小鼠原代细胞取材 🐅 和培养的步骤（小鼠肝细胞原代培养实验原理 🐘 ）
- 作者: 李诗施
- 来源: 投稿
- 2025-07-09
1、小鼠 🌵 原代细胞取材和培养的步骤 🐧
小鼠原代细胞 🐶 取材和培养步骤 ☘
材料：小鼠
无菌 🐠 剪刀和镊子
无 🐟 菌 🐝 培 🌺 养皿
生 🐱 理 🐴 盐水
完全培 🐺 养基（含有血清和抗生素）
胰 🐒 蛋白酶 🐴
步骤：1. 小鼠 🐛 麻 🐝 醉 🕊
给小鼠注射 🌷 麻 🌻 醉剂，如戊巴比妥钠或 🌲 异氟烷。
2. 取 🐬 材 🍀
用无菌剪刀剪开小鼠的 🌲 皮肤，暴露需要 🌴 取 🌷 材的组织。
用无菌镊子小心取出组织 🐶 ，并 🐠 放入无菌培养 🕊 皿中。
3. 清 🦄 洗组 🐴 织 🌲
用生理盐水冲洗组织，去除血液和其 🦄 他杂质。
4. 切割 🍁 组织 🌳
用无菌剪 🐘 刀 🐦 将组织切成小块。
5. 消化 🐅 组织 🐯
将组织块放入含有胰蛋白酶的培养 🕊 基中。
在 37°C 孵育 1020 分 🌷 钟，直至组织分解 🦢 成单细胞悬液。
6. 离 🐛 心并收 🐈 集 💮 细胞
将细 🌸 胞悬液离 🐬 心 5 分 🐕 钟，1200 rpm。
弃去上清液 🌺 ，重悬细 🌳 胞于新鲜的完全培养基中。
7. 计 🦉 数和播种细胞
用血细胞计数器计数 🐅 细胞 🦟 。
根据所需细胞密度，将细胞悬 🌿 液播种到新的培养皿或培养瓶中。
8. 培养 🕊
将培养皿或培养瓶置于 37°C、5% CO? 的细胞培养箱中 🌳 。
定期更换培养基 🌺 ，一 🕸 般每 23 天一次。
提示：使用无 🐋 菌技 🐒 术进行整个过 🕊 程。
根据所取 🌷 组织的类型，可能需要使用不同的酶或消化条件。
最佳的培养条件可能因细胞类 🕸 型 🐎 而异。
定期监测培 🐯 养物，检查细胞生长情况和污染。
原代 🦄 细胞的培养寿命有 🐟 限，需要 🐯 定期传代。
2、小鼠 🕊 肝细胞原代培养实验原理
小鼠肝细胞原代培养实验原理 🐳
原代培养是指直接从活体组织中分离 🌺 和培养的细胞。小。鼠肝细胞原代培养是一种通过分离 🕊 和培养小鼠肝脏组织获得功能性肝细胞的方法实验原理 🐱 主要如下：
1. 肝脏获 🕸 取和分 🐳 离：
从健康小鼠 💮 中取出肝脏。
使用胶原 🌷 酶或其他蛋 🐡 白酶将肝组织消化成单细胞悬液 🌻 。
通过 🐟 离 🐈 心分离分离肝细胞 🐡 。
2. 细 🌸 胞培养：
将分离的肝细胞悬浮在富含营 🌵 养物质的培养基中。
培养基 🦆 通常含有血清、激 🌾 素和生长因子，以支持肝细胞的 🕷 生长和分化。
细胞 🦟 培养在无菌条件下进行，通，常在培养箱中温度为 37°C，CO2 浓度为 5%。
3. 细胞 🐶 粘附和生 🐬 长 💐 ：
肝细胞会粘附到培养 🐅 皿或 🐟 培养瓶的表面 🌹 。
它们开 🐕 始增殖，形成单层细胞。
细胞培养 🐞 需要定期更换培养基和去除废物。
4. 功能评 🐝 估：
原代培养的肝细胞通 🐦 常会保留许多其在体内具 🪴 备的功能，例如：
代 🐦 谢解 🐬 毒
蛋白质合 🐠 成 🦅
胆汁 🐝 生成
可以通过各种实验 🌹 方法评估这些功能，例如：
药 🌼 物代谢研 🦅 究 🦉
蛋白质表 🌲 达分 🐬 析
