小鼠骨髓干细胞流式（小鼠骨 🦄 髓造血干细胞染色体的制 🐝 备与观察）
- 作者: 李元苓
- 来源: 投稿
- 2025-08-18
1、小 🌳 鼠骨髓干细胞流式 🐕
小鼠骨髓 🕸 干细胞流 🐶 式细胞 🦆 术
流式细胞术是一种强大的技术，用于表征和 🐎 分离特定细胞群。在，骨髓干细胞研究中流式细胞术用于：
识别 🐠 和表征干细 🐝 胞：
Sca1+ cKit+ Lin (SKL) 标 🐼 记：识别造血干细胞（HSC）
CD48 CD150+ Ly6A/E Sca1+：识别长 🌺 期造 🐛 血干细胞（LTHSC）
评 🕸 估干细 🌻 胞 🐶 功能：
评估细胞增 ☘ 殖：使用 EdU 或 🐶 Ki67 标记 🦁
测量细胞分化能 🐟 力：使用髓系 🪴 或淋巴系分化标记 🐯 （例如 Gr1、CD11b、CD3）
分离干 🐎 细胞：
通 🌷 过荧光激活细胞分选（FACS），根据表达的表面标记 🌹 分离特定的干细胞群
使用磁珠分选，根据抗体 🕊 标记分离干细胞
程序：1. 骨髓 🐒 获取 🍁 ：抽取小鼠股骨和胫骨中的骨髓。
2. 细胞制备：将骨髓悬浮在缓冲液 🍀 中。
3. 染色：使用荧光抗体对 🦟 靶标 ☘ 细胞表面分子进 🌼 行染色。
4. 流式细胞术：将细胞悬液通过 🦋 流式细 🐯 胞仪。
5. 数据分析：使用流式 🐞 细胞术软件分析数据，确 ☘ 定感兴趣的细胞群。
6. 细 🌴 胞分选（可 🐦 选）：使用 FACS 或磁珠分选分离特定的细胞群。
优势：快 🐵 速、高 🌾 通量 🌵
可 🐯 以鉴定和表征各 🐘 种干细胞群
允许分离 🦊 特定的细胞群进行进一步研究
局限性：依赖 🌷 于表面标 🌹 记表达
可能存在抗体交叉反 🕸 应或非特异性染色
细胞分选后细胞活力可 🐈 能受影响
2、小鼠骨髓造血干细胞染色体 🐕 的制备与观察
小鼠骨髓造血干细胞染色体的 🦋 制 🦁 备与观察
材 🦉 料 🐼 和试剂 🐱
小鼠 (C57BL/6 或其 🐼 他合适的品系)
RPMI1640 培养 🦈 基 🐧 ，含 🐕 10% FBS
抗凝血剂 (例 🐠 如 🐯 柠檬 🌲 酸钠)
FBS细 🐅 胞表 🐳 面标 🐛 记抗体（例如 Sca1、cKit、Lin）
荧光激 🐼 活细胞分选分选 (FACS) 仪
高渗缓 🦢 冲液 🪴 (75 mM KCl)
固 🐋 定液 (3:1 甲醇：乙 🌴 酸 🦅 )
载玻片荧光显微 ☘ 镜
染 🦈 色液 (例如 DAPI、Giemsa)
方法骨髓造 🐴 血干细胞 🌳 的分离
1. 牺牲小鼠，取 🐟 出 🐛 股骨 🌾 和胫骨。
2. 在无菌条件下 🐱 ，使用 🍁 注射器和针头抽取 🐋 骨髓。
3. 将骨髓加入 RPMI1640 培养基中，冲 🌷 洗 🐠 骨 🌻 骼。
4. 离心 🐝 骨髓悬液除去细胞碎片。
5. 使用抗细 🦈 胞表面标记 🐯 抗体对细胞进行 FACS 分选，以纯化造血干细胞 (HSC)。
染 🌿 色体的制 🦈 备
1. 将纯化的 HSC 重悬于高渗缓冲液中 ☘ 肿胀细胞膜。
2. 固 🐺 定细胞在甲醇：乙酸固定液中。
3. 将 🌳 细胞滴 onto 载玻片并风干。
染 🌳 色体 🐝 的观察
1. 使用荧光染 🐳 料 (例如 DAPI 或染 Giemsa) 色 🌾 染色体。
2. 在荧光显微 🐯 镜下观察染色体。
3. 识 🌷 别和分析染色体异常，例如断裂、缺、失倒位或易位。
注意事项使用无菌技术进行所 🐼 有操作，以 🌴 防止 ☘ 污染。
保持细 🐅 胞悬液在 🐛 4°C，以防止细胞损 🐵 伤。
使用适当的荧光滤光 💐 片 💐 进行显微镜 🐱 观察。
解释染色体异常时必须小心，因为一些异常可 🐎 能是克隆 🦟 性的或人工制品。
3、大鼠骨髓间 🌴 充质干 🦄 细胞流式鉴定
大鼠骨髓间充 🐦 质干细胞（BMSCs）流式鉴 🌷 定
