给小鼠打干细胞浓度（小鼠 🐈 脂肪干细胞 🌼 怎么提取）
- 作者: 马洛祈
- 来源: 投稿
- 2025-06-04
1、给 🦆 小鼠打干细胞浓度
给小鼠注射 🦅 干细胞浓度
材料：干细胞悬浮 🦋 液
注射器针头
麻醉剂
手套
安全防护 🌳 眼 🦉 镜
步骤：1. 准备 🌼 小鼠 🦉 ：
用麻 💐 醉剂将小 🕸 鼠麻醉。
为小鼠剃毛，露出注射 🐶 部位。
2. 准备干细胞 🦅 悬浮液：
将干细胞 🌺 悬浮液 🦆 稀释到所需的浓度。
将悬浮液轻 🦁 柔涡旋，以 🐘 防 🌹 止沉淀。
3. 装载注 🦉 射器 🦆 ：
使用合适的针头 🦉 装载注射 💮 器 🐡 。
将干细胞 🌴 悬浮液吸入注 🌷 射器。
4. 注射 🌿 干细胞：
戴上手套和防 🐯 护眼镜。
选择合适的注射部位（例如，尾静脉、腹腔 🐺 ）。
将针头刺入注射部位 🐳 ，确 🐈 保针头正确放置 🐳 。
缓慢注 🐋 射 🐡 干细胞 🐛 悬浮液。
5. 注射后 🦟 护 🐦 理：
取 🌷 出 🌾 针 🐵 头。
用棉 🐛 签按压 🌳 注射 💐 部位以止血。
监测小 🐅 鼠是否有任何异常反应。
注 🐎 意事 🦊 项 🌸 ：
确 🦋 保 🐒 使用 🦋 无菌技术。
小心处理小 🐛 鼠，尽量减少应激。
在进 ☘ 行注射之前，请咨询有经验的 🐯 兽医或研究 🦟 人员。
处置所有废物，包括注射器、针，头和棉 🐘 签以防止感染。
2、小 🦈 鼠脂肪 🐈 干细胞怎么提取
小 🐱 鼠脂肪干 🐬 细胞提取步骤
材料：小鼠
消毒试 🦢 剂（75%酒 🐅 精 🐋 ）
手术器械（剪 🕊 刀、镊 🐅 子）
PBS 缓冲液 🦢
胶原 🦅 酶溶液 🪴 （0.2%）
培养基 🐞 （DMEM/F12 补 🌸 充 10% FBS）
培养皿细胞过滤 🌼 器 💐 （100 μm）
离心机红 🌵 细胞裂解缓冲 🐋 液
步骤：1. 准备小鼠：麻醉小鼠 🌼 ，并用消毒剂清洁手 🐱 术 🐯 部位。
2. 取出脂肪组织：在手术部位切开一个小切口，暴露皮下脂肪组织。用。镊子小 🐯 心翼翼地分离并取出部分脂肪组织
3. 切碎脂 🐠 肪组织：将脂肪组织用手术 🐎 剪刀切成小块（约 12 mm3）。
4. 消化脂肪组织：将切碎的脂肪组织转移到含胶原酶溶液 🐺 的培养皿中。在 37°C 振荡孵育 30 分钟，每分钟 10 翻转。一次培养皿
5. 过滤：用 100 μm 细胞过滤 🐼 器过滤消化后的混合物，以去除未消化的组织碎片。
6. 离心：将过滤后的悬液在 4°C、1200 rpm 下 🌳 离 🦄 心 🐈 10 分钟。
7. 去 🐟 除 🐱 上清液：小心去 🐟 除上清液，但保留沉淀。
8. 红细胞裂解（可选）：如 ☘ 果需要去除红细胞，将，沉淀重悬于红细胞 🐳 裂解缓 🐠 冲液中并在室温孵育 5 分钟。
9. 离心：再次离 🐕 心悬液，并去除红细胞裂解缓冲液。
10. 重 💐 悬：将细胞 🐱 重悬于培养基中，并接种到 🌷 培养皿中。
11. 培养：将细 🌴 胞置于 37°C、5% CO2 的培养箱中培养。
说明：提取的脂肪干细胞 🌳 数 🌹 量因小鼠大小和脂肪组织量而异。
胶原酶消 🦅 化时间 🌷 和温度应根据 🦈 具体情况进行优化。
提取的 🐬 细胞可以进一步分离和 🐡 表征。
3、小鼠间 🐶 充质干细胞大小
大约 🌳 1020 微米 🦟
4、小鼠 🍀 脂肪干细胞提取
小鼠 🍀 脂肪干细胞提取
材料：小鼠（68 周龄 🌸 ）
手术 🪴 拖 🐋 盘和无菌 🐈 器械
0.9% 生 🦢 理 🐺 盐水
脂肪组织切割 🌷 刀 🍁
离心机培养基 🐦 （例如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM，含 🐳 10% 胎牛血 🐞 清）
抗 🐯 生 🌿 素（例如青 🦉 霉素链霉素）
步骤：1. 麻醉小鼠：向腹膜 🐧 内注 🐘 射异氟烷或其他麻醉剂。
2. 准备手术区域：剃 🦁 除小鼠腹部的毛发，并用 70% 乙醇擦拭 🦉 皮肤。
3. 切 🦢 开腹部 🌾 ：沿着腹部中线 🦁 做一个约 12 cm 的切口，小心不要损伤内脏。
4. 摘取脂肪组织：使用脂肪组织切割刀小心地剥离脂 🕊 肪组织，避免 🐕 损伤血管或肠道。将脂肪组织。放在无菌培养皿中 🐴
5. 洗涤脂肪组织：用 0.9% 生理盐 🦢 水重复洗涤脂肪 🐯 组织 23 次，以去除血液和其他杂质。
6. 酶促消化：将脂肪组织转移到含胶原酶溶液的无 🐝 菌培养皿中。摇匀，在的 37°C 孵化器中孵育 3060 分，钟。以消化脂肪细 🐎 胞
7. 离心分离：消化后，将 🦆 ，脂肪组 🐈 织 🦟 悬浮液转移至离心管中在 1500 rpm 下离心分 10 钟。
8. 收集脂肪干细胞：小心地吸取离心后的上清液脂肪干细胞（悬浮液）。将悬浮液。转移至新的离心管中 🌷
9. 再离心：在 🕊 1500 rpm 下再次离心 10 分钟。
10. 重悬细胞 🐛 ：小心地去除上清液，用培养基重悬细胞。
11. 计数 🌳 和播种计数：细胞数量，然后以所需的密度将细胞播种在 🌳 培养皿或培养 🌳 瓶中。
提示：使用无 🌸 菌技 🌾 术进行整个过程。
保 🐦 持脂 🌺 肪组织温度在 37°C，以确保细胞活力。
根据实验目的调整酶 🦟 促消 🌸 化的时间和浓度。
细胞分离后立即使用或冷冻 🌹 保存。