胆汁 🐛 盐 🐵 分 🐋 泌测定
优点：原代培养的肝细胞比细胞系更接近 🐯 其在体内的状态。
它们保留了许多肝脏特异性功能 🌼 。
它们可用于研究肝脏 🐺 生理、毒、性代谢和疾病等方面。
缺点：原代培养 🍁 过程比较复杂，需要较高水平的技术。
肝细 🐱 胞在 🍁 培养中存活时 🌼 间有限。
随着培 🦆 养时间的 🍀 延长，细胞可能会失去一些其功能。
3、小鼠原代 🐋 细胞培养实验报告
小鼠原代细 🌵 胞培养实验 🌹 报告
目的建立小鼠原代细 🌾 胞的 🐧 培养体 🌼 系
评估培养细胞 🐅 的形 🌻 态和增殖特征
确定 🌵 最 🐝 佳培 🦅 养条件
材料 🌼 和 🐵 方法
细胞来源小 🐠 鼠脾脏
培养 🕸 基和试剂 🌻
RPMI1640 培养基，含 10% FBS、1% 青霉素/链 🐺 霉 🌹 素 🐕
胰蛋白 🐠 酶EDTA 消 💐 化液
Trypan 蓝 🕸 染色 🐕 液
细胞 🐧 计数 🐯 板
培养程序1. 组织解剖和细胞悬浮液制备：从小鼠中取出脾脏，去除脂肪和结缔组织。将脾脏切碎并 🐝 通过细胞 70μm 滤，网。过滤以 🐘 获得单细胞悬浮液
2. 细胞计数和可行性 🦆 检测：使用 Trypan 蓝染色液计数细胞，并 🐱 计算可 🌵 行细胞百分比。
3. 细胞培养：将细胞悬浮液接种到培养 10 cm 皿中细 🦢 胞，密度为 1 x 10^6 个细胞/mL。
4. 培养条件 🐶 培养：皿置于 37°C、5% CO2 的孵箱中。每 23 天。更换新鲜培养基
评估标准细胞形态：使用倒置显微镜观察细胞 🕊 形态。
增殖率：使用细胞计数板统计不同时间点 🦢 细胞数量计，算增殖率。
最佳培养条 🌹 件：根据细胞形态、增殖率 🦟 和可行性，确定最佳培养条件。
结果细胞 🦋 形态：
培养 24 小 🐳 时后，细 🦆 胞开始 ☘ 贴壁并呈圆形或梭形。
培养 72 小时后，细，胞开始 🐶 形成单层并出现细小的细胞突起。
培养 🌹 14 天后，细，胞形成致密 🐛 的单层细胞密度 🐯 较高。
增殖率：细胞在培养后 3 天内快 🐋 速增殖。
7 天后，细胞增殖 🕸 速率逐渐下 🐕 降。
14 天后，细胞 🐘 增殖基本停止 🍁 。
最佳 🕸 培 🐱 养 💐 条件：
培养基：RPMI1640，含 10% FBS、1% 青霉 🦈 素/链霉素
细胞密 🦟 度 🐒 ：1 x 10^6 个细胞/mL
培 🌸 养 🌳 温度：37°C
CO2 浓 🐦 度：5%
讨论我们成功建立了小鼠原代细胞的培 🕸 养体系培养细胞。表。现。出正常的细胞形态和增殖特征确定的最佳培养条件将有助于我们进行后续的 🍀 细胞功能研究
还有一些问题需 🐱 要进一步解决：
细胞异质性：原代细胞培养 🦋 通 💐 常包含多种细胞类型。可以使用免疫表型 🦉 或荧光激活细胞分选（FACS）来。分离特定细胞群
培养稳定性：原代细胞在培养中可能会失去其原始功能。需要定期监测细胞活力和功能，并。采取 🦢 措施保持培养的稳定性
免疫原性原：代细胞可能 🌳 会对宿主产生免疫反应可。以。考虑使用同种或自体细胞来减轻免疫原性
通过解决这些问题，我，们可以进一步优化小鼠 🦢 原代细胞培养体系为生物医学研究提供一个有价值的工具。
