小鼠干细胞悬 🦋 浮培养（小鼠干 🌵 细胞悬浮培养实验报告）
- 作者: 张朵荔
- 来源: 投稿
- 2025-06-12
1、小 🌷 鼠干细 🐯 胞悬浮培养
小鼠干细 🐱 胞悬浮培养
简介小鼠干细胞悬浮培养是一种在非贴壁环境中维持和扩增干细胞的技术。与贴壁培养相比悬浮培 ☘ 养，具有以下优点：
减 🐴 少 🐝 基底膜和基质的影响
促 🌴 进细胞 🐯 分化
方便细 🐴 胞收集和传 🦄 代
材料鼠胚胎 🌹 干细胞 (ESC) 或诱导多能干细胞 (iPSC)
干细 🐘 胞培养基：含 🌴 白细胞介素白细胞介素6 (IL6)、和11 (IL11) 的 LIF 无血清培养基 🌷
悬浮培养用细胞分离瓶 🌲 或超滤 🕸 器
胰蛋 🐧 白酶或乙二胺 🐅 四乙 🦋 酸 (EDTA)
培 🦁 养 🌴 箱 🦍 （37°C，5% CO2）
方法1. 细胞解离：将贴壁培养的小鼠干细 🐯 胞用胰蛋白酶或 🐕 解离 EDTA 成单细胞悬液。
2. 细胞计数和接种：将细胞计数并接种 🐶 到悬浮培养用细胞分离瓶或超 🐯 滤 🦈 器中细胞，密度为 12 x 10^5 个细胞/mL。
3. 悬浮 🌺 培 🦟 养：将细胞置于培养箱中，每 23 天更换培养基。
4. 细胞增殖和传代 🌲 细胞：将形成聚集的悬浮球。当球体直径达到 100150 微米时将，其传代。
5. 传代：收集悬浮球并解离成单细胞悬液，然后重新 🐝 接种到新的 🐘 细胞分离瓶或超滤器中。
提示选择合适的干细胞培养基 🐯 ，以促进 🌵 干 🦅 细胞的自更新。
定期更换培养基以 🐯 去 🦁 除代谢废 🐠 物和补充营养。
监测细胞形态并根据需要调整培 🐟 养条件 🌴 。
熟练掌握 🌼 细 🕸 胞传代技术 🌿 ，以维持干细胞的稳定性。
应用小鼠干细胞悬浮培养 🦍 可用于：
干细 🌸 胞研 🌸 究
组织工程 🐞 和再生 🦆 医学
药 🌵 物筛选 🌷
分化 🕊 研究
2、小鼠干 🕸 细胞悬浮 🐺 培养实验报告
小鼠干细胞悬 🦄 浮培养实验报告
摘要本实验旨在建立小 🐞 鼠干细胞的悬浮培养体系，并优化培养条件。我，们。成。功地建立了悬浮培养体系并通过调整培养基成分和培养参数实现了干细胞的增殖和分化本实验为小鼠干细胞体外培养和研究提供了 🐡 有价值的工 🌿 具
材料和 🐧 方法
小 🌿 鼠胚 🐒 胎干细胞（mESC）：C57BL/6 品系
培养基：DMEM/F12 补 🐞 充有 20% FBS、1% 戊二醛 💮 、1% L谷 🐧 氨酰胺和 0.1% β巯基乙醇
悬浮培养体系：Spinner 瓶或生物反应 🐒 器，装有培养基和细胞悬 🕷 液
培 🐱 养 🌴 条件 🌺 ：37°C、5% CO2
细胞生长评估 🐶 细胞：计 🐡 数、MTT 检 🐋 测
细胞分化评估 🦊 ：流式细 🐵 胞仪检测特定分化标志物
结果建立悬浮培养体系：将 mESC 接种 🐯 到悬浮培养体系 🐝 中，并培养 7 天。细，胞。成功增殖形成悬浮的细胞团
培养基优化：通过调整 FBS 浓度、戊二醛浓度和 β巯基乙醇浓度优化，了培养基成分优化。后。的培养基 🐼 支持了细胞的最 🐵 佳增殖
培养参数优化：通过调整培养速度和通气率优化，了培养参数优化。后。的培养参数促进了细胞增殖和维持细 🐞 胞株的 🦋 未分 🐦 化状态
细胞生长评估细胞：计数和 MTT 检测证实了 mESC 在悬浮培养体系中 🐧 的良好增殖能 🐵 力。
细胞分 🌲 化评估：流式细胞仪检 🐵 测证实了 mESC 在悬浮培养体系中保留了分化为三胚层细胞谱系的能力 🦢 。
结论我们 🕷 成功地建立了小鼠干细胞的悬浮培养体系，并优化了培养条件。该体系支持了的 mESC 增。殖，和分化本实验为小鼠 🕷 干细胞体外培养和研究提供了有价值的工具可用于组织 🐵 工程、再。生医学和药物发现等领域
3、小鼠干细胞悬浮培 🌷 养 🍁 原理
小鼠干细胞悬浮 🐺 培养 🌼 原理 🦟
