小鼠神经干细胞简称（小鼠神经干 🕷 细胞的分离及培养实验）
- 作者: 郭洛萱
- 来源: 投稿
- 2025-05-28
1、小鼠神经干细 🐞 胞简 🌴 称
NSC2、小 🐱 鼠神经 🦟 干细胞的分离及培养实验
材料小 🌾 鼠胚胎 🕊 （E14E16）
无 🦅 血清 🐅 培养基 🐧 （DMEM/F12）
神 🦄 经生 🐕 长因 ☘ 子（NGF）
表 🦆 皮 🐦 生长因 🐛 子（EGF）
纤 🌺 维 🐳 蛋白原
凝血酶培养板 🐦 和细胞培养瓶
方法1. 小鼠神 🐈 经干 🌴 细胞的分 🌼 离
在无 🐼 菌条件下，收集小鼠胚胎。
去除头部和内 ☘ 脏。
解剖脑组织，将其置于含有无血清培养 🌼 基的 🐦 培养皿中。
机械研磨脑 🐦 组织直至形 🦁 成细胞 🌾 悬液。
过滤 🌾 细胞悬 🌸 液去除组织碎片 🦈 。
2. 神 🍀 经球 🦍 形成 🐬
将细胞悬液转移到 🌷 经多聚赖氨酸包被的培 🌲 养板中。
在无血清培养基中培养 710 天，期间 🍁 每天 23 更换一次培养基。
神经干细胞将形成神经球，这是由神经干 🕊 细胞 🐺 神 🦄 经、祖细胞和神经元组成的聚集体。
3. 神 🌴 经 🌵 球 🦁 解离
从培养基中收 🌴 集神经球。
用无钙无镁的 PBS 洗涤 🐅 神经球。
加 🐳 入解离酶（如胰蛋白酶或 Accutase）并孵育 1520 分钟。
用无 🌻 血清培养基终止解离反应。
过滤细 🌿 胞悬液去除未解离的神经球。
4. 神 🦅 经干细胞 🐱 培 🌼 养
将解离后 🕸 的细胞悬液转移到含 10% 胎牛血清的无血清培养基中。
加入 💐 NGF 和 🕸 EGF 以促进神经干细胞增殖和分化。
在 37°C、5% CO2 的条件下培养神经干细胞 🦟 。
每隔 🐟 23 天更换 🐞 培养 🐠 基。
5. 神经 🪴 干 🐶 细胞鉴 🦢 定
使用免疫细 🌿 胞化学染色或流式细胞术检测神经干细胞标志物，例如 Nestin、Sox2 和 CD133。
功能鉴定：诱导神经干细胞分化为 🐈 神经 🐱 元和胶质 🌹 细胞。
注意事项使用无菌 🌷 技术 🌹 进行所有操作。
培养 🦊 基中加入抗生 🐺 素以防止 🐈 细菌污染。
确保培养基 🐅 的 pH 值和渗透压稳定。
细胞培养过程要定期监测细胞生 💮 长和健康状况。
