用 🐵 PCR、荧光 🌲 原位杂交 (FISH) 或 Southern 印迹等技术筛选转基因小鼠。
确定 💐 转基因的拷贝数、整合位 🌺 点 💮 和表达水平。
注意事项目的基因的 🐝 表达受整合位点 🕸 的影响。
随机整合可能 🐒 会干扰正常基因的表 ☘ 达，导致意外 🦈 的后果。
基因 🐦 表达水 🦋 平可能因细胞类型和发育阶段而异。
仔细监测转基因小鼠的健康和行为至关重要，以评估转基因的影 🌵 响。
3、小鼠 🐬 造血干细胞分离 🐅 试剂盒
小鼠造血 🦍 干细胞分离试剂盒
简介小鼠造血干细胞分离试剂盒是一种专门用于从小鼠骨髓或其他组织中分离造血干细胞 (HSC) 的试剂盒。这些试剂盒利用抗体或其他标记物，可以 🦟 高效率、特异性地分离出 HSC。
原理造血干细胞分离试剂盒通常使 🌳 用以 🌷 下原理：
磁性分离磁性：珠包被抗体，可以结合特定表面标志物的细胞。将，样 🐎 ，品。与磁性珠孵育后将含有目标细胞的磁性珠吸附到 🦊 磁场上从而与其 🐋 他细胞分离
荧光激活细胞分选荧光 (FACS)：标记抗体与目标细胞 🦋 表面标志物结合。用流式细胞 🦟 仪对样品进行分选，根。据荧光信号选择特定细胞亚群
免疫亲和层析：抗体偶联到层析介质上。通过层析柱流过样品，目，标。细胞与 🐧 抗体结合并被保留与其他细胞分离
应用小鼠造血干细胞分离试剂盒广泛应用于 🐛 以下领域：
造血干细胞研究：分离 HSC 以研究其发育、功 🐼 能和 🕊 分化。
干细胞移植：分离 🍁 移植用 ☘ 的 HSC。
药物筛选：用于识 🌹 别影响 HSC 生长和 🦊 分化的药物。
免疫疗法：分离用于 🌹 免疫 🍁 治疗的 HSC。
优点高效率 ☘ ：可以从复杂的 🌼 细胞混合 🕊 物中获得高纯度的 HSC。
特异 🐧 性：使用特异性抗体或标记物 🐒 ，可以靶向分离 🦋 特定的 HSC 亚群。
便利性：试剂 🦆 盒通常提供优化好的试剂和详细的说明，使 🐅 操作变得简单和可重复。
注意事项抗体交叉反应：确保所使 🌸 用的抗 🦋 体与目标细胞表面标志 🌲 物特异地结合，以避免交叉反应。
细胞活力：分离过程 🐘 可能会影响细胞活力，因此应小心处理样品。
无菌 🌷 操作：造血干细胞的分离和培养需要无菌操作，以 🐈 防止污染。
4、小鼠干细胞转染 🐵 试剂有哪些
化 🪴 学 🦄 转 🌸 染试剂
Lipofectamine? RNAiMAX Transfection Reagent (Thermo Fisher Scientific)
Lipofectamine? 3000 Transfection Reagent (Thermo Fisher Scientific)
Attractene Transfection Reagent (Qiagen)
FuGENE? HD Transfection Reagent (Promega)
TransIT?X2 Dynamic Delivery System (Mirus Bio)
电 🦆 穿孔试 🦆 剂
Neon? Transfection System (Invitrogen)
Amaxa Mouse ES Cell Nucleofector? Kit (Lonza)
Nucleofector? 4D System (Lonza)
病 🐳 毒 🐱 转染试剂 🍁
LentiX? Lentiviral Expression System (Clontech)
RetroX? Retroviral Expression System (Clontech)
TetOn? 3G Inducible Expression System (Clontech)
其他试剂Polybrene (SigmaAldrich)
DEAEDextran (SigmaAldrich)
Chloroquine (SigmaAldrich)
注 🐛 意事项：
不同种类的转染试剂适合不同的转 🐅 染目的和细胞类型。
选择试剂时需要 💐 考虑转染效率、细、胞毒性转基因表达水平和持续时间等因 🐒 素。
转染程序会 🌾 因试剂和细胞类型而 🌷 异因，此在使用前仔细阅读制造商 🐧 的说明非常重要。