悬浮培养是一种将干细胞在流动培养基中培养的方法，与，传统的贴壁培养 🐛 不同干细胞在悬浮培养中形成三维聚集体或胚状体。该方法主要基于以下原理：
1. 搅拌或振荡提供 🦅 氧 🐛 气 🐡 和营养物质：
悬浮培养中，细，胞不 🕸 断被搅拌或振荡确保氧气和营养物质能够有效地输送到细胞内 ☘ 。
2. 悬浮培养模 🍁 拟体内 🐘 环境 🦉 ：
胚胎干细胞通常在早 🐬 期胚胎发育期间形成悬浮的细胞团悬浮。培养环境能够模拟体内条件，促。进干细胞的自 🍁 更新和分化
3. 细胞细胞相 🐺 互作 🌹 用 🦊 ：
悬浮培养允许细胞相互作用并形成三维聚集体。这些聚集体更接近体内组织，能。够 🐈 促进干细胞的分化和成熟
4. 减少贴壁 🌻 依赖性 🌼 ：
小鼠胚胎干细胞在贴壁 🐳 培养中通常依赖于基底膜或基质。悬浮培养可以减少这种依赖性，使干细胞。能够在无贴壁 🦅 条件下生长
悬浮培养步骤 🐴 ：
1. 细胞接种：将小 🐘 鼠干细胞接种到悬浮培养基中。
2. 搅拌或振荡：使用搅拌器或振荡器不断 💮 搅拌或振荡培养基，为细胞提供氧气和营养物质 🐯 。
3. 培养：将细胞培养 🐈 在37°C、5% CO2条件下。
4. 培养基更换：定期更换培养基，以去除废 🐛 物和补充营养物质。
5. 干细胞收获：在所需时间点，通过离心或 🌿 过 🐵 滤 🦉 收集干细胞。
优点：增加细 🌹 胞产 🐯 量 🐡
促进干 🌵 细胞分化成熟
减少贴壁依 🦍 赖性 🌷
更接近 🦉 体内环境 🐼
注意：不同的干细胞类型 🪴 可能需要不同的悬浮培养条件。
悬浮培养需要专门的设 🐧 备 🐶 和 🌷 培养基。
细胞聚集体 🐼 的大小和形态需要监测和优化 🍁 。
4、小 🌹 鼠干 🌳 细胞悬浮培养方法
小鼠 🐼 干细胞悬浮培养方法
材料：无 🐝 血清培养基（如 🐦 DMEM/F12）
白 ☘ 蛋 🦄 白（BSA，0.1%）
神经营养 🐺 因 🦄 子 🕸 ：bFGF、EGF（20 ng/mL）
抗生素 🐎 （如青霉 🪴 素、链霉素）
Leibovitz's L15 培养基 ☘
70% 乙 🦅 醇 🐅
仪器：无菌操作 🦁 台
细胞培养瓶 🌺
培养板移液枪
离心机
程序：
1. 细胞分 🕊 离和 🐋 培养 🐡
从小鼠胚胎 🐠 或组 🐦 织中分离干细胞。
将干细 ☘ 胞 🦋 悬浮于无血清培养 🌾 基中，补充 0.1% BSA、bFGF 和 EGF。
将细胞接种于无菌培养 🌹 瓶或培养 🐧 板中，每毫升培养基接种 15 x 10^6 个细胞。
2. 悬 🐝 浮 🦈 培 🐯 养
将培养物放入 🕸 培 🕊 养箱中，在 🦋 37°C 和 5% CO2 条件下培养。
每 23 天 🦈 换液一次，移除 🌵 培养基并补充 🐶 新鲜培养基。
3. 传 🦄 代
当 🐡 细胞密度 🐯 达到 8090% 时，需要 🐘 传代培养。
将培养物用 0.25% 胰蛋白酶溶 🌴 液消化 510 分钟，轻轻吹打 🐈 细胞 🌲 悬浮。
在离心机中以离心 300 x g 分 🌷 5 钟，去除上清液。
用培养基重悬细胞，接种到新的培养瓶 🐒 或培养板中。
4. 冷 🦉 冻保 🦈 存
当细胞生长达到 🐘 对数生长期时 🐝 ，即可 🌷 冷冻保存。
将细胞 🌳 用 Leibovitz's L15 培养基洗涤 🐶 两次 🦋 。
用 10% DMSO 培养基重悬细胞，以每毫升 🐯 15 x 10^6 个细 🌺 胞的密度装入冷 🐎 冻管。
将冷冻管缓慢冷冻至 80°C，然 🐠 后转移至液氮中。
5. 复苏 🐧 培养
从液 🌵 氮中取出冷冻管，快速解冻。
将细胞转移至培 🦅 养瓶或培 🌷 养板中，补充新鲜培养基。
轻轻 🐘 吹打细胞悬浮，然 🌷 后在培养箱中 🌴 培养。
注意 🦢 事项 🦢 ：
使用无菌技术进行所有 💮 操作 🐺 。
培 🕷 养物 🦋 应定期检查污 🐈 染。
悬浮培养应在 🐴 逐渐转速下离心，以避免 🦋 损伤 🪴 细胞。
细胞传代的次数应控制 🦍 在次 20 以内以，确保细胞保持健康和增殖能 🦈 力。
