小鼠肠 🐯 道干细胞数量（小鼠肠道干细胞数量怎么 🦊 算）

1、小鼠肠道干细 🐵 胞数量

4500–6000 个 🐧

2、小鼠肠道干 🐕 细胞数量怎 🦢 么算

计算 🐞 小鼠 🐶 肠道干细胞数量的方法 🐯 ：

1. 组织采集和 🦍 解剖：

从小 💐 鼠肠道中采 🐡 集小肠组织，并用 🦢 PBS 冲洗干净。

除去 🌾 肠系膜和粘 🌵 膜下层。

将组织纵 🐠 向切成小块，放入含有 EDTA 的，缓冲液中孵育以分离 🌹 隐窝。

2. 隐 🦅 窝分离：

用机械搅拌 🕸 或酶消化的方法分 🌳 离隐窝。

通过 🐵 过滤或离心收集隐窝。

3. 干细胞分离 💐 标记：

使用抗体对干细胞 🌴 标记物进行免疫磁珠分选或流式细胞术分选。

常用的标记 🌾 物包括 Lgr5、Ascl2 和 Sox9。

4. 细 🦁 胞计 🌻 数：

将分离出的干 🦈 细胞悬液稀释，并在血细胞计数板或流式细胞仪上计数。

计算细胞数量并将其除以组 🐡 织 🐺 的总重量或隐窝数量 🌲 以，获得每克组织或每个隐窝的干细胞数量。

5. 统计 🌺 分 🐶 析 🌿 ：

使用统计软件对结果进行统 🪴 计分析，例如 t 检验或方差分析 🐋 。

注 🌸 意 🐈 事项 🐴 ：

使用新鲜组织或冷冻组 🍀 织进行分析。

优化分离和标记步骤，以 🍁 获得准确的细 🐅 胞计数。

使用 🐱 适当的对照，例如 🐒 未标 🌵 记的对照或其他干细胞群。

3、小鼠肠道干细胞数 🐦 量多少

大 🦊 约 15,000 个

4、小鼠 🐧 肠隐窝干细胞提取

小鼠肠隐窝干 💐 细 🐟 胞提取 🌻

C57BL/6 小 🐴 鼠

2mM EDTA

2% 小 🌷 牛血 🐞 清 🐧 (FBS)

RPMI 1640 培养 🦆 基

弹性蛋白 🌲 酶 🦋 (2.4 U/mL)

胶原 🦄 酶 IV (1 mg/mL)

70% 乙 🐒 醇 🌾

1. 小鼠 🐡 安乐 🌿 死

将小 🍀 鼠用二氧化碳麻醉 🦊 ，然后颈部脱臼 🦁 。

2. 肠道的移除和 🐵 纵向切 🦅 割

通过腹中线切 🐞 口 🌼 切开小鼠腹部，取出肠道。

从回肠 🐱 盲部到十二指肠，纵向将肠道切成两半 🌴 。

3. 脱 🌷 粘 🐟 膜

将 🐧 肠道切成小段，加入 💐 含有 2mM EDTA 的 PBS 中孵育 30 分，钟室温。

用镊 🌵 子将粘膜从肠壁上剥离。

4. 酶 🐳 消 🐦 化 🦅

将粘膜组织切碎后加入含有弹性蛋白酶和胶原酶 IV 的 RPMI 1640 培养基 🐱 中。

在 37°C、100 rpm 下孵育 30 分钟 🐘 。

5. 机械 🦉 分离 🐬

通过 70μm 细胞过滤网过滤细胞悬液，以去除未消 🐞 化的组织块。

用 PBS 冲洗 🦁 滤网，收集滤液。

6. 离心 🌵 和重 🌸 悬 🐘

以 🌴 300 x g 离心细胞 🐧 悬液 5 分钟。

用 2% FBS 的 🌸 RPMI 1640 培养基重悬 🐟 细胞。

7. 培 🦢 养 🐡

将细胞 🐟 接种到培养瓶中，并 🐅 在 37°C、5% CO2 条件下培养。

每 23 天更换培养基一 🐼 次。

在无菌条件下 🌳 进行所有操作。

使用新鲜的 🐠 小鼠 💮 组 🕷 织。

精确控制酶消化时间，以避免损伤 🦍 细胞。

培养过程 🌾 中监 🦈 测细胞生长和活力。