小鼠 💐 心脏干细胞培养（小鼠心脏干细胞培养实验报告）
- 作者: 张婉若
- 来源: 投稿
- 2025-06-09
1、小鼠心 🐛 脏干细胞培养
小鼠 🌹 心脏干 🪴 细胞培养
材料：新鲜 💮 小鼠 🌸 心脏
无血 🐒 清培 🦉 养基 🕸
胰 🐋 蛋白 🌳 酶 🐬
胶原酶抗生素抗真 🐞 菌剂
培养 🐶 板和培养瓶
细胞计 🐅 数 🌼 器
显微镜步骤：
1. 心 🦅 脏分 🐵 离 🌻 ：
取出一 🌹 颗新鲜小鼠心脏，置于无菌培养皿中。
用镊子 🐯 小心去除冠状动脉和心瓣。
2. 组织消 🐯 化 🐅 ：
将 🦄 心脏切 🐅 成小块。
在 🦆 无血清培养 🦁 基中加入胰 💐 蛋白酶和胶原酶。
将心脏块加入酶溶液中，在 37°C 孵育 1 小，时 💮 每 20 分钟吹打一次。
3. 细胞分 🦆 离 🕷 ：
将消化后的组织通过 40 微米细胞滤 🌸 网过滤。
用 🌷 无血 🦆 清培养基冲洗细胞 🌹 悬液。
4. 细胞计 🌲 数和播种：
使用 🐅 细胞计 🐵 数器计数细胞。
将细 🦊 胞 🐈 播种在含有 🌷 无血清培养基的培养板或培养瓶中。
每平 🕷 方 🐺 厘米播种 510 万个细胞 🐺 。
5. 培养条 🌼 件：
将细胞培养 🐵 在培 🐝 养 💮 37°C、5% CO2 箱中。
每 🌹 23 天更换 🌼 培养 🐶 基。
6. 心脏干细胞 🐎 的鉴别：
使 🌵 用免疫 🦁 细胞化学或流式细胞术鉴别心脏干细胞。
已知 🐞 心脏 🌲 干细胞标志物包括 cKit、Sca1 和 PDGFRA。
提示：使 💮 用新鲜小鼠心脏很重要，因为冷藏或冷冻会影响细胞存活率。
严格无菌操作以防止 🌺 污染。
培养基应补充 🐈 抗生素抗真菌剂 🐼 以防止细菌或真菌生 🌿 长。
培养心脏干细胞需要耐 🐶 心和细致的 🐳 护理。
2、小鼠心脏干细胞培养实 🌷 验报告
小鼠 🐳 心脏干细胞 🐋 培养实验报 🐯 告
实验目 🦈 的 ☘ ：
建立小鼠 🌲 心脏 🐛 干细胞培 🐒 养体系。
探 🐠 讨心脏干细 🐠 胞扩增和分化的最佳 🐝 条件。
实验材 🐞 料 🦟 ：
小鼠心脏 🕸 组织
DMEM/F12 培养 🦈 基
牛 🕸 血清 🦅 白蛋白 🐘 (BSA)
胰 🐼 蛋白酶
胶 🐯 原酶 🦄 IV
抗 🦊 体：ckit、Sca1、CD31、CD45
实验方 🐅 法 🐎 ：
1. 小 🦟 鼠心脏组织提取
从 68 周龄小 🌼 鼠中取出 🦍 心 🐬 脏。
去除 🌼 所有脂肪和结缔组织。
洗涤 🐝 心脏 🍁 组织并切碎成 🦅 小块。
2. 酶 🍁 解 🌹
将组织块放入含 🐡 有胶原酶 IV 的消化 🐅 液中 🐎 。
在 37 °C 下 🐈 孵育 1 小时 🐶 ，每 20 分钟搅拌一次。
过滤 ☘ 细胞悬浮液并离心收集细 🐈 胞。
3. 免疫磁珠分 🐎 选
使用 ckit 和 Sca1 抗体标 🐠 记心脏干 🌹 细 🐶 胞。
使用免疫磁珠将 🌿 阳性细胞分 🌵 选出来。
4. 培 🌸 养
将分 🦈 选后 🐎 的心脏干细胞接种至含有的 BSA 培 DMEM/F12 养基中。
在 37 °C、5% CO2 培养箱 🌼 中培养 🐼 细胞。
5. 培 🌴 养条件 🌴 优 🐶 化
测试不同培养基组合 🐬 、生长因子和氧气浓 🦉 度对心脏干细胞 ☘ 扩增和分化的影响。
6. 表型 🦄 分析 🐕
使用流式细 🐟 胞术分 🐱 析 🐋 心脏干细胞的表面标志物，如 ckit、Sca1、CD31 和 CD45。
进行免疫荧光染色以检测心脏干细胞分化为心肌 🦊 细胞 🍀 或内皮细胞的标志物。
