提 🦆 取小鼠的干细胞实验（从小鼠 🪴 肝脏中提取dna实验）
- 作者: 陈沫一
- 来源: 投稿
- 2025-07-21
1、提取小 🍁 鼠的干细 🐛 胞实验
小 🌵 鼠 🐠 干细胞 🐡 提取实验
材料：小 🦊 鼠 🦉 胚胎或组 🕊 织
培养基胰酶
细胞分离剂（例 🐯 如 FicollPaque）
培养皿移液管
显微镜
步骤：
1. 小鼠胚 🦟 胎 🌴 或组织获取
根据实验 🦉 目的，从妊娠期小鼠中获取胚胎或从成年小鼠中获取组织 🐟 样本。
2. 组织解 🍁 离（对于组织样本）
将组织样 🐼 本切 🍀 成小块。
在含 🌷 胰 🌹 酶的培养基中消化组织 🐶 块 3060 分钟。
用培养基终止消化，然后过滤细胞悬液以 🐧 去除组织碎片。
3. 细 🦁 胞 🐱 分 🕸 离
将细胞悬液 🐴 分层到细胞分离剂中（例如 FicollPaque）。
离 🐵 心管以 🐧 分离出含有干细胞的细胞层。
4. 细 🦋 胞培养
收集富含干细胞的 🦄 细胞层并转移到含有干细胞生长因子的培养基中。
将细胞培养在培养皿或 🐛 培养瓶 🌵 中，并置于 37°C，5% CO2 的培养箱 🦍 中。
5. 干细 🍀 胞鉴 🌸 定 🍀
通过流式 ☘ 细 🦊 胞 🐝 术分析细胞表型标记物（例如 SSEA1、Oct4、Nanog）来鉴定干细胞。
也可以进行 🦟 分化实 🦄 验来确认 🦋 干细胞的多能性。
注 🌺 意事项 🌷 ：
使用无菌技术 🍁 进行所有步骤。
优化胰酶消化时间和 🌹 细胞分离剂的使 🦆 用量以 🌼 最大限度提高干细胞产率。
提 🦋 供特 🪴 定 🐳 的生长因子和培养条件以维持干细胞的未分化状态。
2、从小鼠肝脏中提取dna实 🍁 验 🐺
从小 🌼 鼠肝脏 🐶 中 🐱 提取 DNA 的实验
材 🌵 料和设 🐕 备 🌸 ：
小鼠肝 🐛 脏组织
液氮研钵和 ☘ 研杵
蛋 🌵 白 🦈 酶 🌼 K
TrisEDTA 缓 🌲 冲 🦈 液
苯 🦅 酚氯 🦢 仿 🐬
异丙醇70% 和 🐝 100% 乙 🌼 醇 🐋
去 🐘 离子水 🐒
微量移 🌾 液器
离心机涡 🐛 旋振 🐕 荡器 🐞
水浴步骤：
1. 收集和准 🐧 备组织
将小鼠 🐎 肝脏组织 🌳 快速冷 🌴 冻在液氮中。
使 🐕 用研钵和研杵将冻结的组织研磨成粉 🐎 末。
2. 裂 🐝 解 🦊 组织
将研磨的组织转移到一个离心 🐝 管中，并加入含 0.1 mg/mL 蛋白酶的 K 缓 TrisEDTA 冲液。
将溶 🌵 液在 56°C 的水浴中孵育过夜，以裂 🐎 解细胞和消化蛋 🪴 白质。
3. 去除 🐠 蛋 🌳 白质 🌼
将孵育后 🦅 的溶液加入等体积的苯酚氯仿溶液中，并 🌵 涡旋混合。
离心 🐛 溶液，将上层含 DNA 的水相转移 🐅 到一个 🦟 新离心管中。
4. 沉 🐕 淀 🐝 DNA
在水相中加 🦍 入 0.6 倍体积的异丙醇，并涡旋 🍀 混合 🌴 。
离心 🌷 溶液，收集 🐱 沉淀的 🐠 DNA 凝胶。
用 70% 乙醇洗涤凝胶，并 🕸 用 🌸 乙醇 100% 脱水。
5. 溶 🌵 解 🌲 DNA
将脱水的凝 🌷 胶溶解在 🌼 去离子水中 🦁 。
根据需要调整 DNA 浓度 🐝 。
6. 定量 🌷 和定性分析
使用分 🐕 光光度计 🐋 定量 DNA 浓度。
电泳 🌹 凝胶可用于定性分析 DNA 的完 🐬 整性。
注意：在整个实验过程中 🌲 必须保持无菌条件。
蛋白酶 K 是强腐蚀性物质，佩 🐬 戴 🦢 适当的手套和护目镜。