简介：流式细 🦈 胞术是一种用于鉴别、分离和计数特定细胞群体的技术。对于流式鉴定 BMSCs，可用于，表。征其表面标记表达模式从而确认其 🪴 身份并排除其他细胞类型的污染
步骤：1. 细胞 🕊 制备 🦍 ：
骨髓从大鼠股骨 🍀 中分离。
BMSCs 根 🌲 据 🌸 贴壁特性从骨 🐦 髓细胞中分离并扩增。
2. 标 🌷 记抗 🌾 体 🐛 ：
选择针对 BMSC 特异性表 🕸 面标记 🐕 的抗体 🌼 ，如 CD29、CD44、CD90、CD105 等。
将标记抗体孵育细胞 🦅 。
3. 流 🐈 式细胞术分析 🐕 ：
将 🐳 标记的细胞 🌹 悬液通过流式细 🕊 胞仪。
仪器将检测每个细 🐕 胞的发射荧光，并根据标记抗体的 🦢 结合量对细胞进行分类。
4. 数据分 🍁 析 🐝 ：
分析流式 🌾 数据以确定阳性标记细胞的百分比。
根 🍁 据表面标记表达模式（阳性或阴性）对细胞进行表征。
典型结 🦟 果：
理 🌷 想情况下，大鼠 BMSCs 应表现出以 🐅 下表面标记表达模式：
阳性标 🌳 记 ☘ ：
CD29
CD44
CD90
CD105
阴 🦅 性标记：
CD34
CD45
CD11b
CD19
注意 🦍 事 🌼 项 🐟 ：
抗体选择和孵育条件对于获得准确 🌼 的结果至关重要。
适当的对照（如未标记细胞或同型对照对）于排除非特异性结合至关重 🌺 要。
流式数据分析 🌹 应由经验丰富的研究人员进行。
结论：流式鉴定是表征大 🐕 鼠 BMSC 身份 🐡 和排除其他细胞类型污染的宝贵工具。通过分析表面标记表达模式，研究人员可以自信地将细胞鉴定为 BMSCs，并。对其生物学特性进行进一步研究
4、小鼠骨 🌵 髓干细胞流式检测方法
小鼠骨髓干 🍁 细胞 🌷 流式 🦆 检测方法
材料小鼠
PBS（含 🕷 2% FBS）
标记 🦆 抗 🐕 体：
Sca1PE
cKitAPC
FcR Blocking Reagent（FcR 阻 🌾 断 🕷 试剂）
同 🕷 型对 🐡 照抗 🐡 体
流式细 🐒 胞仪
流 🌿 式数据 🌷 分析软件
方法1. 收集骨 🦉 髓 🍁
处死 🌾 小鼠，并使 🌳 用无菌技术将 🐡 股骨和胫骨取出。
用无菌 🐕 PBS 冲洗骨骼，穿刺骨端并冲 🌸 洗 🌿 出骨髓细胞。
2. 单细胞悬 🐋 液制 🐡 备
使用 💐 70 μm 的细胞滤网 🦈 过滤骨 🐧 髓细胞，去除团块和碎屑。
用 PBS（含 2% FBS）洗涤细胞两次，每次离 🦈 心 5 分钟，1200 rpm。
3. FcR 阻断 🐳
将细胞悬液与 FcR 阻断试 🌻 剂（按照制造商的说明）孵育 15 分钟，4°C。
用 PBS（含 2% FBS）洗 🦟 涤细胞一 🐶 次 🐬 。
4. 抗 🐘 体标记 🦁
用 Sca1PE 和 cKitAPC 抗体（按照制造商的 🐺 说明）标记细胞。
孵育 🕊 30 分钟 🦄 ，4°C。
用 🌺 PBS（含 🌳 2% FBS）洗涤细胞两 🌴 次。
5. 流式细胞 🐎 仪检测
将标记后的细胞悬液用 PBS（含 2% FBS）重悬 🪴 ，并用 🦟 流式细胞仪进行分析。
设置适当的 ☘ 门限，以区分 Sca1+ cKit+ HSCs（造血干 🌴 细胞）和其他细胞群 🕊 。
6. 数 🐝 据 🍁 分 🐋 析
使用流式数据分析软件（例如 🐛 FlowJo 或 FACSDiva）对采集到的数据进 🐴 行 🐳 分析。
计算 HSCs 的 🌳 百分比，评估细胞亚群的表达 ☘ 水平和其他 🐬 参数。
提示使用 🦢 高品质的标记抗体，以获得清晰的 💮 流式数据。
保持细胞悬液冷 🦢 藏（4°C），以防止细胞激活和 🐯 分泌因子。
适 🐘 当的补偿设置对 🦁 于准确 ☘ 的流式检测至关重要。
考虑使 🐋 用同型对照抗体作 🌿 为 🦁 阴性对照。
使用门控策略来排除死亡细 🌴 胞和其 🦍 他非目标细胞。