结果：成功 💮 建立了稳定的 🌼 心脏干细胞培养体系。
最佳 🌺 培养条 🕷 件为培养 DMEM/F12 基，含 10% BSA，在 5% O2 浓 🐞 度下培养。
心 🐘 脏干细胞在 🐡 体外 🦍 可以扩增超过 10 代。
心脏干细胞可以分化为心肌细胞和内 🐶 皮细 ☘ 胞。
结论：建立了一套 🦋 有效 🐱 的 🌸 心脏干细胞培养体系。
确定了心脏干细胞扩增和分化的最佳培养 🦍 条件。
本研究为进一 🐳 步探索心脏干细胞的功能和治疗潜 🦟 力奠定了基 🌻 础。
3、小鼠 🐝 心脏干细胞培养多 🐧 少钱
小鼠心 🐳 脏干细胞培养的成 🦍 本 🕊 取决于以下因素：
实验室的位置和 🌵 设备：培养设施和设备的质量和可 🐋 用性会影响成本。
培养基和试剂培养：小鼠心脏干细 🌿 胞所需的特定培养基试剂和、生长因子成本因供应商而异。
培 🦟 养规模：小鼠心脏干细 🐘 胞培养的规模（例如培养皿的数量或细胞数量）会影响成本。
培养时间：小鼠心脏干细胞培养所需的 🐼 时间会影响所需的材料和人工成本。
人工成本：技术人员或研究人员培养和维护细胞所 🐴 需的工资和福利费用 🐎 。
根据这些因素，小鼠心脏干细胞培养的成本可能 🦈 在以下范围内：
小型培养 🐎 （几个培养皿）：5002,000 美元
中型培养 🐱 （几 🐯 十 🌳 个培养皿）：2,00010,000 美元
大型培养（数百 🌷 或数千个培养皿 🦊 ）：10,00050,000 美 🌾 元或更多
需要注意的是，这，些成本仅为估计值实际 🐦 成本可能因具体情况而异 🕊 。
4、小鼠心 🐠 脏干细胞培养方法
小 🦁 鼠 🐼 心 🐯 脏干细胞培养方法
材料：小 🌿 鼠心脏
Hanks'平衡盐溶 💐 液 🐞 (HBSS)
胰 🌲 蛋白酶 🐠 消化液
胶 🐈 原酶 🌺 II 型
DMEM/F12 培 🐅 养 🐒 基
胎 🐒 牛血清 🌷 (FBS)
营养物 🦟 质 🐟 补 🐎 充剂
抗生 🐴 素抗/真菌剂 🌾
设备：无菌台
玻璃培 🦅 养 🍁 皿
移液枪孵化器
显微镜
步骤：
1. 心 🐕 脏分 🪴 离
在无菌条件下 🌷 ，处死小鼠并取 🌲 出心脏。
用 HBSS 冲洗 🦉 心脏 🦈 ，除去血液 🐅 。
2. 组 🐬 织 🐝 切碎 🦊
将心脏切成小块（约 🌴 1 mm3），放入包 🐋 含 HBSS、胰蛋白酶和胶原酶 II 型的消化液 💐 中。
孵育 3060 分钟，每分钟 15 搅，拌一次以促进 🐝 消化。
3. 过滤和离心 🐠
将消化液过滤通过 40 μm 筛 🌷 网，除去组织 🌷 碎 🐵 片。
离心细胞悬 🦍 浮液 5 分 🐯 钟 🦋 ，1200 rpm。
4. 重悬 💮 和培养
用含 🐶 FBS、营养物质补充 🪴 剂和抗生素抗/真菌剂的 DMEM/F12 培养基重悬细胞。
将细胞接种在预先 🐬 涂覆有明胶的培 🐞 养皿中。
培养在 37°C、5% CO? 的孵化器中 🌸 。
5. 更 🌷 换培养基
每 23 天更换 🦁 培养基 🌲 一次。
6. 分离心脏干 🦢 细胞
培养 710 天后 🐞 ，细，胞将形成球形团块称为 🌸 心肌球 🌷 。
用胰 🐡 蛋白酶 🌳 消化心肌球，将 ☘ 细胞分离成单个细胞。
使用流式细胞术或免疫标 🐳 记对心脏干细 🦢 胞（如或细胞 ckit+ 进 Sca1+ 行）分离。
注意事 🐯 项：
始 🐋 终在 🦊 无菌 🪴 条件下操作。
胰蛋白 🦋 酶和胶原酶 II 型是强力酶，需要谨慎使 🐬 用。
定期更换培养基 🦊 以保持 🌾 细胞健康。
心脏干细胞的生长速度 🐡 因小鼠品系和 🕸 培 🌼 养条件而异。