苯酚氯仿是有毒溶剂，必须 🕸 在通风良 🐵 好的环境 🐎 中使用。
3、提取小鼠dna的步骤 🐧 及原理
小鼠 DNA 提 🦉 取步骤
1. 样 🐒 品准 🐬 备
组织样本：肝脏、脾脏、肌肉 🦈 等
血液样 🌴 本：EDTA 抗凝管
2. 裂 🍀 解 🦢
使用细胞裂 🌷 解缓冲液，如缓冲液 SDS 或 🦈 缓冲液裂 🦈 解细胞 CTAB ，。
裂解条件取决于组织类型和提取方 🐎 法。
3. 酶 🐅 消化
加入蛋白酶 K，如 K，胰蛋白酶孵育以消化蛋白质 🌹 。
孵育条 🌾 件取决于组织类型和酶的活性。
4. 去除蛋白质 🦅
加 🦁 入酚氯仿异戊醇 🐼 混合物，通过离心分离 🌷 蛋白质和 DNA。
重复此步 🐡 骤直 🍀 至上层清液为透明。
5. DNA 沉 🐴 淀 🐠
加入等体积异丙醇或乙醇，在 20°C 沉 🐠 淀 DNA。
离 🐟 心收集 DNA 沉淀。
6. 洗 🐛 涤 🐶
使用 70% 乙 🐅 醇洗涤沉淀，去除盐分和杂 🌳 质 🐯 。
离心去 🐘 除乙醇。
7. 复 🐕 溶 🦅
将沉淀的 DNA 复溶在 TE 缓 ☘ 冲液或无菌水中。
原理小鼠 DNA 提取的原理是利用细胞裂解和酶消化来释放 DNA，然后通过 🐵 酚氯仿 🦈 提取和乙醇沉淀去除蛋 🌳 白质和杂质。
细 🐳 胞裂解裂解：缓冲液破坏 🌾 细胞膜和细胞 🐒 核膜，释放出 DNA。
酶消化：蛋白 🕷 酶消 🦟 化 K 组织中 🐴 的蛋白质，释放 DNA。
酚氯仿提取酚：和氯仿能够 🌳 与蛋白质形成复合物，通过离心将蛋白质和 DNA 分离。
乙醇沉淀乙醇：通过脱水作用使 🐴 沉淀 DNA 出来，而其他杂质仍然溶解。
4、小鼠肝细胞的提取 🦋 及培养实验
小 🌳 鼠肝细胞的提取 🦊 及培养实验 🌾
材料雄性 C57BL/6 小鼠 🌼 (68 周龄)
无 🦍 菌手术 🌲 器械
肝脏 🐳 灌 🌼 洗缓冲 🐡 液 (HBSS)
胶 🐋 原 🌺 酶 🌳 IV (1 mg/ml)
无 🌺 无 🦆 Ca2+、的 🪴 Mg2+ HBSS
培 🌷 养基 🌻 （例如 DMEM）
补充剂（例如果 🌸 胶蛋白、胰、岛素转铁 🌻 蛋白）
抗生素 🌸 （例如青霉素、链霉素）
培养 🌷 板培养 🪴 、瓶 🕷
方法小鼠 🦉 肝 🌳 细胞 🦆 的提取
1. 处 🐯 死小 🐅 鼠并将 🐞 其消毒。
2. 在 🦉 无菌手术环境下，打开腹腔并暴露肝脏。
3. 用 HBSS 灌洗 🌳 肝脏以清除 🌹 血液。
4. 将肝脏切成小块并转移到含有胶原酶 IV 的无 🦋 无的 Ca2+、中 Mg2+ HBSS 。
5. 在 37°C 温 🐵 和孵育 30 分钟，每分钟 10 轻轻摇动一次。
6. 用 HBSS 停止反应并过滤细胞 🐞 悬液以去除肝脏碎片。
7. 用离心沉 🌳 淀细胞，然后用培养基重悬细胞。
小鼠 🦍 肝 🌺 细胞 🌳 的培养
1. 将细胞接种到涂有胶 🌳 原蛋白的培养 🌹 板或培养瓶中。
2. 在 🐯 37°C、5% CO2 培养 🐟 箱中 🐼 培养细胞。
3. 每天更换 🐘 一半的培 🦉 养基 🦉 。
4. 定期监测细胞生长和健康 🦍 状 🕷 况。
补充说明使用无菌技术进 🐧 行所有 🐳 步骤至关重要。
确保培 ☘ 养基中含有所 🦅 有必要的补充剂和抗生 🐳 素。
细胞应在 🌵 37°C、5% CO2 的培养箱中培养。
培养 23 天后，细胞通常会贴壁并 🦄 增 🐛 殖 🐎 。
培养的肝细胞可用于各种研究目的，例如药 🌳 物代谢、毒性研究和基 🍀 因 🐳 表达分析。
