小鼠 🌸 干细胞制作样本（小鼠脂肪干细胞怎么提取）
- 作者: 李荞映
- 来源: 投稿
- 2025-06-08
1、小 🌾 鼠干细 🐋 胞制作样本
小鼠 🐧 干细胞制备 💐 样本 🌷
材料小鼠 🐯 胚胎
无血 🐠 清培养基（如DMEM/F12）
小鼠胚胎成纤维 🐒 细胞（MEF）
TrypsinEDTA溶液 🪴
冻 🌲 存液 🐕 （如DMSO）
程序1. 胚 🌿 胎 🦉 解剖 🪴
从妊 🐒 娠9.5天 🐧 的小鼠中取出胚胎。
在无菌条件 🐒 下 🐋 ，用无血清培养基冲 🦅 洗胚胎。
用镊子将内细胞团（ICM）与滋养 🦢 层细胞分离。
2. MEF培 🌳 养
在含10%胎牛血清的 ☘ DMEM培养基中培养MEF。
当MEF生 🐘 长至80%汇合时 🦅 ，用TrypsinEDTA溶 🐋 液消化细胞。
3. 干 🦍 细 🍁 胞培养
将ICM转移到预 💐 涂有MEF的培养皿 🐎 中。
加入无 🐶 血 🐺 清培养基，并每23天 🐯 换液。
培养710天，或直到 🕊 干细胞形成集落。
4. 冻 🦅 存 🐵
用TrypsinEDTA溶液消化 🌲 干细胞集落。
将细胞悬浮液稀释在含 🦆 10%DMSO的冻存液中。
将细胞 🐘 分装到冷 🦋 冻 🐧 管中。
将冷冻管逐级 🐯 冻存在80℃、150℃和液 🐡 氮 🐺 中。
结果成功制作 🍀 的小鼠干细胞样本将呈紫红色或亮粉色，并具有胚胎样 🦊 形态。
干细胞样本可用于各种 🦆 研究和 🌵 应用，如分化、转 🌲 基因和干细胞治疗。
2、小鼠脂肪干 🌴 细胞怎么 🐼 提取
小 🐒 鼠脂 🌴 肪干 🕷 细胞提取步骤
材料小鼠
无菌手术器械手术（刀、剪 🌳 刀 🌷 、镊子 🌸 ）
无 🍁 菌培养皿
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)
抗 🪴 生素（青 🐕 霉素链霉素溶液）
胶原 🐶 酶 🐋 消化 🦈 酶
0.25% 胰蛋 🐧 白酶
胎 🌷 牛 🐧 血清 🐴 （FBS）
流式细胞仪或 🌳 细胞 🐎 计 🐳 数器
步骤1. 动 🐼 物 🐴 准备 🦅 ：
杀死小鼠并 🦈 将 🌾 其 🐋 消毒。
在无菌手术区取出腹部脂肪 🐈 组织。
2. 脂肪组 🐧 织 🐳 消化：
将脂肪组织切成 🐠 小块并放入培养皿中。
加 🐋 入含胶原酶 🐱 的 DMEM 并孵育 12 小时，温度 37°C，振 🌵 荡摇床。
过滤 🕸 消化物并离心收集 🐒 细胞。
3. 细 🐘 胞 🕸 分离：
使用 0.25% 胰蛋白酶消化细胞沉淀 🌳 物并孵育 🪴 510 分钟 🌲 ，温度 37°C。
离心收集 🌳 细胞并用含 FBS 的 DMEM 洗涤。
根据需要 🦆 重复分离步骤以获得纯净的 🐦 细胞群体。
4. 流式 🦄 细胞术或细胞计 🪴 数：
使用 🐈 流式细胞仪或细胞计数器分析提取的细胞。
对细胞表面标记物进行表型 🦈 分析，例如 CD45、CD34 和 CD90。
确定细胞计数和 🐦 活力。
5. 培养 🌾 ：
将提取的干细胞接 🐺 种 🐎 到含 FBS 和抗生素的 DMEM 中。
在 🪴 37°C、5% CO2 的培 🐯 养箱中培养细胞。
定期更换培养基 🦉 并监 🌸 测细 💮 胞生长。
提示保持所有 🦢 手术器械和培养材料无菌 🕸 ，以防止污染。
使用 🦄 新鲜、高活力的脂肪组织以获得最 🐺 佳结果。
使用适当 🌻 的 🌻 消化酶和时间以避免对细 🌼 胞造成损伤。
小心操作，以最大限 ☘ 度地减少细胞损失。
3、小鼠间充质干细胞 🦅 大小
通常在 🐎 1020 微米范围内
4、小鼠脂肪 🪴 干细胞提 🌾 取
小鼠 🐘 脂肪干细胞提取
材料：Balb/c 小 🕊 鼠 🐎
无菌手 🌸 术工具
无菌培养 🍁 皿
无菌无血清培养基 🌷 （如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium（DMEM）或 Roswell Park Memorial Institute（RPMI））
胶 🕸 原酶溶液（如 🐴 胶原酶 0.1% IV）
培养基补 🦈 充剂（如抗生素 🐠 和抗真菌剂 🌼 ）
胰 🦟 蛋白酶EDTA 溶液 🦈
细胞 🕷 分离培养 🦄 基（如 FicollPaque 或 🐡 Percoll）
步骤：1. 小鼠手术 🐎 准备
给小鼠麻醉并背 🌵 部剃 🐯 毛。
无菌处理 🐒 手术部位。
2. 脂肪组织 🐺 切 🦄 除
在背部中线切开皮肤，露出皮 🦟 下脂肪组织 🪴 。
用无菌剪刀和镊子小心地切除约 1 克的 🐘 脂肪组织。
3. 脂肪组织消 🐟 化
将脂肪组织转移到无菌培 🦋 养 ☘ 皿 🦟 中。
加入胶原酶溶液 🐎 ，使其完全覆盖脂肪组织。
在 37°C 孵 🐺 育 1 小时，每隔 15 分钟轻轻 🌿 摇晃一次培养皿以促进消化。
4. 细 🌺 胞的分离
消化后，将，培养皿中的混合物过滤到新 🦍 的无菌培养皿中以去除未消化的组织碎 🌹 片。
将混合物 🐋 离心 10 分 🦋 钟，400 x g。
小心地收 🐒 集并 🦆 去除上 🌴 清液。
5. 红细 🐬 胞裂解 🦅 （可 🐵 选）
如果希望去除红细胞，可使用红细胞裂解缓冲液裂解上清液 🐠 。
将缓冲液加入 💐 上清液中并混合。
在 4°C 孵育 10 分钟 💐 。
再 🐶 次离心 5 分钟，400 x g。
收集沉 🌺 淀物并用无菌无血 🐶 清培 🦢 养基洗涤。
6. 细胞计数和 🐅 培养
计 🌵 数提取的细胞 🌺 并接种到含有培养基补充剂的培养皿中。
将培 🌺 养皿放置在 37°C、5% CO2 的孵育箱中。
提示：使用无菌技术进行所有步骤以防 💮 止污染。
使用 🐘 新鲜的小鼠组 🐴 织以获得最佳细胞产量。
可以使 🕸 用流式细胞仪或免疫荧光染色 🐴 来表征提取的 🐴 干细胞。
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